浙江省自然科学基金(Y205426)
- 作品数：10 被引量：51H指数：4
- 相关作者：苏苗赏李昌崇罗运春郑吉善张维溪更多>>
- 相关机构：温州医学院附属育英儿童医院宁波市妇女儿童医院温州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响被引量：13
- 2007年
- 目的观察卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠哮喘胸腺活化调节趋化因子(thymus and activation regulated chemo-kine,TARC)及mRNA表达的影响。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。30只清洁级♂Balb/c小鼠随机分为3组,每组10只:正常对照组、哮喘组、BCG-PSN治疗组。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中TARC、IL-4和IFN-γ蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中TARC mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)绝对值及百分比、TARC和IL-4浓度、肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达均增高,BALF中IFN-γ浓度低于正常对照组。经BCG-PSN干预后,BALF中细胞总数、EOS绝对数及百分比,TARC、IL-4浓度较哮喘组均下降,肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达较哮喘组均下调,BALF中IFN-γ浓度较哮喘组增高。免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度呈正相关。结论卡介菌多糖核酸可降低TARC在肺组织中的表达,降低气道炎症。
- 郑吉善李昌崇陈庆武苏苗赏张维溪张海邻董琳陈小芳罗运春张正霞
- 关键词：卡介菌多糖核酸哮喘小鼠气道炎症胸腺活化调节趋化因子
- 哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及其受体的表达被引量：1
- 2007年
- 目的探讨胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其受体CCR4在哮喘小鼠气道炎症中的作用。方法清洁级健康雄性Balb/c小鼠20只随机分成两组,分别为对照组、哮喘组。以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。末次激发24h后留取血液、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF和血清中TARC和白介素(IL)-4蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)法测定肺组织中TARC mRNA、CCR4 mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果哮喘组BALF和血清中TARC的浓度[分别为(458.36±114.98)pg/ml、(145.56±28.38)pg/ml]均显著高于对照组[分别为(5.06±2.38)pg/ml、(73.79±29.27)pg/mi] (P<0.01);哮喘组BALF和血清中IL-4浓度[分别为(35.46±12.47)pg/ml、(3.82±1.12)pg/ml]均显著高于对照组[分别为(3.83±1.57)pg/ml、(0.88±0.33)pg/ml](P<0.01);肺组织中TARC mRNA及其受体CCR4 mRNA的表达,哮喘组[分别为(1.12±0.08)、(0.91±0.13)]显著高于对照组[分别为(0.53±0.12)、(0.62±0.10)](P<0.01);免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞,哮喘组表达量(0.103±0.015)显著高于对照组(0.045±0.007)(P<0.01)。结论TARC及其受体CCR4在哮喘小鼠肺组织中表达增加,参与哮喘气道炎症的发病过程,气道上皮细胞是TARC重要的来源细胞。
- 李昌崇郑吉善苏苗赏张维溪罗运春李孟荣董琳陈小芳蔡晓红张正霞
- 关键词：胸腺活化调节趋化因子CCR4哮喘小鼠气道炎症
- TLR4信号转导途径在年幼期哮喘大鼠气道炎症中的作用被引量：10
- 2008年
