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广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0537008-3): 作品数：14 被引量：51H指数：6; 相关作者：黄伟坚谢丽华尹业师冯建远罗廷荣更多>>; 相关机构：广西大学梧州市动物疫病预防控制中心广西中医学院更多>>; 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划广西壮族自治区自然科学基金国家科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

猪圆环病毒2型ORF2截短基因片段真核表达载体的构建及其DNA疫苗的免疫效果被引量：2: 2009年; 为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],将其插入pcD-NA3.0载体中,成功构建了pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H。将纯化后的真核表达质粒转染PK-15细胞后,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的瞬时表达情况。分别用单独免疫和组合免疫的方法免疫小鼠,每只0.15 mg,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中的抗体效价,并分析这两种方法的免疫效果。结果显示,6个片段较短的重组质粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)转染的细胞中均有明显且较亮的荧光出现,而2个片段较长的重组质粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空载体pcDNA3.0转染的细胞中没有荧光出现。在单独免疫组中,这8个片段的真核表达质粒都能刺激机体产生特异性抗体,其中片段较短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比较理想;在组合免疫中,除pcDNA-C-F外,各个真核表达质粒都能产生较高水平且稳定的抗体,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好。表明组合免疫要比单独免疫的效果好。; 张宁李茂宁侯韶毅兰家暖谢丽华黄伟坚冯励韦英益刘芳李军; 关键词：猪圆环病毒2型真核表达重组质粒免疫效果

猪圆环病毒2型广西流行株序列比较分析被引量：1: 2009年; 参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列,设计引物,通过反向PCR技术,从广西部分市区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增9株PCV-2流行株的全基因,并进行了序列测定分析。结果表明,9个PCV-2分离株基因组全长为1767bp或1768bp。同源性比较发现,9个分离株之间的核苷酸同源性为94.6%～99.9%,与GenBank上已发表的国外分离株比较,同源性为94.4%～100%;9个分离株ORF2之间的核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为93.7%～99.4%和93.6%～99.1%;系统发育树显示,其中7个分离株与法国株、新西兰株关系较近,与美国株和加拿大株关系较远;另外2个分离株与澳大利亚株、美国株亲缘关系较近。; 张宁谢丽华何苹萍秦毅斌陈云霞兰家暖廖承球黄伟坚; 关键词：猪圆环病毒2型基因克隆

猪圆环病毒2型ORF2基因片段的原核表达及间接ELISA诊断方法的初步建立被引量：1: 2008年; 根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成3对引物,通过PCR扩增PCV2的3个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到pET-32a载体中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,表达并纯化了重组蛋白。Western-blot分析表明,重组蛋白可以与PCV2阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白初步建立了间接酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,经方阵滴定确定最佳包被浓度为0.24μg/mL,血清最佳的稀释度为1∶40。; 屈素洁何苹萍秦毅斌朱芸陈琼黄伟坚; 关键词：原核表达间接ELISA方法

猪圆环病毒2型核酸疫苗的小鼠免疫保护试验被引量：1: 2010年; 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗在小鼠攻毒试验中的免疫保护效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,扩增出ORF2基因及其截短基因8个片段(A(ORF2)、B(51-100aa)、C(101-150aa)、D(181-235aa)、E(151-200aa)、F(51-150aa)、G(101-235aa)、H(51-235aa)),将其插入到pcDNA3.0载体中,构建出真核表达质粒,并将其转染至PK-15细胞,用间接免疫荧光试验检测其瞬时表达情况。将试验小鼠随机分成9组,其中免疫组7组,阴阳性对照各1组,将纯化的真核表达质粒对小鼠进行组合免疫;二免后,用经处理过的PCV-2 GXWZ-2株阳性病料悬液腹腔注射免疫组和非免疫对照组小鼠,阴性对照组用生理盐水腹腔注射;其后进行体重记录、病理切片制作及PCR检测。结果表明:共有6个真核表达质粒成功在PK-15细胞中表达。在攻毒后的3周内,阳性对照组小鼠PCR诊断均为阳性;免疫组中,部分组小鼠在攻毒后第1周或在第2周为阳性,到第3周时各免疫组小鼠全部为阴性;阴性对照组始终为阴性。免疫组在病理保护学方面明显优于非免疫对照组,非免疫对照组的体重增长速率略低于免疫组和阴性对照组。由此可见猪圆环病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒试验中有明显的保护作用。; 张宁侯韶毅韦英益李茂宁肖爱欢谢丽华刘芳高永锐卢桂娟陆有飞黄伟坚; 关键词：重组质粒间接免疫荧光试验免疫保护效果

猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达: 2007年; 目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上,再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中,用终浓度1 mmol/LIPTG诱导。结果表达产物以包涵体的形式存在,经Western-blot检测表明,表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。表达的重组蛋白为ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。; 屈素洁黄伟坚冯建远朱芸陈琼谢丽华; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因原核表达

