教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-07-0615)
- 作品数：30 被引量：157H指数：8
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- 相关机构：天津医科大学总医院天津医科大学天津市神经病学研究所更多>>
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- 反义miR221/222上调TIMP3抑制胶质母细胞瘤U251细胞侵袭能力的体外研究
- Trizol 法提取人脑胶质母细胞瘤细胞系 U251、TJ861、TJ905、TJ899和 A172以及星形细胞瘤细胞系 H4细胞的总 RNA 并寓集 miRNA,晶芯®哺乳动物 miRNA 微阵列芯片杂交, 扫描后 S...
- 张春智康春生杨卫东王广秀张安玲浦佩玉
- 关键词：MIR-221MIR-222TIMP3
- 文献传递
- 脑胶质瘤PI3K信号通路的研究进展被引量：3
- 2010年
- 脑胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,因多数呈浸润性生长,治疗效果不佳,寻找有效的治疗手段势在必行。目前研究表明,胶质瘤的恶性进展涉及信号转导通路的异常,这为开辟新的治疗手段提供了新思路。现已初步证实,磷酸磷脂酰肌醇-3-羟基激酶信号转导通路异常与胶质瘤的发生、发展关系最为密切,故本文着重对该通路的相关内容作简要介绍。
- 韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：胶质瘤信号转导通路
- miR-221与miR-222通过靶基因TIMP3调控胶质瘤细胞侵袭能力被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨miR-221和miR-222在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制.方法 采用反义寡核苷酸下调miR-221和miR-222表达,Transwell、Western blot、荧光素酶实验及体内实验分别检测细胞侵袭能力、体内肿瘤生长、相关基因蛋白表达变化及靶基因鉴定.结果 下调miR-221和miR-222表达能明显抑制胶质瘤细胞侵袭能力,同时相关侵袭蛋白MMP2和MMP9表达下降.miRNA靶基因预测软件分析、Western blot、荧光素酶实验证实TIMP3是miR-221和miR-222的靶基因.裸鼠皮下肿瘤模型显示下调miR-221和miR-222表达抑制体内肿瘤生长.免疫组化发现TIMP3表达上调,MMP2和MMP9表达下调.结论 在胶质瘤细胞中,侵袭相关蛋白TIMP3是miR-221和miR-222的一个新靶基因.
- 翟博智张春智韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤MIR-221MIR-222TIMP3
- 敲低U251细胞miR-221/222表达对其基因组表达的影响
- 2011年
- 目的 采用基因表达谱芯片和生物信息学方法研究miR-221/222对胶质瘤U251细胞株信号通路的调控作用.方法 miR-221/222反义寡核苷酸瞬时转染人胶质瘤细胞株后提取总RNA进行基因表达谱检测,对差异表达基因行生物信息学分析,将核心转录因子进行实验验证.结果 敲低胶质瘤U251细胞中miR-221/222表达后,基因表达谱分析确定158个差异表达基因;生物信息学分析发现干扰素-α信号通路是受差异表达基因调节最显著的通路,其中STAT1和STAT2是干扰素-α通路的核心蛋白.结论 抑制miR--221/222基因簇表达可部分通过干扰素-α通路上调STAT1和STAT2 mRNA的翻译水平,并使U251细胞mRNA的表达谱发生改变.
- 杨旸张春智杨卫东韩磊张安玲浦佩玉康春生
- 关键词：MIR-221MIR-222神经胶质瘤
- RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法 构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论 敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.
