国家自然科学基金(90409020)
- 作品数：28 被引量：320H指数：15
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- 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化脂质过氧化相关蛋白表达的动态变化及一贯煎的干预效应被引量：6
- 2012年
- 目的 探讨四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化脂质过氧化相关蛋白表达的动态变化及一贯煎的干预效应.方法 Wistar雄性大鼠57只,其中模型组39只,正常组18只.模型大鼠腹腔注射50％的CCl4橄榄油溶液（1ml/lg）,每周2次,共9周.造模3、6周后,随机抽取正常及模型大鼠各6只,处死作动态观察.其余模型大鼠随机分为模型组15只及干预组12只,模型组大鼠在8周时处死4只观察成模情况.第7周开始,继续造模的同时,干预组用一贯煎（2.682 g/kg）蒸馏水稀释灌胃,1次/d,共计3周.用药3周结束后,处死大鼠,检测肝功能、肝组织羟脯氨酸（Hyp）和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱甘肽（GSH）活性,以及热休克蛋白70 （HSP70）、血红素加氧酶-1（HO-1）、转铁蛋白（Transferrin）、过氧化还原酶（Prxd）6、肝脏型脂肪酸结合蛋白（L-FABP）等的表达.计量资料采用单因素方差分析,计数资料采用Ridit分析. 结果 （1）与对照组比较,模型组大鼠6、9周时肝组织MDA含量显著升高[（4.23±0.45） nmol/mg比（2.22±0.59）nmol/mg; （6.29±1.23） nmol/mg比（2.22±0.59） nmol/mg,F值分别为60.13、66.99,P值均＜ 0.05]；SOD活性显著降低[（196.94±39.20） U/mg比（264.50±30.44）U/mg,F=11.12,P＜ 0.05; （152.21±51.65） U/mg比（264.50±30.44） U/mg,F=23.11,P＜0.01]；GSH含量显著降低[（48.47±7.27） nmol/mg比（60.74±9.04） nmol/mg,F=6.71,P＜0.05;（37.89±9.01） nmol/mg比（60.74±9.04）nmol/mg,F=24.06,P＜0.01]；与9周模型组比较,干预组MDA显著降低[（4.25±0.86） nmol/mg比（6.29±1.23） nmol/mg,F=19.52,P＜ 0.01],SOD显著升高[（198.35±46.48） U/mg比（152.21±51.65） U/mg,F=4.65,P＜0.05],GSH显著升高[（53.73±7.54） nmol/mg比（37.89±9.01） nmol/mg,F=19.23,P＜0.01]；（2）与正常组比较,9周时模型组大鼠HSP70蛋白表达量升高（1.21±0.06比0.58±0.07,F=166.87,P＜0.0l）,HO-1蛋白表达量也升高（1.11
- 陶庆王晓柠慕永平冯琴彭景华刘平付文卫张文萌胡义扬
- 关键词：肝纤维化脂质过氧化作用四氯化碳一贯煎
- 一贯煎对CCl_4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响被引量：10
- 2012年
- 目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。
- 曹健美陶庆慕永平冯琴彭景华刘平胡义扬
- 关键词：一贯煎肝纤维化基因表达
- 基于均匀设计分析黄芪汤活性组分抗二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化的配伍作用被引量：28
- 2011年
- 目的筛选古典方剂黄芪汤抗肝纤维化的有效组分及配伍作用。方法 (1)4周内给大鼠腹腔注射二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)12次制备肝纤维化模型,于造模第3周首日开始给药干预至4周末。采用均匀设计对黄芪汤中4种组分(分别为黄芪总皂苷、黄芪总黄酮、甘草酸、甘草总黄酮)以4因素8水平安排给药;以肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性为观测指标,采用逐步回归法分析其抗肝纤维化效应的最优组方。(2)组分复方的再验证:模型制备及给药方法同上,采用上述实验获得的组分复方,与原方对照,观测大鼠肝组织胶原染色、Hyp含量及血清肝功能等变化。结果通过均匀设计研究,确定最优组方为组分复方(黄芪总皂苷、甘草酸的配伍比例为164:48),并得到有效验证。与模型组比较,组分复方及黄芪汤均可显著改善肝纤维化病理组织学变化,显著降低肝组织Hyp含量、血清ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05);组分复方在降低肝组织Hyp含量及降低血清ALT活性方面均优于其分别单用组(P<0.05),降低血清ALT活性的作用优于黄芪汤原方(P<0.05)。结论黄芪总皂苷和甘草酸是黄芪汤发挥抗DMN大鼠肝纤维化作用的有效组分;两个组分配伍在降低肝组织胶原沉积及降低血清ALT活性方面具有明显的协同效应。
- 仝欣陈高峰陆雁宁冰冰刘佳李风华李医明郑青山孙明瑜刘成海胡义扬徐列明刘平
- 关键词：肝纤维化均匀设计黄芪汤
