国家自然科学基金(31070603)
- 作品数：16 被引量：66H指数：7
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- 油茶CoUXS1基因全长cDNA克隆及生物信息学分析
- 2012年
- 为了揭示油茶UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶基因的序列特点和结构功能,为该基因的深入研究和开发应用奠定基础。根据油茶种子EST文库中调取的UDP-葡萄糖醛酸脱羧酶基因序列,设计特异引物,利用RT-PCR技术获得该基因全长cDNA克隆,并对其序列进行生物信息学分析。结果表明:该基因阅读框为1032bp,编码344个氨基酸,具有典型的UXS家族模体序列。与海岛棉GhUXS3基因亲缘关系最近,定位于细胞质,有较强的亲水性,将该基因命名为CoUXS1,GenBank登录号为JN017094。
- 曾艳玲谭晓风王保明龙洪旭刘凯曾晓峰
- 关键词：油茶CDNA系统进化分析
- 油茶亲环素基因的鉴定与其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2011年
- 利用构建的油茶近成熟种子cDNA文库,分离鉴定了一条油茶亲环素基因的cDNA序列;该序列全长975bp(base pair),含有一个621bp的开放码框,编码207个氨基酸,将其命名为co-cyp(GenBank登录号:FJ377540)。该基因与其它物种的亲环素基因具有较高的同源性,结构分析表明该蛋白的二级结构以片层为主,并伴有α-螺旋、β转角和大量的无规则卷曲;其N端有一个强疏水性的信号肽序列,具有跨膜结构和较好的柔性;还具有N-连接糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、N-连接肉豆蔻酰位点、脯氨酸顺反异构酶标志序列、环孢菌素(CsA)结合位点(Trp)以及植物亲环素基因特有的7个氨基酸特征序列KSGKPLH。该蛋白属于亲环素B族,为球状分泌蛋白。在获得油茶亲环素基因全长cDNA的基础上,构建了该基因的原核表达重组子pET30b-CyP,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得了约21kDa的油茶亲环素蛋白。本研究对揭示油茶种子的油脂合成和抗逆性能等生物学规律具有重要意义。
- 王保明谭晓风
- 关键词：油茶全长CDNA克隆原核表达
- 油茶CoSAD基因载体的构建、鉴定及功能分析被引量：7
- 2015年
- 为揭示油茶(Camellia oleifera Abel)硬脂酰-ACP脱饱和酶(SAD)基因(即Co SAD基因)的功能,构建了该基因的原核表达载体p ET28b-Co SAD、植物表达载体p BI121-Co SAD和RNA干扰载体p BI121-Co SAD RNAi,并采用PCR扩增及双酶切方法对3类载体进行鉴定;在此基础上,对原核表达载体中的Co SAD基因进行诱导表达分析,并对p BI121-Co SAD转化的拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕sad突变体植株和p BI121-Co SAD RNAi转化的拟南芥野生型植株进行转基因鉴定和主要脂肪酸成分含量分析。PCR扩增和双酶切结果显示:从p ET28b-Co SAD、p BI121-Co SAD和p BI121-Co SAD RNAi载体的阳性克隆中均可获得目的条带,表明这3类载体均构建成功;用1 mmol·L-1IPTG分别诱导0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 h,Co SAD基因均能够在p ET28b-Co SAD转化的大肠杆菌BL21感受态细胞中正常表达,能够获得与预测结果相符的相对分子质量约47 000的特异目的蛋白条带,且蛋白活性随诱导时间的延长而升高。从p BI121-Co SAD转化的拟南芥突变体植株和p BI121-Co SAD RNAi转化的拟南芥野生型植株中也均可扩增出目的条带。GC-MS分析结果显示:与拟南芥野生型植株相比,其突变体植株的硬脂酸和棕榈酸含量较高、油酸和棕榈油酸含量较低;但突变体植株经p BI121-Co SAD转化后,硬脂酸和棕榈酸含量降低而油酸和棕榈油酸含量提高;野生型植株经过p BI121-Co SAD RNAi转化后,硬脂酸和棕榈酸含量提高、油酸和棕榈油酸含量降低,表明p BI121-Co SAD转化能够促进拟南芥sad突变体植株体内饱和脂肪酸向不饱和脂肪酸转化,而p BI121-Co SAD RNAi转化对拟南芥SAD基因的表达有明显的抑制作用,这2种重组质粒均可影响拟南芥植株的脂肪酸含量。研究结果表明:油茶Co SAD基因具有调控饱和脂肪酸(硬脂酸和棕榈酸)向不饱和脂肪酸(油酸和棕榈油酸)转化的功能,对茶油的脂肪酸组成具有关键的调控作用�
