国家自然科学基金(30872141)
- 作品数：10 被引量：59H指数：6
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- PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体构建及干扰Leydig细胞株建立
- 2013年
- 目的:通过靶向过氧化物酶体增殖因子活化受体PPARγ基因阻断,建立稳定干扰Leydig细胞株TM3。方法:采用慢病毒四质粒包装系统构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的Leydig细胞株TM3。结果:经测序证实,成功构建编码表达PPARγ短发夹结构RNA(sh-PPARγ)的慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control。病毒载体转导Leydig细胞株TM3后,荧光显微镜证实细胞转染效率>90%,Real-time PCR测定实验组TM3细胞PPARγ的mRNA表达比未处理细胞下降70%(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。Western blot显示实验组PPARγ蛋白表达量比未处理细胞明显下降(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。结论:成功构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNAi慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control,并成功建立PPARγ表达稳定干扰的小鼠Leydig细胞株TM3,为PPARγ生殖毒性研究提供了新的细胞模型。
- 马明月张磊张玉敏裴秀丛段志文
- 关键词：PPARΓLEYDIG细胞RNA干扰慢病毒
- 青春期前邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯暴露对雌性大鼠生殖发育及过氧化物酶体增殖剂激活受体的影响被引量：11
- 2011年
- 目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)暴露对青春期前雌性大鼠性发育及生殖内分泌功能的影响及其可能机制。方法将40只健康3周龄雌性SD大鼠,随机分成对照组(玉米油)和3个实验组,每组10只。实验组按50、150、500mg/kg DEHP经口灌胃,连续染毒28天。观察阴道开口、乳房发育、第一次发情周期的日龄及体重,于末次染毒24小时后进行阴道涂片,确定动情间期,处死动物。Real-time PCR测定卵巢组织相关基因表达水平;ELISA法检测血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P4)及睾酮(T)水平;通过病理学观察卵巢组织的变化;免疫组织化学法测定卵巢组织中PPARγ的表达。结果 500mg/kg组阴道开口日龄提前,150、500mg/kg组阴道开口时体重增加(P<0.05);150、500mg/kg组芳香化酶(P450Arom)mRNA表达与对照组比较,显著下降;各剂量组与对照组相比,T水平明显下降,150、500mg/kg组FSH、E2水平明显减少,而LH水平明显升高(P<0.05);150、500mg/kg组闭锁卵泡明显增多、黄体数目明显减少;150、500mg/kg组卵泡颗粒细胞和黄体颗粒细胞中PPARγ阳性光密度相对量明显高于对照组及50mg/kg组(P<0.05)。结论青春期前DEHP暴露对雌性大鼠性发育及生殖内分泌功能产生影响,其作用机制可能与激活PPARs有关。
- 马明月张玉敏裴秀丛段志文
- 关键词：生殖发育卵巢青春期前
- PPARs介导邻苯二甲酸酯雌性生殖毒性的研究进展被引量：4
- 2009年
- 马明月
- 关键词：邻苯二甲酸酯PPARS生殖毒性女性生殖健康介导
- 孕期暴露双酚A对子代雌性大鼠卵巢类固醇激素合成的影响被引量：10
- 2015年
- 目的 研究孕期双酚A（BPA）暴露对子代雌性大鼠卵巢类固醇激素合成的影响。方法 选择SPF级3月龄的健康成年SD大鼠,按雌雄比为2∶1同笼配种。取妊娠大鼠20只,随机分成4组,于妊娠第5天~第20天,分别按0,10,50,250mg/（kg·d）BPA进行灌胃染毒。母鼠正常分娩,观察雌性仔鼠生长发育变化至10周龄,确定发情间期后处死动物。ELISA法测定血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）及睾酮（T）水平;实时PCR测定卵巢中类固醇激素急性调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）、细胞色素P450-17α羟化酶（P450-17α）、17β-羟类固醇脱氢酶（17β-HSD）、芳香化酶（P450arom）mRNA的基因表达。结果 出生28~36d期间,50和250mg/kg组体质量与对照组比较明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;各剂量组与对照组相比,T水平明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;50和250mg/kg组与对照组相比,LH、FSH、E2水平明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05））;各剂量组卵巢中17β-HSD mRNA的基因表达与对照组比较明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;50和250mg/kg组P450arom mRNA的基因表达与对照组比较明显降低（P〈0.05）,差异有统计学意义。结论 孕期暴露BPA对子代雌性大鼠卵巢中类固醇激素合成酶的基因表达有一定的影响,可能影响类固醇激素合成,进而影响下丘脑-垂体-卵巢轴的正常调节。
