河北省自然科学基金(C2012201106)
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 相关作者：王振山周艳芬倪志华曹振龙郝江叶更多>>
- 相关机构：河北大学上海师范大学中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 腺苷酸环化酶(AC)基因家族在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达被引量：4
- 2015年
- 骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是骨髓中具有多向分化潜能的干细胞,腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)作为第二信使c AMP信号通路的重要组分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亚型表达种类,尚待明了。通过对小鼠BMSCs原代培养条件优化,获得最适培养条件下生长良好的细胞,提取其总RNA并反转录;采用RT-PCR和序列比对分析,鉴定了小鼠BMSCs中AC亚型的表达种类。研究发现:1小鼠BMSCs原代培养:以4.0×106cell/m L的骨髓单核细胞浓度培养,并于4 d首次换液,增殖速度快,可以达到后续实验要求;2原代小鼠BMSCs中AC亚型表达种类分别为AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9。
- 李超杨栋张梦迪周艳芬邓传怀张燕花乔团团王振山
- 关键词：原代培养
- 鲫鱼GABAARβ_3亚基生物信息学分析与同源建模被引量：1
- 2014年
- A型γ-氨基丁酸（aminobutyric acid，GABA）是一类配体门控离子通道型受体，亦为脊椎动物和非脊椎动物的中枢神经系统内最主要的抑制性神经递质GABA的受体，其离子通道上存在氟虫腈等杀虫剂的作用靶点，是医药和农药工作者研究的重点。通过RACE—PCR技术成功获取新基因鲫鱼GABAARβ3的全长（GenBank登录号：KC964110）。序列分析显示该基因核苷酸序列共2767bp，含有1个由502个氨基酸残基组成的开放阅读框，编码蛋白分子量约为56KD。报道了该基因的生物信息学分析和三维结构模拟及其与氟虫腈作用情况，BLAST结果表明，氨基酸序列与其他已知GABAAR岛基因家族成员间序列相似性介于76％～89％之间，并与其他亚族蛋白基因存在很高的同源性。以线虫体内对阿维菌素敏感的谷氨酸门控氯离子通道受体蛋白的a亚基（PDBID：3RHW）作为模板，用DS（Discovery Studio）模拟鲫鱼GABAA鼠亚基的同源五聚体结构，优化结构模型，与农药配体分子做分子对接，计算作用模式和结合能力。研究鱼类GABAAR亚基与农药分子的作用。
- 秦菠张博周艳芬汪小芬曹振龙任天瑞王振山
- 关键词：鲫鱼污染克隆
- 壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探被引量：3
- 2013年
- 目的研究壳寡糖对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响。方法利用金属配位氧化法制备壳寡糖,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的壳寡糖处理不同时间对A549细胞增殖的抑制作用,Wright's-Giemsa染色后观察壳寡糖处理后的A549的形态学变化,利用免疫组织化学法分析壳寡糖对A549细胞中Bcl-2、Bax、Survivin表达量的影响。结果 5.0 mg/ml壳寡糖处理A549细胞48 h后对细胞增殖的抑制率为56.70%。荧光显微镜下观察Wright's-Giemsa染色后细胞的细胞膜褶皱,细胞核固缩,并出现凋亡小体。免疫组织化学法分析表明,壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达。结论壳寡糖对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,推测其可能通过上调Bax和下调Bcl-2、Survivin的表达诱导细胞凋亡。
- 杨欢欢周艳芬武金霞郝江叶倪志华王振山
- 关键词：壳寡糖A549细胞BAX
- 利用SSH方法筛选与鉴定AC3基因缺失小鼠主要嗅觉表皮内的差异表达基因被引量：4
- 2014年
- 腺苷酸环化酶3(Adenylate cyclase 3,AC3)基因在小鼠主要嗅觉表皮(Main olfactory epithelium,MOE)内的嗅觉信号传导中起着重要作用,AC3缺失是否会导致MOE内与之相关的基因发生差异表达,尚待确定。文章利用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)方法,以AC3敲除(AC3-/-)及其同窝出生的野生型(AC3+/+)小鼠MOE为材料,构建了正向和反向两个消减文库,采用斑点杂交对消减文库进行初步筛选,对筛选出的差异表达基因进行序列测定及生物信息学分析,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对其进行验证。斑点杂交筛选获得了386个差异表达克隆,随机选取其中的80个进行DNA序列测定,经序列比对后发现有62个在GenBank上获得了与之相匹配的基因信息,其中24个上调差异表达克隆对应于kcnk3、mapk7、megf11等基因,38个下调差异表达克隆对应于tmem88b、c-mip、skp1a、mlycd等基因。利用Gene Ontology(GO)方法对这些差异表达基因进行蛋白功能注释,发现它们主要集中在分子结合、细胞周期、生物和细胞过程等功能方面。选取其中上调基因kcnk3和下调基因c-mip、mlycd、tmem88b及trappc5进行qRT-PCR验证。结果表明,在AC3-/-小鼠MOE内kcnk3的表达量显著上调,是对照组小鼠的1.27倍,而c-mip、mlycd、tmem88b和trappc5的表达量显著下调,为对照组小鼠的20%、7%、32%和29%。这些基因的功能与K+通道、细胞发育与分化、脂肪代谢和膜蛋白转运等密切相关。推测它们可能与AC3基因共同作用,调节小鼠MOE内的嗅觉信号传导信息。