- 陈鸿鹏谭晓风谢耀坚张党权曾艳玲
- 关键词：原核表达载体植物表达载体RNA干扰载体脂肪酸组成
- 油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2014年
- 3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料，在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上，采用RACE技术，克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长，命名为CoHCD（GenBank,登录号KJ910336）。该基因cDNA全长为1145bp，含有666bp的开放读码框，编码221个氨基酸，分子量为25．2kDa，理论等电点pI为9．4，疏水残基占整个氨基酸残基的48．9％，是亲水性蛋白，具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序“HGXXGXXRS”。在基因cDNA全长序列的基础上，分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体，其中，原核表达载体在宿主细胞BL21（DE3）上成功诱导表达，获得表观分子量约为25kDa的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明，在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8～10月，转录最高峰发生在9月，其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯
- 关键词：油茶克隆
- 油茶脂肪酸代谢途径中关键酶基因调控油脂合成的规律研究被引量：14
- 2014年
- 以国审油茶"华硕"和普通油茶"望城1号"不同发育时期种仁为材料,分析种仁含油率、脂肪酸成分和脂肪酸代谢关键酶基因表达规律。结果表明,油茶酰基载体蛋白基因(CoACP)、硬脂酰脱饱和酶基因(CoSAD)和油酸脱氢酶基因(CoFAD2)表达规律与油茶种仁成熟程度有关而与品种关系不大;"华硕"较"望城1号"生殖发育期长,成熟期晚,脂肪酸各成分变化幅度大,采收期可比"望城1号"延迟1个月;10月底采收时虽然"华硕"含油率低于"望城1号",但不饱和脂肪酸含量却高些,若延迟采收"华硕"可保产量质量均优。
- 曾艳玲谭晓风张党权陈鸿鹏曾晓峰朱勇许淑娴陈力
- 关键词：油茶
- 油茶FBPase基因的全长cDNA克隆及序列分析被引量：6
- 2011年
- FBPase是调控Clavin循环的关键酶之一,加速Clavin循环有利于提高植物的光合效率。在油茶cDNA文库和EST文库构建的基础上,以油茶"湘林1号"的近成熟种子为材料,采用5’RACE和3’RACE技术克隆油茶FBPase基因的全长cDNA序列;该基因全长cDNA序列为1 356 bp,其中开放读码框为1 020 bp,多序列比对发现其与毛果杨的亲缘关系最近,相似性为84%;该基因共编码339个氨基酸,其蛋白质属稳定蛋白质,等电点为5.54,不含二硫键,为胞质FBPase,将该基因命名为co-fbp。油茶FBPase基因的克隆对于进一步研究油茶光合作用、提高油茶光能利用率、提高油茶产量具有重要的意义。
- 谭晓风曹彦妮郭静怡刘凯
- 关键词：油茶基因克隆全长CDNA
- 油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因(CoFBA4)的分子特征与表达分析被引量：6