- 目的:研究哮喘大鼠Toll样受体4(TLR4)表达变化及其对嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的作用机制。方法:清洁级SD大鼠27只,随机分为对照组(A)、哮喘组(B)、地塞米松(D)组,每组9只。用OVA致敏与激发复制哮喘模型。光镜观察肺组织病理变化;BALF中炎症细胞计数;ELISA测定血清IL-10含量;原位杂交测定肺组织TLR4mRNA表达;TUNEL法检测EOS凋亡。结果:(1)光镜观察:B组见肺组织大量炎症细胞侵润,支气管黏液腺增生;D组上述现象明显减轻。(2)BALF中细胞总数、EOS绝对计数和EOS占细胞总数的百分比:B组均明显高于A组(均P<0.01);D组均明显低于B组(均P<0.01)。(3)血清IL-10含量:B组与A组有显著差异(P<0.01);D组显著低于B组(P<0.01)。(4)TLR4mRNA的检测:TLR4在肺组织表达B组与A组差异无统计学意义(P>0.05);D组显著高于B组(P<0.01)。(5)EOS凋亡率检测结果,B组与A组比差异显著(P<0.05);D组显著高于B组(P<0.01)。相关分析显示,TLR4mRNA表达与EOS凋亡率呈显著正相关(r=0.612,P<0.01)。结论:DXM上调血清中IL-10水平,诱导肺组织EOS凋亡,可能与TLR4信号通路有关。
- 苏苗赏徐漫欢李昌崇陈福将管小俊郑仰明张海邻罗运春
- 关键词：白细胞介素10嗜酸细胞哮喘
- 大肠埃希菌脂多糖对年幼期支气管哮喘大鼠气道炎症的影响被引量：1
- 2007年
- 据报道脂多糖（LPS）、臭氧、微粒、病毒感染等可诱发前炎症反应，并激活核因子κB（NF-κB）和细胞因子产生，引发非变应性支气管哮喘（简称哮喘）的发生。由于LPS的结构类型、剂量浓度以及作用时间的不同，都决定了适应性免疫应答的极化方向。我们的研究通过建立年幼期哮喘动物模型，观察不同浓度大肠埃希菌（Ecoli）LPS对哮喘气道炎症的调控作用。
- 苏苗赏李昌崇郑仰明郑吉善管小俊张维溪罗运春方周溪
- 关键词：哮喘气道炎症大肠埃希菌菌脂多糖
- 不同浓度脂多糖对支气管哮喘大鼠模型建立的影响及调节机制被引量：4
- 2007年
- 目的观察不同浓度大肠埃希菌脂多糖(E、coli LPS)对年幼期哮喘大鼠模型建立的影响及其调控机制。方法清洁级SD大鼠45只,随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、LPS组(分为C1组、C2组、C3组),每组9只。用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。光镜、电镜观察肺组织病理及超微结构的变化;支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞(EOS)及其它炎症细胞计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清OVA-sIgE与BALF中TGF-β_1含量;TUNEL法检测肺组织EOS凋亡。结果①光镜电镜观察:光镜下B组见支气管及血管周围、肺间质及肺泡腔内炎性细胞浸润,支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,黏膜皱折增多,部分黏膜上皮细胞脱落,可见气道黏液栓;C1组、C3组上述改变无明显减轻;C2组上述现象明显减轻。电镜下B组见EOS数量增多,周围有大量浆细胞聚集;C1组无明显改变;C2组凋亡的EOS增多;C3组中性粒细胞和凋亡的EOS均增多。②BALF中炎症细胞计数;B组BALF中细胞总数、EOS绝对计数和EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均高于A组(均P<0.01);C2组均低于B组(均P<0.01)。③血清OVA-sIgE和BALF中TGF-β_1含量;血清OVA-sIgE检测,B组高于A组(P<0.01);C2组、C3组明显低于B组(均P<0.01);但C1组与B组比较无统计学意义(P>0.05)。BALF中TGF-β_1含量测定,B组与A组比较,两组有显著性差异(P<0.05);C2组、C3组明显高于B组(均P<0.01)。④肺组织EOS凋亡率检测结果,B组与A组比较,两组有显著性差异(P<0.05);C2组、C3组与B组比较EOS凋亡率均明显增高(均P<0.01);但C1组与B组比较无统计学意义(P>0.05)。相关分析结果,BALF中TGF-β_1水平与EOS数有非常显著性负相关(r=-0.48 3,P<0.01);EOS绝对计数与血清OVA-sIgE水平显著性正相关(r=0.634,P<0.01)。结论 E.coli LPS(>10μg/ml)通过降低OVA-sIgE水平,增加TGF-β_1分泌,诱导EOS凋亡,从而可能减轻变态反应症状,但过高浓度E.coli LPS(100μg/ml)可能会促使中
- 苏苗赏李昌崇叶乐平郑吉善张维溪罗运春李孟荣方周溪
- 关键词：脂多糖转化生长因子嗜酸粒细胞哮喘
