国家自然科学基金(81101634)
- 作品数：10 被引量：49H指数：4
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- 相关机构：成都军区总医院西南医科大学中国人民解放军西部战区总医院更多>>
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- miR-1抑制SDF-1表达和分泌调控HMSC-bm向肝癌细胞迁移被引量：1
- 2014年
- 目的明确肿瘤抑制性micro RNA-1(miR-1)能否通过抑制SDF-1的表达和分泌,调控骨髓间充质干细胞(HMSC-bm)向肿瘤组织的转移。方法 (1)分别利用miR-1表达质粒pSuper-miR-1和miR-1反义寡核苷酸,在肝癌细胞系HepG2中过表达或下调miR-1,Western blot和酶联免疫吸附实验分别检测肝癌细胞蛋白裂解物和培养上清液中SDF-1的表达和分泌水平;(2)构建融合SDF-1 3'UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因载体,将其与pSuper-miR-1共转染HEK293细胞,利用双萤光报告基因检测系统检测重组萤光素酶的表达情况。(3)利用pSuper-miR-1或miR-1反义寡核苷酸转染接种于Transwell下层小室的HepG2细胞过表达miR-1或下调miR-1水平,检测Transwell上层小室HMSC-bm向下层小室HepG2肝癌细胞的迁移情况。结果 (1)在肝癌细胞,HepG2过表达miR-1能够显著抑制SDF-1蛋白表达和分泌,而下调miR-1水平则能够诱导SDF-1的表达和分泌。(2)miR-1能够抑制携带SDF-1 3'UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因活性。(3)在Transwell下层小室的HepG2细胞中过表达miR-1后,上层小室中HMSC-bm向下层小室迁移细胞数量显著减少,而下调下层小室HepG2细胞中miR-1表达水平,则明显增加HMSC-bm向HepG2肝癌细胞的迁移。结论 miR-1能够直接抑制肝癌细胞SDF-1的表达和分泌,并藉此降低肝癌细胞对HMSC-bm的趋化作用。
- 张涛李东彭晶晶宋晓峰李华杜敏吴敬波谭勇周进军许涛陈滔付曾强冯建琼刘煜
- 关键词：SDF-1骨髓间充质干细胞迁移
- 经皮肾镜与腹腔镜治疗输尿管上段结石的临床疗效比较被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨经皮肾镜与腹腔镜治疗输尿管上段结石的临床疗效.方法 回顾和分析本院自2011年1月～2013年3月收治的输尿管上段结石患者共74例,其中经皮肾镜组39例、腹腔镜组35例,对比研究两组患者各项临床疗效指标.结果 经皮肾镜组一次性清石率为92.31％,术后并发症发生率为12.82％,腹腔镜组一次性清石率为94.29％,术后并发症发生率为11.43％,两组患者一次性清石率、术后并发症发生率无统计学差异（P＞0.05）.腹腔镜组手术时间较经皮肾镜组长,而术后卧床时间、平均住院时间、术中出血量少于经皮肾镜组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 经皮肾镜与腹腔镜技术治疗输尿管上段结石安全、有效.对多发性输尿管上段结石,经皮肾镜技术效果确切;腹腔镜不受输尿管通畅性影响,术中出血量少,对肾积水较轻、嵌顿时间长、单一较大输尿管上段结石可作为优先选择.临床可根据具体情况选择合适的手术方法提高患者手术清石率、降低手术并发症.