- 2013年
- 果糖-1，6-二磷酸醛缩酶（fructose-1，6-diphosphatealdolase，FBA，EC4．1．2．13），简称醛缩酶，是糖酵解代谢途径中第4步关键酶，催化果糖-1，6-二磷酸（Fru．1，6-BP）可逆地裂解为磷酸二羟丙酮（DHAP）和3-磷酸甘油醛（G．3-P）（Rutter，1964）。
- 曾艳玲谭晓风蒋瑶刘敏王建勇周俊琴
- 关键词：油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆基因表达亚细胞定位
- 油茶Pht1;2的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2013年
- 目的:克隆和分析油茶高亲和磷转运蛋白基因,为研究其结构和功能打下基础。方法:以油茶品种‘华硕’为试材,通过RT-PCR和RACE的方法克隆出油茶磷酸转运子Pht1基因家族一个成员的全长cDNA序列,命名为CoPht1;2(GenBank登录号:JX412956.1),通过生物信息学技术对其序列的理化性质、结构与功能进行分析和预测。结果:CoPht1;2 CDS长度为1 590bp,编码530个氨基酸,与其它物种的Pht1氨基酸序列具有较高的相似性,其中与杨柳科毛果杨的Pht1相似性最高,达到77.5%;该基因所编码蛋白质的分子量为58.02 kDa,理论等电点pI为8.97,二级结构主要由α-螺旋、β-折叠和不规则卷曲构成,包含12个明显的跨膜螺旋拓扑结构。结论:预测显示该蛋白是一个疏水跨膜蛋白,具有磷转运蛋白的主要特征,初步判定其与油茶磷吸收有关,其功能有待进一步验证。
- 周俊琴谭晓风袁军龙洪旭
- 关键词：油茶生物信息学
- 油茶FAD2基因的植物表达载体和RNA干扰载体构建及其功能分析被引量：8
- 2015年
- 茶油是从油茶种子中提取的食用植物油,富含油酸、亚油酸以及亚麻酸等多种人体必需的不饱和脂肪酸。在植物的不饱和脂肪酸生物合成途径中,脂肪酸脱饱和酶(Fatty Acid Desaturase,FAD)有多个家族成员,可以将单不饱和脂肪酸转化成多不饱和脂肪酸,其中FAD2可以将油酸(18∶1Δ9)和棕榈油酸(16∶1Δ9)转化成亚麻酸(18∶2Δ9,11)和十六碳二烯酸(16∶2Δ9,11)。为了揭示油茶FAD2基因的功能,本研究在原有的基础上构建了这个基因的植物表达载体p BI121-Co FAD2以及RNA干扰载体p BI121-Co FAD2 RNAi,并分别对相应的拟南芥突变体和野生型植株进行了转基因研究。结果表明,同野生型相比,fad突变体中,18∶1和16∶1含量较高,18∶2和16∶2含量较低;突变体植株经过植物表达载体的转化后,脂肪酸组分得到了恢复;而野生型植株经过RNA干扰载体的转化后,18∶1和16∶1含量升高,18∶2和16∶2含量降低。由此说明,油茶FAD2基因在植物体内具有调控18∶1和16∶1转变成18∶2和16∶2的功能,对于茶油脂肪酸组分的构成起着关键的调控作用。
- 陈鸿鹏谭晓风谢耀坚吴志华张党权曾艳玲
- 关键词：油茶FAD2基因功能分析
- 油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆与原核表达
- 2016年
- 油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CoMFP(Gen Bank登录号为KJ910342)。序列分析表明,该基因cDNA全长为2 541 bp,含有2 178 bp的开放读码框,编码725个氨基酸,分子量为79.033 3 kD,理论等电点pI为9.11,具有六个比较明显的跨膜区,不仅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信号序列、3羟酰Co A脱氢酶(HCDH)信号序列、ECH基序和磷酸结合基序,也具有相当保守的盐桥、活性位点及五个亚结构域。成功地构建了原核表达载体并在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为79 kD的相应目的蛋白。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯梅芳芳
- 关键词：油茶克隆原核表达
