国家自然科学基金(81000798)
- 作品数：18 被引量：48H指数：5
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- 半月板组织工程中支架材料的研究进展被引量：1
- 2013年
- 半月板损伤是关节外科中最常见的损伤之一，对于半月板损伤最佳的治疗方法应该是用正常半月板去替代已损伤的组织。近年来，纤维软骨的修复重建尤其是半月板的组织工程学修复成为了研究重点。在组织工程技术中，有许多基本的生物学因素需要解决，主要包括细胞来源、支架材料、生物反应器的设计和培养环境等。支架材料是半月板组织修复再生中最主要的因素之一。
- 陈松车符培亮丛锐军吴宇黎
- 关键词：半月板损伤生物学因素生物反应器
- 半月板组织工程研究进展
- 2013年
- 半月板损伤是关节外科中最常见的损伤之一，半月板的组织工程学修复成为了研究重点。笔者就半月板组织工程涉及的种子细胞、支架材料、细胞因子、机械刺激等最新研究进展作一概述。
- 陈松符培亮丛锐军吴宇黎
- 关键词：半月板损伤关节外科种子细胞细胞因子机械刺激
- TGF-β3、BMP-2及地塞米松诱导兔滑膜MSCs成软骨分化的研究被引量：9
- 2014年
- 目的探讨TGF-β3、BMP-2及地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导兔滑膜MSCs(synovial MSCs,SMSCs)成软骨分化的作用。方法取5只10~16月龄新西兰大白兔(体重1.8~2.5 kg)膝关节滑膜分离培养SMSCs,并行形态学观察、流式细胞仪检测细胞表面抗原及成脂、成骨诱导分化鉴定。采用PELLET培养系统,将聚丙烯管中的SMSCs团块分成8组,分别加入不同组合的细胞因子进行成软骨诱导培养。A组TGF-β3,B组BMP-2,C组DEX,D组TGF-β3+BMP-2,E组TGF-β3+DEX,F组BMP-2+DEX,G组TGF-β3+BMP-2+DEX,H组为对照组。通过比较各组软骨微球的直径、重量,蛋白聚糖(甲苯胺蓝染色)、Ⅱ型胶原(免疫组织化学染色)表达,以及软骨标志基因表达水平[实时定量RT-PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)]来评价各组细胞因子诱导SMSCs成软骨能力大小,确定最佳成软骨诱导细胞因子组合;并通过检测各组软骨微球DNA含量来评价软骨微球重量增加与细胞增殖的关系。结果经鉴定,成功从新西兰大白兔膝关节处滑膜分离获得SMSCs。A^F组诱导产生的软骨微球直径较小、重量较轻,Ⅱ型胶原及蛋白聚糖合成量亦较低;而G组诱导产生的软骨微球直径最大,重量最重,蛋白聚糖及Ⅱ型胶原合成量亦最多,均显著高于A^F组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,G组软骨相关基因(SOX-9、聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、BMP受体Ⅱ)的相对表达量显著高于其余各组(P<0.01)。各组软骨微球DNA含量随时间延长不断降低(7 d降低约70%,14 d降低约80%,21 d降低约88%)。结论 SMSCs在TGF-β3、BMP-2及DEX三者联合诱导条件下成软骨分化能力最强;软骨微球重量的增加由细胞外基质合成增多导致,而不是由细胞增殖引起。
- 陈松符培亮丛锐军吴海山许震宇
- 关键词：TGF-Β3BMP-2成软骨分化
- 大鼠骨髓间充质干细胞成软骨过程中微小RNA的表达被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨转化生长因子-β3（TGF-β3）诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）向软骨分化过程中微小RNA（miRNAs）的表达,并观察过表达miR-90a对BMSCs成软骨分化的影响。方法 体外分离培养大鼠BMSCs,取第3代BMSCs,在全培养基基础上将其分成两组：实验组加入TGF-β3诱导成软骨分化,对照组不加TGF-β3。在诱导BMSCs向软骨分化第7、14、21天,采用微阵列基因芯片技术分析分化过程中miRNAs的表达,并采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术对差异表达的miRNAs进行验证。在实验组的基础上,将成软骨诱导的BMSCs分为两组：实验组转染miR-90a mimics使其过表达,对照组转染mimics-NC,从而验证过表达miR-90a对BMSCs成软骨分化的影响。结果 体外成功分离培养大鼠BMSCs。微阵列基因芯片技术筛选出了BMSCs向软骨分化过程中相对于对照组表达差异在2倍以上的miRNAs共16个,其中表达上调的有9个,表达下调的有7个。采用RT-qPCR方法对表达上调的miR-340和miR-140以及下调的miR-21和miR-132进行验证,结果显示RT-qPCR与微阵列芯片的结果一致,说明本研究芯片结果真实可靠。实验组转染miR-90a mimics使其过表达结果显示,软骨细胞特异性细胞质成分糖胺多糖（GAG）较对照组明显减少。结论 BMSCs向软骨分化过程中有诸多miRNAs参与调节,过表达miR-90a可以明显抑制BMSCs的成软骨过程。
