国家自然科学基金(31372448)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 一株H3N2亚型犬流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析被引量：3
- 2016年
- 为了解犬流感病毒(CIV)在广州地区的流行和进化情况,本研究从广州市宠物医院采集了230份犬鼻咽拭子样品,接种10日龄SPF鸡胚,进行CIV的分离和鉴定,并对其全基因组序列进行分析。结果表明,从这些样品中仅分离鉴定出一株H3N2亚型CIV A/canine/Guangdong/01/2014(H3N2)。对该病毒株全基因组的遗传进化分析表明,分离株的PB2、PB1、PA、NP、HA、NA、M、NS 8个基因均为CIV,未发生重组;HA和NA基因与我国广东地区分离的H3N2亚型CIV属于同一个分支,氨基酸同源性分别达98.2%和97.0%。本研究结果为明确华南地区CIV的流行进化情况提供了基础数据。
- 闫中山洪马林付橙黄三郑运王丽芳周沛粟硕李守军
- 关键词：H3N2亚型遗传进化分析
- 犬N1ICD基因的克隆与真核表达
- 2018年
- 本研究利用RT-PCR扩增比格犬Notch1基因的胞内域（notch1 Intracellular domain of Notch,N1ICD）,将其克隆到真核表达载体中,在293T细胞中表达,进一步鉴定其分子生物学特征。结果,首次克隆获得犬N1ICD基因,序列长度为2 469 bp,编码822个氨基酸,蛋白质分子质量为87.3 ku。序列分析结果显示,核酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为83.0%、87.9%、86.8%、86.4%、87.4%、83.2%、86.5%、86.3%,进化上与马的关系最近;氨基酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为87.8%、91.5%、89.9%、88.5%、90.9%、87.8%、89.2%、88.7%,进化上同样与马的关系最近。预测的二级结构可能存在63个α-螺旋、65个β-折叠、48个无规则卷曲。本试验成功构建了p3×FLAG-CMV10-N1ICD真核表达载体,为进一步研究犬N1ICD与犬乳腺肿瘤之间的作用奠定了基础。
- 张欣曾伟杰曾伟杰王丽芳郑运王丽芳贾坤李守军
- 关键词：NOTCH1真核表达
- 广东1株H3N2亚型犬流感病毒的分离与鉴定
- 2014年
- 本试验采集一只具有流感临床症状的病犬鼻咽拭子经常规处理后接种SPF鸡胚,分离到一株流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性研究。结果表明,该毒株对1%鸡红细胞的血凝价为26,能被H3亚型流感病毒阳性血清中和,与H1、H5、H7、H9亚型阳性血清和阴性血清无交叉反应。序列分析显示,该毒株的HA和NA基因核苷酸序列分别与犬流感病毒(CIV)H3和N2亚型的病毒株同源性最高。确定该毒株为H3N2亚型CIV,并将其命名为A/canine/Guangdong/01/2011。
- 赵明喜赖芳芳贾坤李华涛李守军
- 关键词：H3N2亚型
- 犬流感病毒重组核蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 为建立H3N2亚型犬流感病毒（cIv）血清学检测方法，本研究利用H3N2亚型CIV重组核蛋白（rNP）作为检测抗原，通过优化反应条件，建立了检测CIV核蛋白血清抗体的间接ELISA方法。通过检测10份SPF犬血清样品确定阴阳性临界值为0．288。该方法检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感毒、犬腺病毒II型、狂犬病病毒、犬弓形虫、犬弓首蛔虫、犬复孔绦虫的阳性血清均为阴性，具有良好的特异性，但与H1N1、H3N8和H9N2亚型CIV有交叉反应。该方法检测H3N2CIV血清抗体的灵敏度为血凝抑制试验（HI）的3～12．5倍；而且其批内批间变异系数为1．85％～6．57％，重复性良好。通过对H3N2CIV攻毒犬血清进行分析，表明该检测方法具有滞后性，检测到CIV抗体的时间晚于HI试验。利用本研究建立的方法和以H3N2CIV为诊断抗原的HI检测方法对450份血清样品进行检测，结果显示该方法对血清样品具有初筛作用，两者阳性符合率为58-3％，阴性符合率为100％。本研究可以结合其它血清学方法为CIV流行病学调查进行快速、高效的检测。
- 李陆涛袁子国孙凌霜涂黎晴闫中山李秀珍李守军
- 关键词：间接ELISA
- microRNA与病毒关系研究进展
- 2015年
- microRNA是一类广泛存在于真核生物细胞内的含20~22个核苷酸的非编码小RNA,它通过与目的mRNA 3′端非编码区的完全或不完全互补使得靶基因降解或翻译受阻。microRNA参与了众多基因的表达,涉及细胞的分化、发育、凋亡,病毒感染,免疫,机体代谢,肿瘤的发生等众多生命过程。microRNA和病毒的关系错综复杂,宿主细胞编码的microRNA可以对自身或病毒基因产生调控从而影响病毒感染,病毒编码的microRNA也可以对自身或宿主基因产生调控从而影响病毒感染,病毒也可以反过来影响宿主microRNA产生和作用。理清这两者之间的关系有助于科研人员发掘新的思路,更好地开展相关科研工作,为科学研究提供理论上的支持。因此,作者综述了microRNA的发现和命名、生成、作用机制,以及当前对于microRNA和病毒相互关系的新观点。
- 胡仁峻涂黎晴李守军
- 关键词：MICRORNA病毒
- 从噬菌体随机七肽库中筛选抗H3N2亚型犬流感病毒多肽的研究被引量：1
- 2015年
- 【目的】以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选出具有抗流感病毒活性的亲和多肽.【方法】运用噬菌体展示技术,以纯化的H3N2亚型犬流感病毒HA1蛋白为作用靶点,从噬菌体随机七肽库中筛选HA1蛋白亲和多肽,并对获得的多肽进行鸡胚水平和细胞水平抗H3N2亚型流感病毒活性验证.【结果和结论】经过4轮体外亲和筛选获得了6条HA1蛋白亲和多肽,6条多肽对H3N2亚型流感病毒有不同程度的抗病毒活性,其中以HA-4的抗病毒活性最强.试验结果表明噬菌体随机肽库技术能够应用于抗病毒研究.
- 叶存栋胡静思贾坤李陆涛刘荣昌涂黎晴孙凌霜李守军
- 关键词：H3N2亚型噬菌体随机肽库
- Let-7a对犬流感病毒诱导细胞凋亡调控作用的初步研究被引量：4
- 2016年
- 犬流感(CI)是由犬流感病毒(CIV)感染犬引起的传染性疾病,感染犬主要表现为急性呼吸道症状。为了探究犬microRNA let-7a对CIV诱导细胞凋亡的调控作用,在体外用CIV对MDCK细胞进行感染,通过AO/EB染色和流式细胞术检测是否能引起细胞凋亡,并用荧光定量PCR测定let-7a的转录水平,最后通过转染let-7a来评价其对于细胞凋亡的影响。结果表明,CIV能够引起MDCK细胞发生凋亡且被感染细胞内let-7a转录下调,而过转录细胞内let-7a则能够有效地抑制病毒诱导的凋亡。研究结果显示,犬let-7a在CIV感染细胞中起着抗凋亡作用,而let-7a的低转录促进了细胞凋亡,并且这一机制可能在CIV感染犬的呼吸道损伤中扮演了一定的角色。
- 胡仁峻涂黎晴孙凌霜贾坤远立国李守军
- 关键词：H3N2MDCK细胞凋亡
