湖南省教育厅科研基金(07C626)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析.方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体 诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定 用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔 间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本.结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp03 19 高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白.用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度.Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的 表达条带.间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%.检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%.结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础.
- 刘双全汪世平肖勇健吴移谋赵飞骏曾铁兵张跃军高冬梅
- 关键词：密螺旋体苍白重组蛋白质类免疫活性
- 梅毒螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫活性研究被引量：5
- 2009年
- 目的表达梅毒螺旋体黏附蛋白Tp0751，纯化表达产物并进行免疫活性分析，为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析，去除Tp0751信号肽序列，构建原核表达体进行诱导表达；Ni亲和层析柱纯化重组蛋白，Western blot检测其免疫反应性，用重组蛋白免疫新西兰家兔，评价其免疫原性。结果成功构建了pET-28a（＋）-0751原核表达载体，经表达、纯化后获得了相对分子质量约为26×10^3的融合蛋白；Western blot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应；利用纯化的Tp0751重组蛋白免疫新西兰家兔，能诱导家兔产生特异性免疫应答，ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1：10 240以上。结论重组表达的Tp0751黏附蛋白具有良好的免疫活性，为进一步研究其在梅毒致病过程中的作用和生物学功能奠定了基础。
- 刘双全赵飞骏张秋桂颜向军刘兰芳吴移谋
- 关键词：梅毒螺旋体黏附蛋白重组蛋白免疫原性
- 梅毒螺旋体Tp0751重组蛋白的表达及鉴定
- 2009年
- 目的表达梅毒螺旋体粘附蛋白Tp 0751,纯化表达产物并对其抗原性进行鉴定。方法通过生物信息学分析,去除Tp 0751信号肽序列,构建原核表达体并在大肠埃希菌(E.coli)R2566中进行诱导表达;Ni-NTA法纯化重组蛋白;蛋白质印迹法(WB)鉴定重组蛋白。结果成功构建了PET-28a(+)/Tp 0751原核表达载体;经表达、纯化后获得了相对分子量约为26 kD的融合蛋白;经WB分析能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论重组表达的Tp 0751重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究Tp 0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定了基础。
- 肖勇健张秋桂刘双全谭湘芳赵飞俊
- 关键词：梅毒螺旋体粘附蛋白
