国家自然科学基金(30760230)
- 作品数：5 被引量：44H指数：4
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- 羟基喜树碱对肝纤维化大鼠肝组织Bax、Bcl-2基因和α-SMA蛋白表达及肝纤维化的影响被引量：15
- 2014年
- 目的考察羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对肝纤维化大鼠肝组织中Bax、Bcl-2基因和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及肝纤维化的影响。方法 64只SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、低剂量HCPT治疗组、中剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组。采用40%四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型。正常组给予生理盐水腹腔注射;3个治疗组在造模同时分别给予0.25、0.5、1.0mg/kg HCPT腹腔注射,3次/周,共8周。各组分别在第8周末取肝脏组织,行H-E、Masson染色观察肝脏组织病理学改变;RT-PCR检测肝脏组织中Bax、Bcl-2mRNA表达并计算Bax/Bcl-2mRNA比值免疫组化染色检测肝脏组织中α-SMA蛋白表达;TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果模型组大鼠出现明显的肝纤维化(Ⅲ期2例,Ⅳ期8例),各HCPT治疗组的肝纤维化程度较模型组减轻(低剂量组Ⅱ期1例,Ⅲ期8例,Ⅳ期1例;中剂量组Ⅱ期7例,Ⅲ期3例;高剂量组Ⅰ期1例,Ⅱ期7例,Ⅲ期2例),差异有统计学意义(P均<0.05)。RT-PCR检测显示模型组Bax、Bcl-2mRNA较正常组升高,而各HCPT治疗组较模型组降低(P均<0.05);模型组Bax/Bcl-2mRNA比值低于各HCPT治疗组(P均<0.05)。免疫组化染色检测显示模型组α-SMA蛋白表达水平高于中、高剂量HCPT组(P<0.05)。TUNEL染色结果显示正常组、模型组无明显阳性染色,各HCPT治疗组均有阳性染色。结论 HCPT对CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型具有防治作用,抑制肝星状细胞活化增殖,上调Bax/Bcl-2mRNA比值可能是HCPT抗肝纤维化的部分机制。
- 邵佳亮胡国信郑洁万赞燕姜瑞娇
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞羟基喜树碱
- 四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究被引量：15
- 2011年
- 目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。
- 邵佳亮万赞燕胡国信
- 关键词：四氯化碳肝纤维化模型
- 羟基喜树碱对HSC-T6细胞增殖与凋亡的影响被引量：10
- 2010年
- 目的探讨羟基喜树碱（HCPT）对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）的增殖与凋亡的影响。方法大鼠肝星状细胞（HSC—T6）和大鼠正常肝细胞（BRL3A）分别在实验组（分别以含HCPT浓度为0．008、0．016、0．031、0．063、0．125、0．25、0．5、1、2、4、8、16、32mg／L的培养液培养）和对照组（单纯培养）体外培养24h。用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况，找出HCPT对HSCT6细胞增殖抑制的最佳作用浓度；流式细胞仪检测细胞凋亡率；透射电子显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化情况；琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段化。多个样本均数的比较采用单因素方差分析，两样本均数的比较采用f检验。结果HCPT对HSC-T6细胞和BRL3A细胞的增殖抑制率随着药物浓度的升高而逐渐升高；当HCPT浓度〉0．5mg／L时，对BRL3A细胞的毒性作用显著增高（P值均〈0．05）；0．5mg／L对HSC-T6细胞增殖抑制作用最大，为HCPT对HSC—T6细胞增殖的最佳抑制浓度。0．125、0．25、0．5mg／L的HCPT作用HSC—T6细胞24h，流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为13．46％±2．42％、26．25％±5．65％、47．05％±8．76％，与对照组（4．89％±1．80％）相比，差异有统计学意义（F=34．24，P〈0．01）。0．5mg／L的HCPT作用HSC—T6细胞24h，透射电子显微镜下可见细胞体积缩小，核仁消失，染色质浓缩聚集成团块状，沿核膜排列等凋亡形态学改变；琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯度带形成。结论HCPT在体外可以明显地抑制HSCT6细胞的增殖、诱导HSC—T6细胞凋亡，作用强度呈剂量依赖性。
- 张一邓群胡国信袁铿袁芳黄艳琴
- 关键词：喜树碱肝星状细胞细胞凋亡
- 肝纤维化非创伤性诊断方法的研究现状与评价被引量：1
- 2011年
- 肝纤维化是一个慢性的、渐进性的过程,其持续发展的最终结果为肝小叶结构改建、假小叶形成,最终发生肝硬化。近年来已认识到,肝纤维化在去除病因和经过治疗后可以逆转,所以早期诊断对肝纤维化的逆转至关重要。该文综述了肝纤维化的诊断方法,重点介绍肝纤维化的非创伤性诊断方法的临床应用价值及其局限性。
- 熊丽娟胡国信
- 关键词：肝纤维化血清标志物超声磁共振成像
- 羟基喜树碱对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白和I型胶原表达的影响被引量：6
- 2012年
- 目的研究羟基喜树碱（HCPT）对大鼠肝星状细胞（HSC）-T6增殖、转化生长因子D1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原表达的影响，探讨HCPT抑制肝纤维化的机制。方法体外培养肝星状细胞-T6，设立空白对照组和HCPT低剂量组（0．25μg／L）、HCPT中剂量组（0．50μg／L）、HCPT高剂量组（0．75μg／L）。四甲基偶氮唑盐比色实验测定细胞增殖的情况，RT-PCR检测转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原基因表达；Westem blot检测转化生长因子D1、α-平滑肌肌动蛋白表达；酶联免疫吸附法检测培养细胞上清液中的I型胶原的含量。组间差异用方差分析，两两比较用q检验。结果（1）HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组4值分别为0．631±0．074、0．469±0．012、0．204±0．001，均较空白对照组（0．793±0．098）降低（F=82．86，P〈0．01）；（2）与空白对照组比较，HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原（0．716ziz0．064、0．611±0．040、0．510±0．014、0．403±0．026）、α-平滑肌肌动蛋白（0．696±0．075、0．579±0．037、0．470±0．024、0．299±0．017）、转化生长因子D1（1．019±0．056、0．835±0．022、0．696±0．055、0．322±0．104）mRNA表达均较显著下降∽值分别为133．304，244．501，100．164，P值均〈0．01）；（3）与空白对照组比较，HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组α-平滑肌肌动蛋白（0．858±0．050、0．620±0．045、0．525±0．042、0．434±0．052）、TGFD1蛋白（0．872±0．053、0．654±0．047、0．545±0．042、0．436±0．039）表达均下降（F值分别为234．56，312．34，P值均〈0．01）；（4）HCPT低剂量组、中剂量组、高剂量组I型胶原含量分别为（168．367±16．453）ng／ml、（141．284±11．731）ng／ml、（132．910±10．048）ng／ml，均较空白对照组（188．733±18．299）ng／ml下降（F=15．49，P〈0．01）。结�
- 胡国信万赞燕邵佳亮张一张伦理龚作炯
- 关键词：喜树碱