- 基于肝组织差异蛋白质组解析黄芪汤治疗二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化的效应机制被引量：19
- 2010年
- 目的:基于肝组织差异蛋白质组表达解析黄芪汤治疗二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)大鼠肝纤维化的效应机制。方法:4周内给大鼠ip DMN 12次制备肝纤维化模型,成模后停止染毒,随机分为模型对照组与治疗组,治疗组以黄芪汤ig 2周;双向凝胶电泳(2-DE)分离肝组织总蛋白,用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱和肽质量指纹图谱分析鉴定部分差异表达蛋白质;蛋白质免疫印迹法及生化学方法对过氧化还原蛋白6(Prdx6)、热休克蛋白70(HSP70)及过氧化氢酶(CAT)活性进行验证。结果:鉴定的18个蛋白中7个与脂质代谢紊乱及过氧化损伤相关,3个与蛋白合成、加工和降解相关,2个与生物转化相关,3个与能量代谢相关。验证的3个蛋白点(Prdx6,Hsp70,CAT)与双向电泳分析结果基本一致。结论:过氧化损伤是DMN诱导大鼠肝硬化形成的重要病理环节,提高机体内在的抗氧化能力、抗氧化应激效应是黄芪汤逆转大鼠肝硬化的主要机制之一。
- 仝欣王高强王磊刘莺孙明瑜刘平
- 关键词：肝纤维化蛋白质组学黄芪汤
- 下瘀血汤对进展期大鼠肝纤维化的抑制作用及其方证探讨被引量：25
- 2006年
- 目的:探讨下瘀血汤对进展期四氯化碳(CCl4)大鼠肝纤维化的干预作用。方法:采用50%CCl42ml/kg体重皮下注射,每周2次;第9周开始随机分为模型对照组、下瘀血汤组及小柴胡汤组(灌胃给药);用药的同时继续CCl4造模至12周末杀鼠取材。观测肝功能、肝组织病理学、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量变化。结果:8周末模型大鼠肝功能显著异常,肝组织Hyp含量显著增加,肝纤维化明显;12周末模型对照组天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-L-谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBil)、Hyp进一步增高,且ALP、GGT、TBil显著高于8周模型对照组(P<0.05)。与12周模型对照组比较,下瘀血汤组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、AST、ALP、GGT、TBil、Hyp显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:下瘀血汤能显著抑制造模因素持续刺激条件下进展期肝纤维化的发展,疗效优于小柴胡汤,方证相关有其病理学基础。
- 慕永平刘平刘莺李风华陈高峰顾宏图都广礼王磊王春树
- 关键词：下瘀血汤
- 肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分的干预效应被引量：5
- 2010年
- 目的探讨肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应机制。方法 75只SD雄性大鼠,采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备继发性胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术组(Sham)仅作胆总管分离,不作胆总管结扎。大鼠BDL术后1周随机分为对照组(M)与干预组(Y组,经灌胃给予黄芪汤组分4周),Sham组于术后1周末随机抽取5只大鼠处死取材,M组分别于术后1、2、3、4周末随机抽取5只大鼠做动态观察,余下各组大鼠均于术后第5周末处死取材。观测肝脏组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织胆管上皮细胞标志物角蛋白-7(CK7)与肝细胞特异性抗原(HepPar)共定位,Western blot检测CK7、HepPar的蛋白表达,IPP软件分析肝组织天狼猩红胶原染色。结果随着造模时间推移,M组大鼠肝组织肝细胞Hep Par阳性细胞逐渐减少(Sham>M1周>M2周>M3周>M4周>M5周),胆管上皮细胞(CK7阳性细胞)及纤维化程度、Hyp含量、CK7蛋白表达均逐渐增加(Sham
- 邱冰峰都金星申定珠陈高峰刘平
- 关键词：肝细胞胆管上皮细胞黄芪汤
- 基于以方测证的四氯化碳所致大鼠肝纤维化模型的证型探讨被引量：19
- 2009年
- 目的在既往发现一贯煎和下瘀血汤对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化和肝硬化模型有显著效应,并从以方测证角度提出该模型可能以"肝阴虚损、瘀血阻络"表现为特征基础上,进一步进行论证。方法采用皮下注射CCl412周诱导的大鼠慢性肝损伤模型,以功效相近的六味地黄丸以及功效不同的茵陈蒿汤作为参比对象,与已证实有抗肝损伤肝纤维化作用一贯煎进行同步治疗观察。在造模第9周起,随机分模型组、一贯煎组、六味地黄丸组和茵陈蒿汤组,灌胃给药4周。观察大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝组织病理变化。实时定量PCR法观察肝组织α白蛋白(Afamin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达变化。结果模型组出现显著的肝损伤和肝纤维化,较之正常组,肝组织Hyp含量显著升高,肝功能显著异常。肝组织Afamin mRNA表达显著降低,α-SMA mRNA表达显著升高。一贯煎可显著降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度(P<0.05),改善肝功能;而六味地黄丸组肝组织Hyp有降低趋势(P=0.09),并显著降低丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,两方均可提高Afamin mRNA表达,降低α-SM AmRNA表达(P<0.05,P<0.01);茵陈蒿汤则无相关药效学效应。结论六味地黄丸和一贯煎的干预效应有一定的"趋同性",支持CCl4所致大鼠慢性肝损伤证属"阴虚"的推测。
