国家高技术研究发展计划(2011AA02A113)
- 作品数：15 被引量：44H指数：4
- 相关作者：冯晓燕张贺秋李萍李永哲胡川闽更多>>
- 相关机构：军事医学科学院温州医科大学沈阳药科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成纤维细胞生长因子23蛋白原核表达及条件优化
- 2013年
- 目的制备具有生物学活性的可溶性重组人成纤维细胞生长因子23(FGF23),并探讨其最佳诱导表达条件。方法克隆FGF23和SUMO-FGF23两个cDNA序列,分别与原核表达载体pET3c与pET22b相连,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,对FGF23表达的最佳质粒和宿主菌组合进行筛选,并对Rosetta(DE3)/pET22b-SUMO-FGF23重组菌株的最佳诱导表达条件进行优化。结果只有pET-SUMO-FGF23的质粒和Rosetta(DE3)的组合有FGF23蛋白质表达;融合蛋白在16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导19 h以可溶形式表达,且上清表达量占菌体总蛋白的28%。结论本研究成功获得了高表达量及可溶性的重组FGF23,最佳表达条件是16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导表达19 h。
- 倪培刘孝菊腾春燕王春娥肖贺欣李校堃于庭
- 结核分枝杆菌ESAT-6+CFP-10融合抗原克隆表达及其生物学活性被引量：3
- 2016年
- 目的克隆表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)融合抗原ESAT-6+CFP-10(EC),评价融合抗原EC刺激THP-1细胞培养上清中特定细胞因子分泌水平的变化。方法构建融合抗原EC原核表达载体,用纯化后的不同浓度融合抗原EC(10,20μg/ml)刺激THP-1细胞,分别收集刺激12和24 h细胞培养上清,采用Bio-Plex ProTMAssays细胞因子测定试剂盒检测细胞培养上清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、GM-CSF、TNF-α和IFN-γ的分泌水平。结果成功克隆表达此菌EC融合抗原;经过融合抗原EC刺激THP-1细胞培养上清中IL-6、IL-8和TNF-α的分泌水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),其余细胞因子的分泌水平在刺激前后没有显著变化。结论克隆表达的融合抗原EC具有生物学活性,能使THP-1细胞分泌的IL-6、IL-8及TNF-α水平升高。
- 赵琰枫冯晓燕修冰水段翠密范雅文张贺秋
- 关键词：THP-1细胞细胞因子类
- 细胞因子和microRNA与结核分枝杆菌感染的研究进展被引量：3
- 2014年
- 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质,其作为细胞间信号传递分子,主要参与调节免疫应答、免疫细胞分化发育、组织修复、介导炎症反应、刺激造血功能等。micro RNA(mi RNA)是存在于真核细胞内的一种非编码小RNA,可以调控基因转录后的表达,同时还可作为不同生理和病理状态的分子标记。许多研究表明,细胞因子相关基因的多态性与结核感染、肺结核发病易感性密切相关,而mi RNA在肺部疾病的正负调节功能与肺部疾病感染的发生、发展、转化与治疗有关。我们简要叙述了细胞因子、mi RNA与结核分枝杆菌感染三者之间的关联,以期有利于及时筛查潜伏结核感染和肺结核患者,降低结核感染率和发病率。
- 蒋纾芳张嵘冯晓燕
- 关键词：细胞因子结核分枝杆菌
- HLA-DQB1基因多态性与中国汉族人群系统性红斑狼疮的相关性被引量：5
- 2015年
- 目的探讨HLA-DQB1基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与汉族人群系统性红斑狼疮(systemic lupus erthematosus,SLE)遗传易感性的相关性。方法通过聚合酶链式反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)技术对908例SLE患者和961例健康对照rs3129716(HLA-DQB1)位点进行基因分型,同时结合临床表现分型,分析该位点与疾病及临床表型的相关性。分型结果用PLINK1.07软件进行统计分析。结果 rs3129716(HLA-DQB1)位点等位基因频率和基因型频率在SLE疾病组和对照组的分布差异无统计学意义(P>0.05)。三种遗传模型下的分析显示,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。将SLE患者按血清学指标及临床表现分型,未发现相关性。结论rs3129716(HLA-DQB1)与中国汉族人群SLE患者遗传易感性不相关。
- 李媛李萍陈华孙菲陈思吴子燕胡朝军张蜀澜刘斌李永哲张奉春
- 关键词：系统性红斑狼疮单核苷酸多态性HLA-DQB1
- RANTES和Eotaxin与结核病被引量：2
- 2015年
- 结核病仍然是困扰人类健康的常见传染病之一。我国是22个结核病高负担国家之一,早期准确的诊断以及及时有效的治疗对于控制结核病流行是必不可少的。结核病传统的实验室诊断方法存在许多不足之处,新的诊断方法由于没有良好的生物标志物而受到了限制。随着国内外对调节活化正常T细胞表达与分泌趋化因子(RANTES)及嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)研究的日益增多,越来越多的研究显示,RANTES及Eotaxin对于结核病具有潜在的诊断和监测价值。
- 赵琰枫冯晓燕张贺秋
- 关键词：结核病
- 抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体识别的抗原表位区域鉴定
- 2018年
