天津市自然科学基金(043609311)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王胜芬赵明辉卢圣栋韩佩珍穆传杰更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠脂肪组织脂联素基因编码区的克隆及序列分析被引量：2
- 2006年
- 目的:克隆小鼠脂肪组织脂联素(ACRP30)编码区基因并进行序列分析。方法:用TRIzol试剂从小鼠脂肪组织提取总RNA,经RT-PCR方法扩增全长的ACRP30cDNA片段,将PCR产物克隆于pGEM-T载体,对重组质粒pGEM-ACRP30进行序列验证。结果:小鼠脂肪组织ACRP30基因编码序列不同于来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列,IRM-2(InstituteofRadiationMedicine-2)小鼠和C57BL/6J小鼠脂肪组织的ACRP30基因编码序列相同。337位点上的碱基A被G置换导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。来自脂肪组织的ACRP30基因编码序列已被提交到GenBankTM数据库,C57BL/6J小鼠的收录编号为AY749429,IRM-2小鼠为AY754346。结论:小鼠脂肪组织ACRP30编码序列是ACRP30序列的新成员,cDNA克隆的构建为进一步的蛋白表达和生物学活性研究奠定了基础。
- 王胜芬韩佩珍卢圣栋穆传杰赵明辉
- 关键词：基因脂肪组织小鼠
- 重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定
- 2008年
- 目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实。将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。
- 王胜芬韩佩珍穆传杰赵明辉卢圣栋
- 关键词：融合蛋白可溶性生物学活性