- 曹振龙郝江叶周艳芬张喆倪志华胡远想刘伟丽李永超Daniel R.Storm马润林王振山
- 关键词：差异表达基因抑制性消减杂交
- 鲫鱼γ-氨基丁酸受体β_3亚基基因克隆及其分析
- 2014年
- γ-氨基丁酸受体(GABAR)主要存在于脊椎动物和非脊椎动物的中枢神经系统(CNS),是氟虫腈、阿维菌素、硫丹和林丹等杀虫剂的作用靶标。为了阐明GABAR拮抗剂类农药影响鱼类安全性的分子作用机理,并研究其与农药分子的亲和作用,运用生物信息学方法,在NCBI基因组数据库中找到已经公布的同源的GABAARβ3亚基基因序列,通过多序列同源比对寻找高度保守区,再根据高度保守区设计特异性引物,通过RT PCR和RACE PCR技术,成功地克隆了鲫鱼GABAR A型β3亚基基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC964110),该基因长2 767 bp,开放阅读框(ORF)为1 506 bp,编码502个氨基酸,与已知的其他物种β3亚基具有高度的保守性。应用qRT-PCR扩增,检测到该基因在鲫鱼不同组织器官的差异性表达。
- 秦菠张博周艳芬汪小芬曹振龙任天瑞王振山
- 关键词：鲫鱼Γ-氨基丁酸基因克隆
- 腺苷酸环化酶Ⅲ(AC3)在非神经细胞内的定位（英文）被引量：2
- 2015年
- 腺苷酸环化酶III(adenylate cyclase III,AC3)最早发现于小鼠主要嗅觉表皮,是c AMP信号通路的组成成分之一,它的缺失可导致小鼠嗅觉丧失、体重增加、雄性不育、母性关爱行为丧失和学习与记忆能力下降等。脊椎动物体内绝大多数细胞具有纤毛,在小鼠大脑神经元中AC3定位于初级纤毛,许多非神经类型细胞也有AC3的表达,然而其与非神经类细胞纤毛的关系尚待确定。该文选择了8种细胞株(2种神经类细胞株、6种非神经类细胞株),对上述问题进行了研究。RT-PCR及其产物DNA测序结果显示,这些细胞中均有AC3的表达。免疫荧光染色结果显示,在IMCD3、293T和BMSCs等细胞株中,AC3与细胞初级纤毛的荧光信号重叠;在A549和He La两种癌细胞株中,AC3也定位在初级纤毛上。该研究结果表明,AC3在多数非神经细胞中也表达于纤毛部位。
- 郝江叶韩绍芳罗影涛杨栋李超张曹振龙胡远想刘伟丽倪志华周艳芬王振山
- 关键词：腺苷酸环化酶免疫荧光染色癌细胞
- 壳寡糖对HeLa细胞和A549细胞自噬性死亡的影响被引量：4
- 2015年
- 为了探讨壳寡糖(COS)对He La细胞和A549细胞自噬性死亡的影响,利用不同浓度COS处理细胞后MTT法检测细胞的增殖抑制情况,采用MDC染色法观察自噬泡的形成,免疫荧光法检测LC3在细胞内的表达,Western-blot分析COS处理He La和A549细胞不同时间后细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ变化。结果表明,5.0 mg·m L-1COS对两种细胞的增殖抑制率最大,分别为52.15%和57.63%(P<0.01)。与阴性对照相比,经COS处理后的细胞MDC染色细胞内荧光强度增加,且阳性信号聚集于核周区域;免疫荧光检测发现LC3阳性颗粒数明显增加,表明细胞内自噬体的数量增多。Western-blot检测分析随着COS处理细胞时间延长,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值逐渐增大,显示细胞内自噬活性增强。由此推测COS能够通过诱导He La和A549细胞的自噬性死亡来抑制细胞增殖,为COS的抗肿瘤作用机制的研究提供理论依据。
- 周艳芬韩绍芳倪志华杨欢欢武金霞王振山
- 关键词：自噬性死亡HELA细胞A549细胞壳寡糖
- 壳寡糖对Hela细胞的增殖抑制与诱导凋亡被引量：1
- 2015年
- 为了明确壳寡糖(COS)对Hela细胞的增殖抑制作用及对凋亡的影响,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测增殖抑制作用,Wrights-Giemsa及吖啶橙-溴乙锭(AO-EB)染色观察凋亡细胞的形态,Annexin V-FITC/PI法检测凋亡率,免疫组化法分析Bax,Bcl-2和Survivin表达量变化.结果显示:不同浓度COS处理Hela细胞均能抑制增殖,5.0mg/mL并作用24h对其增殖抑制率为52.15%(P<0.01).Wrights-Giemsa染色显示细胞形态趋近圆形,贴壁能力减弱,出现凋亡小体.AO-EB染色时细胞出现早期和晚期凋亡现象.AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率为31.75%(P<0.05).免疫组化分析细胞内Bax表达量增加,Bcl-2和Survivin表达量降低.表明COS能够抑制Hela细胞增殖并诱导凋亡,其原因与Bax的上调和Bcl-2与Survivin的下调相关.
- 韩绍芳周艳芬倪志华武金霞王振山
- 关键词：壳寡糖HELA细胞增殖抑制作用细胞凋亡