- 陶庆孙明瑜冯琴彭景华刘成胡义扬刘平
- 关键词：慢性肝损伤四氯化碳一贯煎阴虚
- 祛瘀和养阴不同功效中医经典方剂抑制CCl_4诱导大鼠肝硬化的作用机制被引量：21
- 2006年
- 探讨了祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎抑制CCl_4诱导的大鼠肝硬化形成的不同作用机制．采用方法为给大鼠先皮下注射CCl_4 3 mL/kg,然后注射50%CCl_4橄榄油溶液2 mL/kg,每周2次,第9周开始随机将大鼠分为模型对照组、下瘀血汤组及一贯煎组,药物干预的同时继续CCl_4诱导建立大鼠肝硬化模型,至12周末取材．检测指标为：肝组织病理学；肝组织羟脯氨酸含量；肝组织α-SMA,CD68,MMP-13,TIMP-1,TIMP-2蛋白表达；MMP-2,MMP-9的活性；肝细胞凋亡指数及Caspase-12,HGF_α蛋白表达．结果显示：(1)与正常大鼠比较,模型大鼠8周时α-SMA,CD68,TIMP-1蛋白表达显著增加,12周时显著高于8周模型对照组；MMP-13,HGF_α,TIMP-2蛋白表达逐渐降低,各时间点相互比较具有显著性差异；MMP-2,MMP-9活性4周时显著升高,8周时较4周略有升高,12周时显著高于8周模型对照组；肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量逐渐增加,且各时间点比较均具有显著性差异．(2)与同期模型对照组比较,干预组MMP-9活性及MMP-13,TIMP-2,HGF_α蛋白表达量均显著增加,其中下瘀血汤组MMP-9,MMP-13显著高于一贯煎组,一贯煎组TIMP-2,HGF_α显著高于下瘀血汤组；干预组MMP-2活性,TIMP-1蛋白表达显著降低,且一贯煎组显著低于下瘀血汤组；一贯煎组肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量显著减少．由此得出结论：祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎均可有效地抑制CCl_4诱导的大鼠向肝硬化发展,下瘀血汤的主要作用在于提高MMP-9的活性及MMP-13的蛋白表达,其祛瘀作用的主要机制是促进胶原纤维的降解；而抑制肝细胞凋亡和肝星状细胞的活化是一贯煎养阴的主要作用途径．
- 慕永平刘平都广礼王磊龙爱华刘莺李风华
- 关键词：肝硬化MMPSTIMPS肝细胞凋亡下瘀血汤一贯煎
- 从辨证论治的思维特征探索证候分类研究的比较参照体系被引量：21
- 2006年
- 从中医辨证论治的思维特征角度出发,通过分析辨证论治的思维过程,疾病、证候、方剂的基本特征,结合现代循证医学的基本原则以及病证结合动物模型的可行途径等方面,探讨建立证候分类研究的比较参照体系。围绕证候病机及其与疾病和方剂的相关性这一中医证候研究的重要科学问题,论述建立以“方剂”治疗效应为比较参照体系的可操作性。坚持突出中医学思维特征与现代科学设计融合的研究思路,以方剂干预治疗效果作为比较参照系统,基于中医以方测证的逆向思维的认“证”方法,不断积累、完善,由此建立具有坚实临床科学基础的证候标准,可能成为当前病证结合、证候研究的有效途径之一。
- 刘平胡义杨倪力强
- 关键词：证候分类病证结合方证相关证候模型
- Thy1.1阳性肝脏卵圆细胞在大鼠肝硬化形成与消减过程中的动态表达被引量：6
- 2005年
- 目的肝脏卵圆细胞(HOC)在二甲基亚硝胺(DMN)致大鼠肝硬化形成与消减过程中表达的动态变化,探讨其病理生理意义。方法应用DMN腹腔注射(4周12次)制备大鼠肝硬化模型,分别于造模后3d、2、4周及终止造模后2,4周处死大鼠取肝组织,进行常规组织学观察,透射电镜下观察HOC 超微结构,免疫组织化学和western blot方法检测Thy1.1的表达变化,应用图像分析法对所标记的HOC进行半定量测定以及光镜下计数细胞数量。结果DMN造模4周大鼠已形成典型的肝硬化;终止造模后2周时肝组织病变较造模4周时有所减轻,终止造模后4周时炎症明显减轻并以不完全纤维间隔为主。Thy1.1 阳性染色细胞正常大鼠肝组织未见到,造模后3 d时可见微量表达,2周时呈散在分布,4周时明显增多,见于纤维间隔周围,终止造模后2周、即第6周时阳性染色显著强于造模4周,大量出现于汇管区,8周时较6周有所减少,表达量基本与4周时相等。阳性染色图像分析、光镜下阳染细胞计数及western blot三者的结果呈一致性。Western blot结果与免疫组织化学观察结果也具一致性。电镜下显示HOC具有形态小,核以卵圆型为主,高的核/浆比例等特点。结论Thy1.1阳性的HOC可能与肝硬化的消减或逆转有关。
- 朱英刘平王磊陆雄
- 关键词：肝硬化肝脏卵圆细胞肝硬化模型正常大鼠阳性染色