- 韩磊张安玲岳晓许鹏杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤DICERRNA干扰生物学表型
- 靶向AKT1和COX-2的RNAi抑制U251胶质瘤细胞侵袭的体外实验被引量：3
- 2010年
- 目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其转染至恶性胶质瘤细胞系U251细胞。Realtime PCR检测RNAi后目的基因mRNA的表达水平,Western Blot检测目的基因及MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达情况。酶联免疫吸附试验检测转染前后分泌到细胞外的MMP-2和MMP-9的浓度变化。划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞转染前后的细胞侵袭能力的变化。结果rAd5-A-C转染组AKT1和COX-2的mRNA和蛋白表达均明显抑制;MMP-2、MMP-9表达下调,TIMP-2表达则上调。ELISA检测胞外MMP-2、MMP-9浓度明显减低;划痕实验显示细胞转移运动能力明显减弱,Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显减低(P<0.001)。结论重组腺病毒介导的RNAi技术可以序列特异性地抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达,在体外对U251细胞侵袭转移产生明显抑制作用,可能成为恶性胶质瘤治疗的新策略。
- 王轩韩磊杨旸岳晓张安玲王广秀贾志凡浦佩玉申长虹康春生
- 关键词：恶性胶质瘤
- 敲低miR-221、miR-222表达对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨敲低miR-221、miR-222表达对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响及机制。方法脂质体介导共转染反义miR-221（AS—miR-221）与反义miR-222（AS—miR-222）寡聚核苷酸于MCF-7人乳腺癌细胞，采用Northern blotting方法鉴定转染后细胞miR-221、miR-222表达水平。流式细胞术和Caspase-3、Caspase-7活性检测AS—miR-221、AS。miR-222联合照射后细胞凋亡。成克隆实验计算细胞增殖性死亡的增敏比。生物信息学分析查询miR-221、miR-222成熟体序列和它们与放射敏感性有关的靶基因。Western blotting分析相关靶蛋白的表达变化。结果Northern blotting显示AS-miR-221、AS—miR-222共转染组细胞miR-221、miR-222表达水平较对照组明显下降。AS-miR-221、AS-miR-222联合照射组细胞凋亡增多并增加细胞增殖性死亡，增敏比为1．87。生物信息学分析显示PTEN是miR-221、miR-222的靶基因且可提高放射敏感性。AS-miR-221、AS—miR-222共转染组细胞PTEN蛋白表达明显上调，pAkt蛋白表达下调。结论反义miR-221、AS—miR-222可能通过上调PTeN蛋白表达增强MCF-7人乳腺癌细胞放射敏感性。
- 张春智康春生曹永珍浦佩玉吕仲虹杜沟
- 关键词：PTEN蛋白
- 反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨as—miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果。方法透析法制备5-FU／PAMAM载体，透射电镜观察形态，紫外分光光度计检测载药率和包封率；流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例；MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果；免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达；Transwell检测细胞侵袭能力变化。结果纳米微粒形态规整；平均包封率为66．21％，平均载药量为31．77％；PAMAM转染效率为70．53％；共转染组细胞生长显著抑制（F=273．345，P=0．000）；凋亡比例升高（F=43．21，P=0．000），Ki67、Bcl-2表达均下调；细胞侵袭能力显著下降。结论PAMAM可以有效同载as—miR-21和5-FU，且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-FU的化疗敏感性。
- 任玉周旋原续波许鹏王广秀贾志凡张安玲韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：PAMAM
- 人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱初步研究被引量：30
- 2008年
- 目的确定部分人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱的初步特征。方法提取人脑胶质母细胞瘤细胞系U251、TJ861、TJ905、TJ899和A172以及星形细胞瘤细胞系H4细胞的miRNA，miRNA微阵列芯片杂交，扫描后分析差异表达的miRNA。选择差异表达的miR-21设计反义寡核苷酸处理U251细胞后原位杂交和Western blot检查SEPT7的表达。结果在胶质瘤细胞系中hsa—miR-21等8种miRNA一致表达上调；hsa—miR-1等18种miRNA一致表达下调。miR-21锁核酸修饰反义寡核苷酸处理U251细胞72h后，原位杂交发现阳性信号集中在细胞核的miR-21表达显著下降，Western blot发现U251细胞中SEPT7的表达明显上调。结论miRNA的差异表达可能是胶质瘤的重要分子生物学标签，并在基因表达调控中具有潜在的研究价值。
- 康春生浦佩玉贾志凡张安玲周旋王广秀
- 关键词：神经胶质瘤MIRNA微阵列表达谱
- RNA干扰技术联合抑制AKT1和COX-2表达对U251胶质瘤细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 探讨应用RNA干扰（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞株AKT1和COX-2表达后,在体外对U251细胞增殖的抑制作用.方法 构建靶向AKT1和COX-2的RNAi重组腺病毒表达载体（rAd-A＋C）转染至U251细胞.应用Realtime PCR检测AKT1和COX-2 mRNA水平的变化;应用Western blot检测AKT1和COX-2蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用MTr法和流式细胞术评价肿瘤细胞的增殖活性.结果 rAd-A＋C可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达;与对照组和无义序列处理组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示下游相关因子PCNA、Cyclin D1表达下降,而p53表达上调;细胞周期分析结果表明rAd-A＋C处理组进入S期的细胞数较对照组减少了7.0%～7.8%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示rAd-A＋C处理组细胞生长抑制率＞58%.结论 靶向AKT1和COX-2的RNAi技术可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2表达,在体外对U251细胞增殖活性产生明显抑制作用.因此,RNAi重组腺病毒表达载体介导的基因治疗可成为胶质瘤靶向治疗的新策略.
- 韩磊张安玲岳晓杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤AKT1RNA干扰增殖活性
