湖北省教育厅自然科学基金(Q200513003)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- Fas siRNA真核表达载体构建及其抑制Jurkat细胞凋亡的作用
- 2010年
- 目的构建Fas(CD95)特异性siRNA真核表达载体psilencircle-FasSi,转染Fas-FasL凋亡敏感细胞株Jurkat,研究其抗凋亡作用。方法通过聚合酶链式反应(PCR)制备siRNA表达框架(SECs),转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测FasmRNA抑制率,筛选出高效抑制FasmRNA表达的siRNA;把筛选出的siRNA序列插入siRNA真核表达质粒psilencircle,构建psilencircle-Fas-Si;psilecircle-FasSi转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测FasmRNA、Westernblot检测Fas蛋白;anti-FasmAb刺激Jurkat细胞凋亡,流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡率。结果酶切、测序证明成功构建了psilecircle-FasSi,实时荧光定量PCR及Westernblot表明psilencircle-FasSi可抑制FasmRNA和蛋白表达,流式细胞术检测证实psilencircle-FasSi可抑制Jurkat凋亡率。结论我们成功构建了Fas特异性siRNA真核表达载体psilencircle-FasSi,它不仅可以下调Jurkat细胞的Fas表达而且可以显著抑制Fas-FasL途径诱导的凋亡。
- 任东明柯红王一羽王磊
- 关键词：SIRNAFAS真核表达载体细胞凋亡