288株猪圆环病毒的序列比较及遗传进化分析被引量：4: 2007年; 目的为进一步了解猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)的遗传进化规律,为该病的预防和控制奠定基础。方法对来自世界各国的26株PCV1和262株PCV2的全序列用生物软件进行了核苷酸的同源性比较,并对其ORF1和ORF2进行了核苷酸和推导氨基酸的比较。结果从核苷酸水平来看,PCV1与PCV2明显分为两支,PCV1间分布没有规律,而PCV2间又分为以来自美国、加拿大、澳大利亚的序列为代表的亚型Ⅰ和以来自法国和新西兰的序列为代表的亚型Ⅱ;但从氨基酸水平来看,其分型并没有规律可循。从遗传进化树可以看出,PCV2的分布并没有地域性和时限性。数据统计显示,尽管相隔近十年之久,但其同源性并没有发生太大的改变,可见PCV2相当保守。另外对PCV2的碱基和氨基酸突变位点进行统计发现,PCV2序列间更倾向于碱基的颠换,但并无单个碱基和氨基酸的偏好性。结论PCV2相对保守,地域性和时限性分布不明显。; 尹业师黄伟坚陈琼刘海鹏谢丽华冯建远王爱德; 关键词：猪圆环病毒遗传进化树同源性比较

猪圆环病毒感染的病理组织学和致病机理研究进展被引量：12: 2006年; 近年来,尽管国内外学者在猪圆环病毒的研究方面取得了不小成就,但到目前为止,仍还没有找到有效的方法和措施来控制猪圆环病毒对养猪业的危害。文章对猪圆环病毒的病理组织学和致病机理进行综述,以便能进一步了解猪圆环病毒感染的正确诊断技术,为有效防控猪圆环病毒感染提供科学的参考依据。; 尹业师黄伟坚陈琼刘海鹏谢丽华冯建远; 关键词：猪圆环病毒2型病理组织学致病机理

猪增生性肠炎模型的建立及其病理学研究被引量：1: 2009年; 为了复制猪增生性肠炎病的模型并进行病理学观察，试验将临床检测胞内劳森茵为阴性的6～7周龄非免疫健康仔猪6头随机分为攻毒组（4头）与对照组（2头），攻毒组口服接种猪源胞内劳森菌GXNN株30mL/头·次，对照组口服接种无菌稀释液30mL／头·次。感染后分别于21天和56天剖杀感染组仔猪2头和对照组仔猪1头，观察病理变化并采集病变组织器官。结果表明：感染猪临床上出现短暂的体温升高、轻度腹泻等症状，粪便中检出胞内劳森茵。剖检可见腹股沟淋巴结及肠系膜淋巴结呈灰白色肿胀，肠系膜小血管扩张、充血；回肠黏膜褶皱呈脑回状；肝脏出现局部轻度淤血。组织病理学主要表现为猪回肠、结肠集合淋巴小结增多、增大，腺窝内杯状细胞消失，部分腺窝不成熟的上皮细胞增生，腺窝之间的周围组织有嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润；肝脏的窦状隙有局灶性出血，其他组织器官病变不明显。经过免疫组化和原位杂交试验可见回肠、结肠的腺窝内和腺上皮细胞的胞浆内有染成棕黄色或蓝紫色的菌体。; 韦英益肖爱欢谢丽华杨乃欢黄伟坚王进声; 关键词：猪增生性肠炎病理学

断奶仔猪多系统衰竭综合症的病理组织学观察被引量：6: 2007年; 断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMW S)是由猪圆环病毒2型(PCV 2)引起的一种疾病。对来源于广西各区域15个猪场内经过PCR检测PCV 2为阳性的PMW S病猪的器官组织进行病理组织学观察,结果显示:淋巴结和脾脏中的淋巴细胞明显减少,淋巴滤泡结构消失,其间有明显的组织细胞增生。脾小体结构不明显,有部分病例明显观察到嗜酸性细胞浸润;混合感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的病例其淋巴结尚见有局灶性坏死区以及明显的充血;肺呈支气管周围炎及间质性肺炎变化,肺泡壁Ⅱ型细胞肿胀,变圆,巨噬细胞数量增多,继发细菌性感染的病例在支气管内尚见有明显的嗜中性粒细胞浸润;肝细胞变性坏死,尤其在肝小叶区,见多核聚集现象;肾小管不同程度萎缩、坏死,间质明显水肿。; 韦英益黄伟坚尹业师黄广顺覃继顺; 关键词：组织病理学

广西狂犬病分子流行病学的研究: 本研究从2000年开始从广西各地采集了1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织,通过对这些动物脑组织的PCR检测,分离出42株狂犬病毒株,并对N基因3′端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及...; 熊毅刘棋盘龙波王雯罗廷荣朱伟韦友传陆专灵郭建刚李华明; 关键词：狂犬病 N基因分子流行病学; 文献传递

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