国家自然科学基金(30570099)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：北京军区总医院第三军医大学西南医院更多>>
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- DC-SIGN基因在阿萨希毛孢子菌小鼠皮肤感染时的表达与调控被引量：2
- 2008年
- 目的了解树突细胞C型凝集素(DC-SIGN)是否参与了皮肤毛孢子菌感染过程中的免疫应答。方法25只BALB/C小鼠备皮后皮下接种3.2×107cfu/ml的阿萨希毛孢子菌悬液,分别于接种后1、3、7、14d处死小鼠,切取皮损,RT-PCR检测皮肤毛孢子菌感染过程中DC-SIGN mRNA的表达,基因芯片技术观察免疫相关基因的改变。结果皮下接种后3、7、14d接种侧皮肤组织标本可扩增出DC-SIGN目的片段,而未接种侧皮肤组织标本均未扩增出DC-SIGN目的片段。补体C2、前列腺素EP4受体、肿瘤坏死因子诱导蛋白cg12-1(CG12-1)、干扰素诱导蛋白(Ifit3)、淋巴细胞抗原6复合物、CD53抗原、CD22抗原等下调。结论DC-SIGN参与了皮肤毛孢子菌的感染过程,它不仅抑制Th1型细胞免疫,而且可抑制前列腺素EP4受体及部分补体因子等,从而导致皮肤毛孢子菌感染的慢性化。
- 王文岭杨蓉娅郝震锋敖俊红赵逊张洁王聪敏
- 关键词：毛孢子菌属反转录聚合酶链反应
- 巢式PCR检测阿萨希丝孢酵母DNA被引量：5
- 2006年
- 阿萨希丝孢酵母（Trichosporon asabii,T.asahii）是引起毛孢子菌病的主要病原菌。我们在2000年报道了国内首例播散性毛孢子菌病,其后在另一家医院也发现肺部T.asahii感染。该病不仅可有广泛的皮肤损害，还可引起肝、脾、肾、肺等内脏损害，死亡率高达80％以上。由于该病少见，临床医生很少将皮损活检标本及肝穿组织直接送做真菌培养，而多首选普通病理检查。在患者需要补充检查和回顾性诊断时，蜡块组织往往是惟一可以得到的标本。因此，如能通过蜡块组织扩增T.asahii DNA特异性片段来诊断T.asahii感染具有重要的临床意义。
- 赵逊杨蓉娅王文岭敖俊红郝震锋张洁王聪敏
- 关键词：阿萨希丝孢酵母巢式PCR检测DNA播散性毛孢子菌病蜡块组织主要病原菌
- 临床分离阿萨希毛孢子菌IGS1区克隆及RFLP分析被引量：2
- 2008年
- 目的明确临床分离的5株阿萨希毛孢子菌（rasahii）基因间隔区（IGS1）的序列，分析rasahfi种内基因多态性。方法用玻璃珠法分别提取临床分离5株rasahi及标准对照株总DNA，用ITS及IGS1区特异引物，PCR扩增目的区域，IGS1区扩增产物纯化后进行克隆、测序，测序结果分别提交到基因库，获取登录号。用BLAST和CLUSTALX1．83软件对序列进行比对分析。分别用限制性内切酶HapⅡ、MboI、AluI、HhaI对ITS及IGS1区PCR产物进行酶切及RFLP分析。结果6株菌均成功扩增出长度约为540bp的ITS区及643bp的IGS1区基因片段，IGS1区序列相似性为97％～99％。RFLP分析发现，菌株BZP07003IGS1区HapⅡ酶切结果及菌株BZP07004IGSl区HhaI酶切结果与其他菌株不同，MboI及AluI酶切6株菌结果无差异，ITS区6株菌酶切结果无差异。结论rasahiiIGS1区种内存在差异。HhaI及HapⅡ可用于rasahii种内多态性的分析研究，临床分离5株菌存在3种酶切结果，初步提示rasahii临床分离株可能具有种内多态性及遗传差异。
- 夏志宽杨蓉娅王文岭敖俊红王聪敏张洁
- 关键词：毛孢子菌属DNA多态性限制性片段长度
- 阿萨希丝孢酵母cph1基因DNA序列分析被引量：2
- 2007年
- 目的明确阿萨希丝孢酵母菌(TAS)是否存在与菌丝形成调控相关的cph1基因,分析其核苷酸序列,为进一步对其功能研究奠定基础。方法用简易微量DNA提取方法从TAS中提取细胞总DNA,根据GenBank中白色假丝酵母菌(CAL)cph1基因设计多对引物,PCR方法扩增,纯化后用ABI377核苷酸测序仪对扩增产物进行克隆测序,并对测序结果进行分析。结果在29对引物中只有1对引物从TAS中扩增出长度为827 bp的基因片段,BLAST分析表明与CAL cph1基因的同源性为97.3%。结论本实验首次明确TAS cph1基因中的827个碱基序列,为进一步对该基因全序列的分析及功能研究奠定了基础。
- 夏志宽杨蓉娅王文岭樊昕王聪敏赵逊
- 巢式PCR扩增诊断播散性毛孢子菌病的动物实验研究
- 2006年
- 目的探讨应用PCR技术诊断播散性毛孢子菌病的可行性。方法建立动物模型后,于接种3、7、14 d分别采集小鼠眶静脉血和肝脏组织标本,进行真菌培养和巢式PCR扩增。结果小鼠静脉接种3、7、14 d后血清培养的阳性率分别为0、20%、0,而巢式PCR的阳性率分别为80%、90%、88.9%;在上述时相点,肝脏组织真菌培养阳性率分别为50%、40%、22.2%,而巢式PCR的阳性率分别为90%、90%、88.9%。血清和肝脏组织真菌培养阳性率与巢式PCR阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论巢式PCR扩增T.asahii特异性DNA片段,可作为播散性毛孢子菌病的一种特异、灵敏、快捷的早期诊断手段。
- 杨蓉娅赵逊郝飞
- 关键词：播散性毛孢子菌病
- IGS1、ITS和D1／D2区在毛孢子菌鉴定中的意义及国内阿萨希毛孢子菌基因分型研究被引量：3
- 2008年
- 目的比较不同DNA区域在毛孢子菌分子学鉴定方面的灵敏性和特异性以及国内临床分离5株阿萨希毛孢子菌（rasahii）基因型的研究。方法用玻璃珠法提取总DNA，用DI／D2（26S）、ITS、IGS1区的特异性引物进行PCR扩增，克隆、测序；用CLUSTAL X1．83进行比对分析，构建系统发生树并进行基因分型。结果T.asahii（CBS2479）、真皮毛孢子菌（T.dermatis）、赖巴克斯毛孢子菌（T.laibachii）3株菌D1／D2长度分别为：640、639、637bp；ITS区长度分别为：541、528、531bp；IGS1区长度分别为：643、515、411bp。临床分离5株rasahii IGS1区长度均为643bp。所有毛孢子菌D1／D2区序列相似性为：89％-99％，ITS区为85％-99％，IGS1区为11％～95％。临床分离菌株BZP07001，BZP07002，BZP07004，BZP07005属于基因型Ⅰ，菌株BZP07003属于基因型Ⅳ。结论在鉴别系统发生关系较近的毛孢子菌时IGS1区序列分析优于DI／D2、ITS区，IGS1区序列分析具有更高的灵敏性和特异性。国内临床分离5株zasahii分属基因型Ⅰ和Ⅳ。
- 夏志宽杨蓉娅王文岭敖俊红王聪敏祝贺
- 关键词：毛孢子菌属基因型