- 马明月张玉敏裴秀丛段志文
- 关键词：双酚A卵巢
- 青春期前DEHP暴露对雌性大鼠机体发育及卵巢脂质过氧化的影响被引量：9
- 2008年
- 目的:研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对青春期前雌性大鼠机体发育及卵巢组织脂质过氧化水平的影响。方法:将40只4周龄雌性Wistar大鼠,随机分成0,50,150,500mg/(kg.d)剂量组。每周连续染毒5天,染毒4周,于末次染毒24小时后进行阴道涂片并处死处于动情间期的动物。用分光光度法测定组织和血中超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)酶的活性和丙二醛(MDA)含量。结果:500?/?剂量组肝脏重量、肝脏系数及肾脏重量高于对照组,差异具有显著性(P<0.05);DEHP染毒500 mg/kg组的卵巢中SOD活性,与对照组和其他剂量组相比显著下降(P<0.05)。DEHP各染毒剂量组卵巢和血中CAT活性和MDA含量与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论:青春期前DEHP暴露对雌鼠的肝脏及肾脏产生损伤作用,DEHP可能对卵巢抗氧化系统有一定影响。
- 马明月张玉敏段志文裴秀丛张亭亭罗金光
- 关键词：DEHP脂质过氧化卵巢
- 卵巢颗粒细胞体外培养体系的建立及DEHP、MEHP对其增殖功能的影响被引量：11
- 2008年
- 目的：建立卵巢颗粒细胞的原代培养体系，探讨邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）及其活性中间产物邻苯二甲酸单（2-乙基）己酯（MEHP）对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。方法：选用21～25日龄未成年雌性Wistar大鼠，皮下注射孕马血清（PMSG），48h后断头处死，收集卵巢颗粒细胞，在DMEM—F12培养液中培养。卵巢颗粒细胞原代培养体系建立成功后分别将不同剂量的DEHP（1μM、5μM、25μM、50μM、100μM）和MEHP（1μM、5μM、25μM、50μM、100μM）作用细胞24h及48h，以CCK-8法检测细胞增殖情况。结果：DEHP作用卵巢颗粒细胞24h时，1μM DEHP和100μM DEHP均能明显抑制卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（P〈0．05）。DEHP作用卵巢颗粒细胞48h时，1μM DEHP和100μMDEHP均能明显促进卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（P〈0.05）。而MEHP作用卵巢颗粒细胞24h及48h，MEHP各染毒剂量组均无统计学差异（P〉0．05）。结论：DEHP能促进卵巢颗粒细胞增殖，并且和作用时间长短有关。MEHP在观察剂量下，尚未显示有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用。
- 张玉敏马明月段志文裴秀丛苏芯
- 关键词：DEHPMEHP细胞增殖卵巢颗粒细胞
- DEHP介导PPARs对雌性小鼠卵巢功能影响被引量：2
- 2012年
- 目的通过介导过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARs)探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对雌性生殖系统影响。方法将40只21 d雌性ICR小鼠随机分成DEHP 0、20、100、500 mg/kg剂量组,连续染毒10 d,停止染毒24 h后处死动物,用实时聚合酶链式反应(real time-PCR)技术测定小鼠PPARs mRNA表达水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中雌二醇、孕酮水平。结果 100、500 mg/kg DEHP组卵巢湿重分别为(0.01±0.003)、(0.01±0.007)g,脏器系数分别为(0.13±0.02)%、(0.12±0.03)%,与对照组比较,明显降低(P<0.05);500 mg/kg DEHP组小鼠血清中雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05);各染毒组小鼠血清孕酮水平与对照组之间无明显差异(P>0.05);与对照组比较,各染毒组PPARα、PPARβmRNA表达水平无明显变化(P>0.05),PPARγmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论 DEHP作为一种过氧化物酶体增殖剂可以通过改变PPARs基因表达水平影响雌性小鼠卵巢功能。