- 陈松符培亮吴海山许震宇
- 关键词：骨髓间充质干细胞成软骨分化微小RNA
- 滑膜间质干细胞与小肠黏膜下层体外复合成软骨诱导培养的实验研究被引量：3
- 2014年
- 目的：探讨小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）作为组织工程支架材料的生物安全性及生物相容性，以及SIS复合滑膜间质干细胞（synovial mesenchymal stem cells，SMSCs）体外成软骨诱导培养的可行性。方法常规方法自新西兰大白兔体内分离、培养SMSCs，物理方法及Abraham方法处理猪SIS，采用热源试验、皮肤致敏试验、全身毒性试验等方面检测SIS作为支架材料的生物安全性；将SMSCs与SIS复合进行体外成软骨诱导培养，观察SMSCs与SIS的组织相容性，及SMSCs在SIS支架上的增生及成软骨分化能力。结果经物理方法及Abraham方法处理后的SIS为表面光滑的浅乳白色半透明基膜，电镜下显示表面纤维组织交错形成疏松的三维网状立体结构，孔隙率约80%，孔径约100~200μm，且具有很好的生物安全性及生物相容性。扫描电镜显示SMSCs在SIS支架上黏附、生长及增殖活性良好，并能长入SIS的孔隙内，并分泌大量的细胞外基质，细胞间通过突起相互连接、或伸出伪足贴附于支架孔壁上；同时SMSCs与SIS复合物在体外具有良好的成软骨诱导分化能力，培养21 d后，免疫组织化学染色显示Ⅱ型胶原表达阳性。结论 SIS作为组织工程支架材料具有良好的生物安全性和生物相容性，对复合培养SMSCs的生长和定向诱导分化能力无抑制作用。
- 陈松彭松符培亮吴宇黎丁喆如周琦丛锐军吴海山许震宇
- 关键词：间质干细胞肠黏膜
- 滑膜间充质干细胞在软骨修复组织工程中的研究进展被引量：7
- 2013年
- 关节软骨一旦损伤将很难修复，运用自体软骨细胞移植治疗软骨损伤，愈后较好，但由于细胞来源不足以及供体部位病变等缺点，使其运用受到了限制，因此运用间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）来修复软骨损伤具有很好的应用前景。
- 陈松符培亮吴海山
- 关键词：间充质干细胞软骨修复滑膜软骨损伤自体软骨细胞关节软骨
- 人滑膜间充质干细胞的分离培养与鉴定被引量：6
- 2014年
- 背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的"种子细胞"至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对机体损伤小等优点,越来越受到研究者的青睐。目的:探讨人SMSCs体外分离、培养的方法与步骤,探索对SMSCs进行鉴定的最新方法。方法:关节镜下获取11例行关节镜手术患者的滑膜组织,按照Pei等[6]的方法分离培养滑膜干细胞;从细胞形态学观察、细胞生长曲线分析、CCK-8测定增殖活力、流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原、对SMSCs进行成脂/成骨/成软骨诱导、免疫细胞荧光染色以及RT-PCR检测成脂/成骨/成软骨相关基因的表达等方面对SMSCs进行鉴定。结果与结论:按照Pei等的方法可以成功地从人滑膜组织中分离出干细胞,分离出的干细胞具有间充质干细胞特异性表型和多向分化潜能。
- 陈松符培亮丛锐军吴海山许震宇
- 关键词：滑膜间充质干细胞成骨诱导
- 滑膜间充质干细胞成纤维软骨分化条件初步探索被引量：4
- 2015年