- 唐智旺汪志民吴铁球李南南
- 关键词：腹腔镜检查
- 晚期非小细胞肺癌特殊人群免疫治疗临床研究进展被引量：2
- 2022年
- 相较于传统放化疗,免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)的单药或联合治疗使晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者5年生存率显著提高。但由于严苛的入组标准,绝大多数前瞻性临床研究并未纳入晚期NSCLC患者中多种不同类型的特殊人群,如免疫功能受损(慢性病毒感染和免疫抑制剂使用)、免疫系统失调(自身免疫疾病和移植)、合并严重疾病(器官功能障碍与中枢神经系统转移)、高危(孕妇、高ECOG/PS评分以及高龄)患者。本文旨在系统回顾与梳理ICI药物在这类特殊人群中的安全性和疗效数据,为临床上更好地应用ICI药物提供参考。
- 刘铮田鹏李东
- 关键词：晚期非小细胞肺癌免疫治疗
- 肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌于细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancerstemcell，CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养，获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检On,0Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CDl33的表达，平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3～7d后即可形成肝癌干细胞样细胞球，获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力，其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加[（99．6％±0．31）％猫（0．12％±O．05）％，P〈0．01]，但两种细胞CD90[（0．11％±0．06）％US（0．09％±0．07）％，P〉0．05]和CDl33[（0．17％±0．08）％椰（0．15％±0．05）％，P〉0．05l表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞[（188．67±12．5）协（79±16．7）个，P〈0．01]；当接种量为5X10^4个细胞时，与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比，接种Huh＇／干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（1I”s30d），成瘤率更高（100％郴16．67％）；接种5×10’数量级的细胞时，实验组成瘤体积[（171．90±10．94）伽（86．39±11．21）mm^3P〈0．01]和瘤体质量[（2．984±0．82）vs（0．324±0．17）g，P〈0．01]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞，其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。
- 张涛李东漆仲春彭晶晶陈滔谭勇周进军许涛付曾强刘煜李华
- 关键词：肝癌
- 肿瘤局部消融治疗进展述评被引量：6
- 2016年
- 肿瘤局部消融治疗是利用物理或化学因素直接或间接杀伤肿瘤细胞,以其治疗精准、创伤小、疗效确切等优点为临床所广泛应用。随着局部消融治疗设备及技术的不断发展,以及临床研究的不断深入,对这一治疗方法的认识也在不断加深,其临床应用的范围也不断扩大。以射频消融、微波凝固消融等手段为主的各种综合治疗方案已经成为多种肿瘤综合治疗的一种新策略。但如何做到精准消融,实现一次性整体灭活肿瘤而不过度损伤正常组织;如何与放化疗、动脉栓塞化疗等手段有机结合,最大程度提高患者疗效,均迫切需要进一步深入研究。本文就肿瘤局部消融治疗进展做一述评。
- 张涛
- 关键词：肿瘤局部消融治疗射频消融治疗微波凝固治疗
- 血清miR-187-3p对肝细胞癌诊断和预后判断临床价值研究被引量：10
- 2018年
