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从人源大容量噬菌体抗体库中筛选抗生存素抗体: 2012年; 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗生存素(survivin)的人源单链抗体(single chainfragment variable,scFv)并进行鉴定。方法以survivin为抗原,固化在抗原管上,通过吸附—洗脱—扩增过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性噬菌体抗体,并转染HB2151菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导制备成可溶性抗体,采用酶联免疫吸附测定法对其抗原结合活性进行检测,指纹图谱分析法分析抗体基因的种类。结果经过4轮筛选,共获得21个与survivin结合的阳性克隆,其中10个特异性结合的克隆,指纹分析有8种不同的抗survivin的scFv基因,在这8种中有5种获得可溶性表达。结论利用噬菌体抗体库技术获得了特异性的人源抗生存素抗体,为其在今后肿瘤治疗中的应用奠定基础。; 王欲晓解鹏高荣凯杨东玲周丽君; 关键词：生存素噬菌体抗体

盐诱导激酶2对放射损伤后细胞周期检查点中的调节作用被引量：1: 2014年; 目的了解盐诱导激酶2（SIK2）在电离辐射诱发G2/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制.方法 60Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体（pSicoR）构建SIK2的小干扰RNA（shRNA）表达载体,Lipofectamine 2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型.Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3（pH3 Ser10）作为流式细胞检测分子标记物分析G2/M期检测点功能.结果 γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加.成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后（1、2、4、6 Gy）降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高（t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P＜0.05）,γ射线诱发的细胞周期G2/M边界阻滞在照后5、6h被提前解除（=4.341、6.500,P＜0.05）.Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退.结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G2/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性.; 尹姣姣周丽君王豫刘晓丹顾永清周平坤; 关键词：细胞周期组蛋白H3 G2 Γ射线

β-淀粉样蛋白单链抗体表达和纯化条件的优化被引量：1: 2012年; 目的:优化β-淀粉样蛋白单链抗体(scFv)的诱导表达和纯化条件。方法:在固定诱导表达时间和诱导表达温度的条件下,采用不同终浓度的IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析全菌液总蛋白中目的蛋白E3 scFv的表达水平,确定所需诱导剂IPTG的最佳浓度。在目的蛋白结合到亲和层析柱之后,采用不同终浓度的咪唑溶液进行洗脱,通过收集各管洗脱液、Western blot等方法确定预洗脱液咪唑的最佳浓度。结果:E3 scFv在20℃诱导表达18 h时,所需诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L;纯化时,预洗脱液咪唑的最佳浓度为10 mmol/L。结论:通过优化上述条件,我们建立了一个高效表达及纯化E3 scFv的方法,为后续的研究奠定了基础。; 解鹏王欲晓高荣凯周丽君; 关键词：Β-淀粉样蛋白单链抗体表达纯化

60Coγ射线对盐诱导激酶2的诱导表达作用被引量：2: 2014年; 目的探讨电离辐射对盐诱导激酶2（SIK2）蛋白和mRNA的诱导表达作用及细胞周期相关性。方法HepG2细胞用60Coγ射线照射，蛋白质印迹法和实时定量PCR法分别检测细胞的SIK2蛋白和mRNA的表达，胸腺嘧啶双阻滞法同步化细胞，流式细胞术测定细胞周期的变化。结果HepG2细胞2Gy照射后4、6、10h，SIK2蛋白表达显著增加（t=3．00、3．98、4．17，P〈0．05）；10Gy大剂量照射后，SIK2蛋白表达增加的趋势与2Gy一致，但增加的幅度较前者低。2和10Gy照射后SIK2基因mRNA均在10h出现了增加（t=4．54、2．74，P〈0．05）。照后10h出现了细胞G：／M阻滞高峰。利用同步化细胞分析表明，细胞周期不同时相中SIK2mRNA的表达无明显差别。结论2和10Gy照射均能诱导SIK2蛋白表达增加，2Gy的作用更加明显。细胞照射后10h，SIK2mRNA的表达水平增加，但与辐射诱发细胞G2／M期阻滞引起不同时相细胞的分布变化无关。; 谭伟尹姣姣周丽君黄波刘晓丹王豫顾永清让蔚清周平坤; 关键词：电离辐射基因表达 G2 M期阻滞

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国家自然科学基金(81172119)