- 目的采用正交实验研究滑膜间充质干细胞(synovial derived MSCs,SMSCs)成纤维软骨分化的条件。方法 5只成年新西兰白兔,活检取滑膜组织。贴壁法获取SMSCs后采用流式细胞仪及成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定。根据预实验与文献综述寻找与SMSCs成纤维软骨分化可能相关的条件,采用缺失实验初筛必要条件后,TGF-β1、BMP-2、地塞米松、脯氨酸、柠檬酸(ascorbic acid,ASA)、丙酮酸、胰岛素+转铁蛋白+亚硒酸预混液、牛血清白蛋白、b FGF、间断静水压、BMP-7、IGF纳入正交实验,采用SPSS18.0统计软件设计L60(212)正交实验及表头,定义2水平条件,在SMSCs-三维小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)支架上诱导成纤维软骨分化。使用流式细胞仪计数,检测CD151+/CD44+细胞并记录SMSCs向纤维软骨分化的转换率,采用免疫组织化学染色,结合细胞形态、甲苯胺蓝染色、半定量RT-PCR检测SOX9、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、ColⅡ、ColⅨ基因表达,进一步验证结果。检验指标rate是CD151+/CD44+细胞与高表达ColⅠ细胞的比例乘积。同时采用Pico Green Assay测量细胞总DNA量,以反映细胞扩增情况。正交实验结果采用直观观察和主体间方差分析方法,考虑部分因子间的1阶交互作用,组间差异采用LSD和q检验验证,使用Ⅲ型平方和校正模型,检验水准α=0.05。结果实验获取的细胞为SMSCs,细胞倍增时间为28 h。成纤维软骨分化过程中SMSCs-三维SIS支架体积5 d倍增,14 d后得到甲苯胺蓝染色阳性的细胞-支架复合物。正交实验结果直观分析示,TGF-β1对成纤维软骨分化转化率的作用最明显,BMP-7采用水平2有利于得到更高的转化率,但与BMP-2存在交互作用;其余第1区组水平值加和高于22.5的因子有DEX、ASA、ITS、转铁蛋白、b FGF,模型的相关性好。方差分析校正模型P=0.000,能够满足实验设计;截距P=0.000,说明各因子对因变�
- 符培亮丛锐军陈松张雷丁喆如周琦李林涛许震宇吴宇黎吴海山
- 关键词：滑膜间充质干细胞纤维软骨细胞正交实验
- 体外条件下TGF-β3、BMP-2和DEX诱导兔滑膜间充质干细胞向软骨细胞谱系分化的研究被引量：8
- 2014年
- 目的本实验拟将分离纯化得到的滑膜间充质干细胞(synovial-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)在体外培养条件下进行成软骨刺激诱导,并从转录和翻译两个水平寻找进入软骨细胞分化谱系的证据,进而判断转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导SMSCs进入软骨细胞分化谱系。方法贴壁法分离纯化得到SMSCs,在体外培养条件下用含500 ng/ml BMP-2、10 ng/ml TGF-β3、10^(-7)M DEX的高糖DMEM培养基进行刺激诱导,并在倒置相差显微镜下观察分化过程中其形态学的变化,以RTPCR检测Ⅰ、Ⅱ型胶原及软骨特异性Aggrecan(AGN)的mRNA表达,细胞免疫荧光化学染色的方法检测细胞分化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达,碱性甲苯胺蓝细胞化学染色检测软骨特异性GAG的表达,证实SMSCs的诱导成软骨作用。结果 SMSCs在前述诱导条件下,诱导后14天细胞逐渐由小梭形变为多角形、类软骨细胞样形态,RT-PCR可以检测到Ⅰ、Ⅱ型胶原及AGN基因的表达,细胞免疫荧光化学染色Ⅰ、Ⅱ型胶原、碱性甲苯胺蓝细胞化学染色结果呈阳性。而未经诱导的SMSCs形态基本保持梭形,基因表达和染色呈阴性,两组间差异显著。细胞免疫荧光化学染色分析SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天表达Ⅰ、Ⅱ型胶原;未经诱导的SMSCs不表达Ⅰ、Ⅱ型胶原。说明SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天进入软骨细胞分化谱系,可作为种子细胞在同样的诱导条件下向软骨分化。结论 SMSCs作为新的MSCs家族成员,显示出与BMSCs相似的多向分化潜能,500 ng/ml/BMP-2、10 ng/ml TGF-β、10^(-7)MDEX的高糖DMEM培养基中培养后14天,SMSCs已进入软骨细胞分化谱系。SMSCs可作为半月板组织工程的种子细胞。
- 符培亮丛锐军张雷丁喆如陈松李林涛许震宇吴海山吴宇黎
- 关键词：细胞转分化
- 体外诱导滑膜间充质干细胞成软骨分化研究进展被引量：1
- 2014年
- 间充质干细胞（MSCs）是一种成体干细胞,具有多向分化潜能等优点,作为种子细胞,在软骨损伤修复中有广阔的应用前景.MSCs来源丰富，可以从骨髓、脂肪、骨膜、肌肉以及滑膜等多种组织中获得。滑膜间充质细胞（SMSCs）由于来源广泛，取材方便，增殖能力强，而且具有比骨髓、骨膜、脂肪及肌肉来源的MSCs更好的成软骨能力，近年来深得广大研究学者的青睐。
- 谢金硕陈松丁喆如符培亮吴海山
- 关键词：间充质干细胞成软骨分化滑膜体外诱导多向分化潜能骨损伤修复间充质细胞