- 目的 miRNA在血清中具有良好的稳定性和特异性,是近年来发现的一种在肿瘤诊断及预后判断中具有重要潜在应用价值的新型生物标志物。肝细胞癌患者血清中目前已发现多种具有诊断价值和预后相关的miRNAs。本研究旨在探索肝细胞癌患者血清miR-187-3p的相对含量与临床病理特征的相关性,分析血清miR-187-3p作为肝细胞癌生物标志物在诊断和预后中的价值。方法收集2012-01-01-2016-11-30于中国人民解放军成都军区总医院初诊为肝细胞癌的81例患者(患者未经任何治疗)血样,随机抽取同一时期年龄与性别基本一致的81名健康人血样作为对照。前期miRNA芯片筛选出Huh7肝癌细胞和Huh7肝癌干细胞中差异表达的miRNAs,并采用qRT-PCR验证在Huh7肝癌细胞和Huh7肝癌干细胞及10对临床肝癌组织和癌旁组织中表达差异最明显的6个miRNAs,筛选出差异具有统计学意义的miRNAs作为后续血清检测的候选miRNAs。检测和统计分析候选miRNAs在肝细胞癌患者和健康人群血清中的含量差异,分析其含量与患者部分临床病理学特征的相关性及其作为肝细胞癌诊断血清标志物的诊断效能,并分析其与肝细胞癌患者生存状况的关系。结果 (1)miR-187-3p在81例肝细胞癌患者血清中的平均相对含量为3.38±0.44,在81例健康人群血清中的平均相对含量为1.08±0.067,差异有统计学意义,χ~2=7.382,P<0.001。肝细胞癌患者血清中miR-187-3p含量和患者年龄、肿瘤大小、Child分级、AFP、ALT、门静脉癌栓和肿瘤转移情况无明显相关性,但与巴塞罗那分期相关,χ~2=4.007,P=0.049。(2)miR-187-3p诊断肝细胞癌的ROC曲线下面积为0.84,最佳灵敏度和特异度分别为76.53%和82.71%,95%CI为0.77~0.89,P=0.001。(3)42例miR-187-3p低含量组肝细胞癌患者中位无病进展期(median progression free survival,mPFS)为9.4个月,39例miR-187-3p高含量组肝细胞癌患者mPFS为2.2个月,差异有统计学意义
- 王丹李东李华赵源源漆仲春王涛彭晶晶孙非凡刘煜张涛
- 关键词：肝细胞癌生物标志物
- 程序性死亡蛋白配体1在CD133^(+)人肝癌干样细胞中的表达及功能研究被引量：2
- 2023年
- 目的探讨肝癌干样细胞(LCSLC)中程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达及其对LCSLC肿瘤干细胞特性和肿瘤生物学功能的影响,探索LCSLC中调控PD-L1表达变化的上游信号通路和PD-L1调控干细胞特性和肿瘤生物学功能的下游分子机制。方法采用无血清球培养法培养肝癌细胞HepG2,获得LCSLC。采用流式细胞术检测LCSLC中CD133等干性标志物分子的表达,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其干性特征分子和PD-L1的表达,细胞功能实验检测其肿瘤生物学功能,确认所获得的LCSLC具备肿瘤干细胞特性。以细胞信号通路抑制剂处理LCSLC,明确介导PD-L1表达变化的相关上游信号通路。利用小干扰RNA(siRNA)下调LCSLC中PD-L1的表达,检测干性特征分子的表达变化、LCSLC体内外肿瘤生物学功能变化以及下游细胞信号通路的变化。结果与普通HepG2细胞比较,LCSLC中CD133的表达率升高[分别为(92.78±6.91)%和(1.40±1.77)%,P<0.001],干性特征分子CD133、Nanog、Oct4A和Snai1的表达水平升高(均P<0.05),第7天的成球细胞数增多[分别为(395.30±54.05)个和(124.70±19.30)个,P=0.001],细胞迁移率升高[分别为(35.41±6.78)%和(10.89±4.34)%,P=0.006],穿膜细胞数增多[分别为(75.77±10.85)个/视野和(20.00±7.94)个/视野,P=0.002],克隆细胞数增多[分别为(120.00±29.51)个和(62.67±16.77)个,P=0.043],G_(0)/G_(1)期细胞数增多[分别为(54.89±3.27)个和(32.36±1.50)个,P<0.001]。小鼠成瘤实验显示,LCSLC组移植瘤的重量为(1.32±0.17)g,体积为(1779.0±200.2)mm^(3),均高于HepG2细胞组[分别为(0.31±0.06)g和(645.6±154.9)mm^(3),均P<0.001]。LCSLC中PD-L1蛋白表达水平为1.88±0.52,mRNA的表达水平为2.53±0.62,均高于HepG2细胞(均P<0.05)。细胞信号通路相关蛋白磷酸化信号传导及转录活化因子3(p-STAT3)和p-Akt在LCSLC中的表达水平高于HepG2细胞(均P<0.05),经抑制剂处理下调p-STAT3和p-Akt的表达后,PD-L1的表达亦随之�
- 柏玉娣施茂林李思琪汪小莉彭晶晶周代君孙非凡李华王超杜敏张涛李东
- 关键词：肝肿瘤肿瘤干细胞CD133
- 程序性死亡配体1在索拉非尼耐药肝癌细胞中的表达和功能被引量：4
- 2018年
