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马铃薯α-淀粉酶在毕赤酵母中的表达、纯化及其酶学性质的研究被引量：1: 2014年; 采用RT-PCR法扩增马铃薯夏波蒂的α-淀粉酶成熟肽基因,将其亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9k上,SacII线性化重组表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建重组酵母GS115/pPIC9k-amy,利用锥虫蓝法筛选获得高活性转化子(GSamyA5),以终浓度为0.5%甲醇诱导该重组菌表达α-淀粉酶,通过Ni^(2+)-NTA agarose亲和层析纯化,并对其酶学性质进行研究。结果表明:该酶的最适反应温度为45℃,40~50℃酶活较稳定,保温50 min,残留相对活力达92.6%;最适反应pH值为6.0,并在pH 6.0~7.0范围内酶活保持稳定。Ca^(2+)、K^+可促进酶反应,以Ca^(2+)影响为最,相对酶活力提高到125%;Cu^(2+),Fe^(2+),Fe^(2+),Zn^(2+)对该酶有显著抑制作用;Mn^(2+),Mg^(2+)对酶有微弱抑制作用,Li^+、Na^+对酶活影响不大。; 王永刚马燕林马建忠马雪青任海伟; 关键词：Α-淀粉酶马铃薯毕赤酵母酶学性质

响应面法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制被引量：11: 2013年; 试验研究了各组分磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250在考马斯亮蓝G-250溶液中的作用及其对测定蛋白质浓度灵敏度和准确度的影响,结合全波长扫描光谱法分析了溶液配制过程中的变色机理。在此基础上,以一系列牛血清白蛋白溶液标准浓度和测定值之间的差值平方和的均方(S值)为响应值,采用单因素试验和响应面分析法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制条件。结果表明,乙醇是用来降低水溶液的极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解;磷酸是为考马斯亮蓝G-250表面电荷发生变化的促进剂;两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,考马斯亮蓝G-250分子在溶液中不同的存在形式使反应体系呈现出从蓝色→绿色→棕红色等颜色变化;响应面优化配制条件为:60 mg/L考马斯亮蓝G-250、50 mL/L 95%乙醇、130 mL/L 85%磷酸时,S值最小值为2.07,即在此配制条件下的牛血清白蛋白测定值与标准值最接近。同时以不同标准蛋白质为试样对所配制的溶液进行准确度和灵敏度试验,结果表明对牛血红蛋白、γ-球蛋白测定准确度和灵敏度较好,对胰蛋白酶、胃蛋白酶灵敏度较差,主要原因是由于蛋白质组成差异所引起的。; 王永刚马建忠马雪青王玉丽苏移; 关键词：磷酸乙醇响应面

拟南芥AtDPBE4基因的分子克隆: 2013年; 本研究采用RT—PCR法扩增拟南芥哥伦比亚型的AtDPBF4基因，克隆至pMD—T载体上，经蓝白班筛选获得阳性转化子（白斑），并测序。结果表明：AtDPBF4基因克隆序列与GenBank中Arabidopsis thaliana bZIP protein DPBF4（AF334209．1）序列同源性100％。; 马建忠刘金鸽王永刚火文; 关键词：拟南芥分子克隆

黑曲霉ZM-8菌株菌丝体中葡萄糖氧化酶活力测定: 2013年; 以黑曲霉（Aspergillus miger ZM-8）真空冷冻干燥菌丝体为材料，经缓冲液提取得到葡萄糖氧化酶粗提液。粗提液经硫酸铵盐析、透析、真空冷冻干燥得到粗酶干粉。利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活性。结果表明：粗酶干粉葡萄糖氧化酶比活力达到1163．08U·mg^-1。; 马建忠刘金鸽王永刚火文; 关键词：黑曲霉葡萄糖氧化酶

水仙内生真菌的分离及抑菌和抗肿瘤活性研究被引量：19: 2014年; 目的分离纯化水仙根茎中的内生真菌,并对分离得到的真菌进行抑菌和抗肿瘤活性筛选。方法用组织分离法分离纯化水仙内生真菌后,以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大肠杆菌Escherichia coli、绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae和人肝癌细胞HepG2作为受试对象,采用滤纸片法和MTT法对内生真菌菌株发酵液的醋酸乙酯提取物进行抑菌和抗肿瘤活性检测。结果从水仙根茎共分离到18株内生真菌,各菌株发酵液的醋酸乙酯提取物对4种供试细菌和HepG2细胞都有抑制作用。在质量浓度10 mg/mL时,SX-R202和SX-S102对大肠杆菌和绿脓杆菌抑菌圈直径分别达到18 mm和20 mm;在质量浓度1 mg/mL时,SX-R201、SX-R202、SX-R203和SX-R204对HepG2细胞增殖抑制率分别为(86.0±1.1)%、(89.8±1.3)%、(62.9±0.9)%和(90.6±1.0)%。结合形态学特征和分子生物学鉴定确定SX-R201为尖孢镰刀菌属Fusarium sp.菌株、SX-R202和SX-R203为青霉属Penicillium sp.菌株、SX-R204和SX-S102为曲霉属Aspergillus sp.菌株。结论水仙内生真菌的抑菌和抗肿瘤效果明显,值得进一步研究。; 杨明俊李娟薛鸿燕王永刚马雪青姚广玉; 关键词：水仙内生真菌抑菌活性抗肿瘤活性代谢产物

水仙内生真菌的分离鉴定及聚类分析被引量：6: 2014年; 目的分离纯化水仙根茎中的内生真菌,并进行菌群组成及其多样性分析。方法采用表面消毒、划线法从水仙鳞茎和根中分离内生真菌,基于形态学特征和核糖体转录间隔区（ITS-rDNA）序列分析,对分离株进行分类鉴定;以内生真菌的多样性指数（H）和均匀度指数（E）为指标,分析水仙内生真菌的菌群组成及其多样性。结果共分离到18株内生真菌,其中16株来自根部,2株来自鳞茎,分别占总分离菌株的88.89%和11.11%。PCR扩增其中14株真菌ITS-rDNA,得到大小约500 bp片段,用BLAST软件对其测序结果进行相似性比对,发现4株为青霉属Penicillium,相似性95%-99%;3株为曲霉属Aspergillus,相似性99%-100%;3株为喙枝孢属Rhinocladiella,相似性为99%;其他4株分别为木霉属Trichoderma、链格孢属Alternaria、赤霉属Gibberella和镰孢霉属Fusarium,相似性都为99%。青霉菌为水仙内生真菌优势菌属。通过构建系统发育树发现这14株内生菌明显分为2大类群,Shannon多样性指数为1.778,均匀度为0.913 7。结论水仙内生真菌菌群组成具有一定程度的多样性和差异性。; 杨明俊李娟王永刚薛鸿燕马雪青杨林; 关键词：水仙内生真菌聚类分析

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国家自然科学基金(31060041)