- 目的对抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)单克隆抗体H5识别的抗原表位区域进行鉴定。方法设计4个NGAL截短体,通过PCR扩增截短体DNA片段并克隆到PET42a质粒中表达GST-NGAL截短体融合短肽。以此为抗原鉴定H5识别的抗原表位区域。随后根据生物信息学预测结果,化学合成2段潜在B细胞表位肽,用ELISA和Western blot方法进一步鉴定。结果 H5能与NGAL蛋白分子第20～36位氨基酸结合。结论单克隆抗体H5的抗原表位结合位点存在于成熟NGAL蛋白分子氨基末端第20～36位氨基酸处,其深入研究为建立高效灵敏的NGAL免疫学检测体系和进一步研究NGAL分子抗原表位结构奠定基础。
- 何莹胡川闽陈安
- 关键词：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体表位
- 白细胞介素6与结核分枝杆菌感染和诊断的研究进展被引量：3
- 2015年
- 结核病仍然困扰着人类健康,我国是22个结核病高负担国家之一,早期正确的诊断以及及时有效的治疗对于控制我国结核病流行是必不可少的。传统的结核病实验室诊断方法都存在着许多不足,新的诊断方法由于没有良好的生物标志物而受到了限制。国内外许多研究表明,白细胞介素6(IL-6)在结核病中具有潜在的诊断价值。在此就IL-6与结核分枝杆菌感染和诊断的研究进展做一综述。
- 赵琰枫赵秀萍冯晓燕张贺秋
- 关键词：结核分枝杆菌白细胞介素6
- NGAL测定在急性肾损伤诊断中应用的研究进展被引量：5
- 2014年
- 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)存在于中性粒细胞的过氧化物酶阴性颗粒中,并在人体组织细胞中广泛分布。近年研究发现,NGAL与肾脏关系十分密切,可能参与启动肾脏发育并发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明,急性肾损伤(AKI)时NGAL表达明显增高并分泌释放入体液中。尤其是尿液中的NGAL水平与肾脏损伤的程度密切相关且很早就表现出来,NGAL被认为是新的有效的AKI早期生化标志物。
- 何莹陈安胡川闽
- 关键词：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白急性肾损伤
- 肺结核患者血浆血小板源生长因子水平及其与载菌量的相关性被引量：2
- 2016年
- 目的探讨血浆血小板源生长因子(PDGF-BB)水平在肺结核病患者与健康人之间是否具有显著差异,以及其水平与患者载菌量是否相关。方法收集134例初诊活动性肺结核病患者的EDTA抗凝血浆,并根据痰涂片及痰培养结果进行分组:涂片培养阳性组(S+/C+)55例,涂片阴性培养阳性组(S-/C+)43例,涂片培养阴性组(S-/C-)36例;健康对照组为健康体检40例。应用MILLIPLEXMAP Kit细胞因子试剂盒检测血浆中PDGF-BB的水平。结果结核病组血浆PDGF-BB水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);S+/C+组血浆PDGF-BB水平显著高于S-/C-组的测定值,差异有统计学意义(P<0.05);S+/C+组血浆PDGF-BB水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。ROC曲线的AUC值为0.540,当临界值为271.4时,敏感度为28.6%,特异度为95.0%。结论 PDGF-BB水平与结核分枝杆菌感染及机体载菌量存在一定相关性,可能作为肺结核病患者临床辅助诊断的标志物之一,但是需要与其他细胞因子联合检测提高检测性能。
- 赵琰枫余琴杨锡琴修冰水冯晓燕张贺秋
- 关键词：肺结核血小板源生长因子
- IkB激酶β和DNA聚合酶β易感基因位点与中国汉族人群系统性红斑狼疮的相关性研究被引量：1
- 2015年
- 目的 分析IkB激酶β（IKBKB）rs12676482,rs2272733和DNA聚合酶β（POLB）rs3136717,rs3136744基因单核苷酸多态性（SNPs）与中国汉族人群SLE遗传易感性的关系,探讨这些位点与SLE的相关性.方法 采用PCR-连接酶检测反应（LDR）技术对908例SLE患者和961名健康对照进行基因分型,结合SLE实验室及临床表现,分析该位点与疾病及临床表型的相关性.分型结果用PLINK1.07软件进行统计分析,所选SNP位点等位基因频率和基因型频率进行x2检验,3种遗传模型（加性模型、显性模型和隐性模型）基因型频率应用Logistic回归进行分析.结果 rs12676482在对照组中AA、AG、GG基因型频率和A、G等位基因频率分别为0.9％（8/938）、15.7％（147/938）、83.4％ （783/938）、8.7％（163/1 876）、91.3％（1 713/1 876）,SLE组中为1.4％（12/888）、15.6％（139/888）、83.0％ （737/888）、9.2％（163/1 776）、90.2％（1613/1 776）,2组基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P＞0.05）;rs2272733在对照组中TT、TC、CC基因型频率和T、C等位基因频率分别为1.1％（10/938）、16.7％（157/938）、82.2％（771/938）、9.4％（177/1 876）、90.6％（1 699/1 876）,SLE组中为1.4％（12/888）、16.3％（145/888）、82.3％（731/888）、9.5％（169/1 776）、90.5％（1 607/1 776）,2组基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P＞0.05）;rs3136717在对照组中CC、CT、TT基因型频率和C、T等位基因频率分别为1.1％（10/938）、16.7％（157/938）、82.2％（771/938）、9.4％（177/1 876）、90.6％（1 699/1 876）,SLE组中为1.4％（12/888）、16.7％（148/888）、82.0％（728/888）、9.7％（172/1 776）、90.3％（1 604/1 776）,2组基因型频率和等位基因频率差异均无统计学意义（P＞0.05）;rs3136744在对照组中CC、CA、AA基因型频率和C、A等位基因频率分别为0.6％（6/938）、13.6％（128/938）、85.7％（804/938）、7.4�
- 李媛李萍王立费允云徐东张文张烜刘斌李永哲
- 关键词：DNA聚合酶Β