- 目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)在索拉非尼耐药人肝癌细胞中的表达及其功能。方法采用浓度递增法构建索拉非尼耐药人肝癌细胞株(Hep3B-SR和Hep G2-SR),用CCK-8法检测半数抑制浓度(IC50)并计算耐药指数,蛋白质印迹法和q PCR检测P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和PD-L1的表达。转染si RNA沉默耐药细胞PD-L1的表达并检测沉默效率。沉默PD-L1表达后,CCK-8法检测IC50、计算耐药指数,并检测耐药基因的表达,用细胞增殖实验检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移情况,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 Hep3B-SR和Hep G2-SR的耐药指数分别为5.4和5.2。耐药细胞中P-gp、MRP1和PD-L1表达较亲本细胞上调(P均<0.01)。沉默PD-L1表达后,Hep3B-SR和Hep G2-SR的耐药指数分别下降为1.8和1.5,P-gp和MRP1的表达下调(P均<0.01);沉默PD-L1表达可抑制耐药细胞的增殖、迁移、克隆形成并促进其凋亡(P均<0.01),合用索拉非尼时作用更为显著。结论 PD-L1在索拉非尼耐药人肝癌细胞中高表达;抑制PD-L1表达可部分逆转索拉非尼耐药人肝癌细胞的耐药性,提高索拉非尼的抗癌效果;抑制PD-L1表达可有效抑制索拉非尼耐药人肝癌细胞的生长,合用索拉非尼其抗癌效果更强。
- 孙非凡李东李华王涛刘煜张涛
- 关键词：肝细胞癌索拉非尼基因沉默
- MicroRNA-1对肝癌细胞BAG4表达的影响被引量：7
- 2014年
- 目的观察microRNA-1(miR-1)对肝癌细胞系Hep3B死亡结构域沉默子(BAG4)的表达及细胞凋亡的影响。方法 Western blot检测肝癌组织中BAG4蛋白表达情况;将过表达miR-1的质粒转染肝癌细胞Hep3B,分别用RT-qPCR及Western blot检测BAG4 mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡;生物信息学软件分析miR-1和BAG4 3’UTR作用关系。结果 BAG4蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织;Hep3B转染miR-1过表达质粒后,相较于阴性对照(NC)组,BAG4mRNA和蛋白水平的表达均有所降低;早期凋亡率明显增高。生物信息学分析提示BAG4是miR-1潜在靶基因。结论 miR-1可以诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,其作用可能和抑制BAG4表达有关。
- 刘煜李华李东张涛
- 关键词：肝癌MICRORNA-1凋亡
- PD-L1表达对晚期肺腺癌患者培美曲塞化疗效果的影响及其机制被引量：14
- 2021年
- 背景与目的:肺癌组织程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达水平不仅是程序性死亡[蛋白]-1(programmed death-1,PD-1)/PD-L1抑制剂最主要的疗效预测生物标志物,还可能影响表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)的疗效。然而,肺癌组织PD-L1表达水平能否影响肺腺癌患者化疗效果,目前相关文献报道较少。探讨肺腺癌组织PD-L1表达对培美曲塞为基础的化疗效果的影响及其潜在机制。方法:2015年10月—2018年12月于中国人民解放军西部战区总医院肿瘤诊治中心确诊为肺腺癌且符合研究入组条件的患者共185例。应用免疫组织化学法分别检测肺腺癌组织中PD-L1和培美曲塞疗效预测分子胸苷酸合酶(thymidylate synthase,TS)的表达。采用Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,采用log-rank检验和COX回归模型分析影响患者无疾病进展生存(progression-free survival,PFS)的临床病理学因素,采用log-rank检验分别分析PD-L1和TS表达对患者PFS和总生存(overall survival,OS)的影响,采用Spearman秩相关性检验分析肺腺癌组织中PD-L1表达与TS表达的相关性。应用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分别检测6种肺腺癌细胞系中PD-L1、TS的蛋白水平和mRNA表达。采用Pearson相关性检验分析PD-L1和TS在蛋白表达水平及mRNA表达水平的相关性。结果:在51例一线接受培美曲塞为基础化疗的晚期肺腺癌患者中,PD-L1表达阳性患者的客观有效率(objective response rate,ORR)和疾病控制率(disease control rate,DCR)与PD-L1表达阴性患者相比差异无统计学意义(ORR:20.0%vs 35.5%,χ~2=1.404,P=0.236;DCR:60.0%vs 80.6%,χ~2=2.602,P=0.107)。PD-L1表达阴性患者的中位无疾病进展生存(median progression-free survival,mPFS)显著优于PD-L1表达阳性患者(mPFS:5.6个�
- 施茂林柏玉娣王超李思琪周代君彭晶晶孙非凡李东李东
- 关键词：肺腺癌PD-L1胸苷酸合酶培美曲塞