- 地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响。方法30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组。以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达。结果①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P<0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P<0.01)。③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mR-NA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P<0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P<0.01)。结论糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制。
- 郑吉善苏苗赏李昌崇叶乐平董琳罗运春陈小芳李孟荣张正霞
- 关键词：哮喘胸腺活化调节趋化因子地塞米松小鼠
- 地塞米松对年幼期哮喘大鼠Toll样受体4信号转导的调节机制被引量：18
- 2006年
- 目的研究地塞米松(DXM)对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨TLR4对嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的调控机制。方法清洁级SD大鼠27只,随机分为对照组、哮喘组、DXM组,每组9只。用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立大鼠哮喘模型。光镜观察肺组织病理变化;BALF中EOS及其他炎症细胞计数;ELISA测定血清OVA-sIgE含量;原位杂交测定肺组织TLR4mRNA表达;TUNEL法检测EOS凋亡。结果(1)肺组织病理变化:哮喘组支气管及血管周围、肺间质及肺泡腔内炎性细胞浸润,支气管黏膜下水肿,黏液腺增生,黏膜皱褶增多,部分黏膜上皮细胞脱落,可见气道黏液栓;DXM组上述现象明显减轻。(2)BALF中炎症细胞计数:哮喘组BALF中细胞总数(4·29±0·12)×109/L、EOS绝对计数(33·94±5·04)×107/L和EOS占细胞总数的百分比(8·50±0·56)%均高于对照组,分别为(2·01±0·10)×109/L、(1·25±0·27)×107/L、(0·56±0·18)%(均P<0·01);DXM组分别为(2·14±0·10)×109/L、(4·78±1·23)×107/L、(2·17±0·25)%,均低于哮喘组(均P<0·01)。(3)血清OVA-sIgE含量检测:哮喘组(83·40±6·80)μg/ml,高于对照组(14·38±4·25)μg/ml(P<0·01);DXM组(45·02±7·47)μg/ml明显低于哮喘组(均P<0·01)。(4)肺组织TLR4mRNA的检测结果(吸光度):TLR(A值)哮喘组(25·81±3·56),对照组(24·71±0·85)(P>0·05);DXM组(33·94±3·28)表达明显高于哮喘组(P<0·01)。(5)EOS凋亡率检测结果,哮喘组(7·39±1·93)%与对照组(9·06±1·52)%比较,两组差异有统计学意义(P<0·05);DXM组(13·33±1·09)%与哮喘组比较明显增高(均P<0·01)。相关分析结果显示,TLR4mRNA表达与EOS凋亡率有中度正相关(r=0·612,P<0·01)。结论DXM降低血清中OVA-sIgE水平,诱导哮喘大鼠肺组织EOS凋亡,可能与激活TLR4信号通路有关。
- 苏苗赏李昌崇林立郑吉善郑仰明管小俊张维溪罗运春
- 关键词：细胞表面膜糖蛋白地塞米松哮喘
- 不同浓度脂多糖对支气管哮喘大鼠模型建立的影响及调节机制被引量：1
- 2007年
- 目的 观察不同浓度大肠埃希菌脂多糖（E．coli LPS）对年幼期哮喘大鼠模型建立的影响及其调控机制。方法 清洁级SD大鼠45只，随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）、LPS组（C组），FC组又分为C1组（LPS0．1μg／m1）、C2组（LPS10μg／m1）、C3组（LPS100μg／m1）]，每组9只。用卵白蛋白（OVA）致敏与激发建立大鼠哮喘模型。光镜、电镜观察肺组织病理及超微结构的变化；支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞（EOS）及其它炎症细胞计数；酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清OVA-sIgE与BALF中TGF-β1含量；TUNEL法检测肺组织EOS凋亡。