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国家高技术研究发展计划(2011AA02A210)
国家高技术研究发展计划(2011AA02A210)
- 作品数:3 被引量:5H指数:2
- 相关作者:聂尧李鸣鄢洪德穆晓清汪钊更多>>
- 相关机构:江南大学浙江工业大学罗格斯大学更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:理学生物学化学工程更多>>
- 氧化还原酶共表达耦联催化合成(R)-4-甲氧基-1-苯乙醇被引量:2
- 2016年
- 针对生物催化不对称还原反应中必需辅酶再生及反应效率问题,以抗过敏药物的重要中间体化合物光学活性4-甲氧基-1-苯乙醇为目标产物,构建了羰基还原酶基因SCRII-A220D和葡萄糖脱氢酶基因gdh共表达的重组菌株E.coli BL21/p ET-SCRII-A220D-SD-AS-gdh。该双酶共表达耦联系统中,羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶酶活水平相当,有利于双酶耦联催化反应的进行。通过考察反应体系和环境条件对该共表达耦联系统催化反应的影响,发现底物质量浓度、细胞质量浓度,及反应体系温度和p H值等条件对最终产物合成效率的影响规律。在较优条件下,产物(R)-4-甲氧基-1-苯乙醇的光学纯度达到98%,产率达到82%。
- 李鸣聂尧张荣珍穆晓清徐岩
- 关键词:羰基还原酶葡萄糖脱氢酶共表达
- 羰基还原酶辅酶结合域位点突变对其不对称催化性能的影响被引量:1
- 2012年
- 基于同源模型的比较和分析,发现羰基还原酶SCR1辅酶结合域P124和W125位点对辅酶NADPH的结合形成了一定的空间位阻效应.通过对该位点进行小侧基氨基酸的取代突变,该酶的底物专一性和立体选择性均发生了不同程度的改变,表明该位点是酶与辅酶有效结合的关键位点,而且它与辅酶结合的空间效应进一步影响了底物结合域活性中心对不同构型的底物及其对映体产物的亲和作用.在底物专一性方面,野生型酶对2-羟基苯乙酮和2-溴苯乙酮及其衍生物等底物表现出较高的催化活性,而突变株W125A,W125G,P124A/W125A和P124G/W125G对苯乙酮及其部分衍生物和2-辛酮等底物的催化活性均有所提高.对于酶的立体选择性,部分突变株发生了转化产物对映体构型反转的现象,突变株P124A/W125A和P124G/W125G催化还原2-羟基苯乙酮和4-氯乙酰乙酸乙酯均生成了(R)-型产物.
- 宫绪敏聂尧徐岩肖荣Gaetano T.MONTELIONE
- 关键词:羰基还原酶定点突变底物特异性
- 紫外分光光度法表征Lipozyme TL IM脂肪酶转酯化活性(英文)被引量:2
- 2014年
- 建立了一种新的有机相脂肪酶转酯化活性测定方法.以正己烷为溶剂,脂肪酶催化棕榈酸对硝基苯酯和正丁醇的转酯化反应为模型反应,通过测定反应液中310 nm下吸光值的变化计算反应转化率.以气相色谱法对新建的紫外分光光度法进行验证,分别采用这两种方法测定了七种商品化脂肪酶的转酯化活性,两种方法所得实验结果基本一致.利用紫外分光光度检测法考察了Lipozyme TL IM脂肪酶催化转酯化的时间进程及合成活性与酶量的关系,并对Lipozyme TL IM催化转酯化的性质(最适溶剂、酰基受体特异性、醇耐受性、最优反应温度和热力学稳定性)进行了表征.
- 付显锋郑建永应向贤鄢洪德汪钊
- 关键词:脂肪酶紫外分光光度法有机溶剂