- 张玉敏马明月裴秀丛段志文
- 关键词：卵巢功能
- 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对大鼠睾丸发育及StAR、CYP19a1、CYP11a1基因表达的影响被引量：6
- 2010年
- 目的通过邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)28天短期重复暴露,探讨DEHP对雄性大鼠生殖系统发育的影响及其作用机制。方法40只7～9周龄雄性Wistar大鼠分为对照组(灌胃玉米油)和低、中、高剂量染毒组(每天灌胃DEHP10、100和1000mg/kg),每组10只,动态观察动物一般状况、体重变化。28天后断头处死大鼠,测定睾丸组织脏器系数;对睾丸和附睾进行病理学观察。提取睾丸组织的总RNA,逆转录合成cDNA,通过PCR扩增产物比较DEHP不同剂量染毒对StAR、CYP19a1和CYP11a1基因表达的影响。结果随着DEHP剂量增加,大鼠体重增长受限(F=3.54,P<0.05);睾丸重量及其脏器系数降低,且高剂量组与对照组相比差异有显著性(F=105.545,P<0.05);DEHP可使大鼠睾丸和附睾组织结构发生病理性改变,在中、高剂量组尤为明显;RT-PCR检测表明,与对照组相比,CYP19a1及CYP11a1基因表达降低,而StAR基因表达在各组间差异无显著性。结论DEHP对青春期雄性大鼠的生殖系统发育具有明显的毒性作用,导致睾丸重量降低,发育不全。DEHP及其代谢产物可能通过影响CYP19a1和CYP11a1等芳香化酶的基因表达,干扰内分泌平衡而使青春前期雄性大鼠产生生殖系统的发育障碍。
- 逯晓波于涛马明月靳翠红刘秋芳巫生文潘亮
- 关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯睾丸发育STAR基因表达
- DEHP及MEHP对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(MEHP)对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响。方法用不同浓度的DEHP(0、1、10、100μmol/L)及MEHP(0、1、10、100μmol/L)分别处理小鼠睾丸间质细胞48h,应用流式细胞仪AnnexinV FITC-PI双染法分析各组细胞凋亡情况。结果100μmol/L DEHP组及10,100μmol/L MEHP处理组与0μmol/L组比较,凋亡细胞比例明显增加(P<0.05);活细胞比例明显减少(P<0.05);10、100μmol/L MEHP处理组与0μmol/L组比较,继发坏死细胞比例明显增加(P<0.05)。结论一定浓度的DEHP及MEHP可诱导小鼠睾丸间质细胞早期凋亡。
- 马明月张玉敏郭丽张振宇裴秀从段志文
- 关键词：DEHPMEHP细胞凋亡
- DEHP及MEHP对小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响被引量：13
- 2010年
- 目的:研究邻苯二甲酸二(2_乙基)己酯(DEHP)及其活性中间产物邻苯二甲酸单(2_乙基)己酯(MEHP)对卵巢颗粒细胞及其激素合成、分泌功能的影响。方法:体外培养健康初断乳ICR小鼠的卵巢颗粒细胞,分别加入DEHP(10、50、250nmol/L),MEHP(10、50、250nmol/L)和溶剂对照(DMSO),作用细胞24h。用RT-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和P450侧链裂解酶(P450scc)mRNA水平;用Realtime-PCR法测定原代小鼠颗粒细胞中芳香化酶(CYP19)和过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARβ、PPARγ)mRNA水平;用酶联免疫法(EIA)检测卵巢颗粒细胞上清液中雌二醇和孕酮的水平。结果:与对照组比较,250nmol/LMEHP抑制StAR基因及P450scc基因表达(P均<0.05);250nmol/LDEHP对CYP19基因表达有促进作用(P<0.05);而10、50nmol/LDEHP及50、250nmol/LMEHP对CYP19基因表达均有抑制作用(P<0.05)。除10nmol/LDEHP外,DEHP及MEHP其它浓度组均能抑制PPARα、PPARβ基因的表达(P<0.05);10nmol/LDEHP及MEHP对PPARγ基因表达有促进作用(P<0.05),而250nmol/LMEHP对PPARγ基因表达有抑制作用(P<0.05)。各剂量DEHP及MEHP均能使颗粒细胞分泌雌二醇增加(P<0.05),10nmol/LDEHP、50及250nmol/LMEHP抑制颗粒细胞分泌孕酮(P<0.05)。结论:DEHP及MEHP影响颗粒细胞类固醇激素合成酶、PPARs的基因表达及分泌功能。
- 马明月张玉敏裴秀丛段志文王旭
- 关键词：卵巢颗粒细胞