结果①光镜电镜观察：光镜下B组见支气管及血管周围、肺间质及肺泡腔内炎性细胞浸润，支气管黏膜下水肿，黏液腺增生，黏膜皱折增多，部分黏膜上皮细胞脱落，可见气道黏液栓；C1组、C3组上述改变无明显减轻；C2组上述现象明显减轻。电镜下B组见EOS数量增多，周围有大量浆细胞聚集；C1组无明显改变；C2组凋亡的EOS增多；C3组中性粒细胞和凋亡的EOS均增多。②BALF中炎症细胞计数：B组BALF中细胞总数、EOS绝对计数和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均高于A组（均P〈0．01）；C2组均低于B组（均P〈0．01）。③血清OVA-sIgE和BALF中TGF-β1含量：血清OVA-sIgE检测，B组高于A组（P〈0．01）；C2组、C3组明显低于B组（均P〈O．01）；但C1组与B组比较无统计学意义（P〉0．05）。BALF中TGF-β1。含量测定，B组与A组比较，两组有显著性差异（P〈0．05）；C2组、C3组明显高于B组（均P〈0．01）。④肺组织EOS凋亡率检测结果，B组与A组比较，两组有显著性差异（P〈0．05）；C2组、C3组与B组比较EOS凋亡率均明显增高（均P〈0．01）；但C1组与B组比较无统计学意义（P〉0．05）。相关分析结果，BALF中TGF-β1。水平与EOS数呈显著性负相关（r=-0．483，P〈0�
- 苏苗赏李昌崇叶乐平郑吉善张维溪罗运春李孟荣方周溪
- 关键词：脂多糖转化生长因子嗜酸粒细胞哮喘
- 分离培养人外周血CD4^+CD25^-T细胞及其生物学特性研究被引量：1
- 2007年
- 目的:分离培养人外周血CD4+CD25-T细胞,并鉴定其生物学特性。方法:设对照组(A组)、LPS组(B组)、LPS+抗TGF-β1mAb组(D),用Percoll不连续密度梯度离心与免疫磁珠法,分离培养健康人外周血CD4+CD25-T细胞。用光镜及电镜观察其形态特征,台盼蓝试验检测其活力,流式细胞术(FCM)鉴定其纯度。体外培养4h、3d及5d后,用FCM检测CD4+CD25+T细胞的阳性率,ELISA法检测培养上清中TGF-β1的浓度,RT-PCR法检测细胞中叉状头/翼状螺旋转录因子(FOXP3)mRNA的表达。结果:(1)光镜下观察分离的CD4+CD25-T细胞主要为小体积细胞,电镜下观察细胞核呈圆形,染色质致密。体外抗人CD3/CD28mAb刺激培养的CD4+CD25-T细胞体积逐渐增大,胞质较丰富,电镜下观察细胞核呈椭圆形或肾型,染色质较稀疏。(2)FCM检测CD4+CD25-T细胞纯度达91.5%～96%。台盼蓝试验检测分离前后活细胞数无统计学意义(P>0.05)。(3)FCM检测表明,B5d组为CD4+CD25+T细胞的阳性率为(55.99±1.42)%与A5d组相比较有统计学意义(P<0.01);D5d组CD4+CD25+T细胞的阳性率为(1.99±0.83)%与A5d组的阳性率(1.29±0.04)%相比较无统计学意义。(4)ELISA测定表明,培养液中TGF-β1的浓度,B3d组为(1.60±0.09)μg/L、B5d组为(1.83±0.14)μg/L,分别与A3d组为(0.35±0.04)μg/L、A5d组为(0.33±0.08)μg/L相比较,均有统计学意义(P<0.01);而D3d、D5d组与A3d、A5d组相比较均无统计学意义。(5)RT-PCR检测表明,FOXP3mRNA的表达:以β-actin的A值作为内参照,B3d组为(0.84±0.07)、B5d组为(1.85±0.24)分别与A3d组(0.05±0.02)、A5d组(0.04±0.02)相比较,均有统计学意义(P<0.01);而D组与A组的各个组间相比较均无统计学意义。(6)LPS诱导的人外周血中CD4+CD25-T细胞培养液上清中TGF-β1的水平与该细胞中FOXP3mRNA的表达呈显著的正相关(r=0.812,P<0.01)。结论:用Percoll不连续密度梯度离心与免疫磁珠法体外分离培养的人外周血CD4+CD25-T细胞的活力及纯度较理想;LPS诱导的CD4+CD
- 苏苗赏徐漫欢陈福将李昌崇张维溪陈小芳陈慧
- 关键词：T淋巴细胞亚型转化生长因子脂多糖
- 脂多糖通过TLR4对幼年哮喘大鼠气道炎症的调节作用
- 2007年
- 以前的研究表明，TH2细胞的优势应答是导致嗜酸性粒细胞性哮喘发生发展的主要免疫学基础。近年研究发现，Toll样受体（TLR）信号通路激活诱导TH1免疫应答的作用可用来防治有害的TH2优势应答，如哮喘病的发生发展。然而在免疫激活的初始阶段TLR4刺激物脂多糖（LPS）的不同构型、不同浓度以及不同作用时间会影响适应性免疫应答的极化方向，目前对LPS在哮喘的气道炎症发生发展中的作用仍有争论。
- 李昌崇苏苗赏郑吉善管小俊郑仰明罗运春李孟荣
- 关键词：气道炎症脂多糖TH1免疫应答TH2细胞
