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pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响被引量：12: 2014年; 目的探讨pH值对胶体金标记单克隆抗体（mAb）性能的影响。方法用K2CO3调整胶体金溶液的pH值,得到pH值在5.0-9.0范围内的胶体金溶液,并用抗肠道病毒71型（EV71）VP1 mAb进行标记,牛血清白蛋白（BSA）封闭。用紫外-可见光谱扫描监测该标记过程中胶体金的性能改变。采用Mey氏稳定化实验检测免疫金的稳定性并检测制得的成品胶体金试纸条的灵敏度。结果 EV71-VP1 mAb在胶体金溶液pH值为7.0-8.5范围内制备的免疫金较稳定,且制得试纸条灵敏度高。结论 pH值是影响胶体金稳定性、决定胶体金与mAb间作用力的重要因素,并证实了紫外-可见光谱扫描评价pH值对胶体金标记的效果,建立了用紫外-可见光谱选择最适标记pH的方法标准。; 孙园园王云龙李玉林王继创程蕾邓黎黎; 关键词：胶体金 PH值单克隆抗体

一株细菌产生的脂肪酶性质研究被引量：5: 2011年; 从郑州油脂厂附近的土壤中筛选到一株产脂肪酶细菌,对该细菌的脂肪酶性质进行了初步研究。结果表明,该酶的最适反应温度为40℃,50℃以下稳定性良好;40℃时的最适反应pH值为7;在pH值为10时酶活力最高,pH值5～12时酶活性较为稳定;超声波处理对酶活力的影响较大,处理时间不应超过10min;研究表明该酶是具有良好开发前景的脂肪酶新酶种。; 张勇孙新城王开放杨涛张莉; 关键词：细菌脂肪酶

柯萨奇病毒 A 组16型衣壳蛋白 VP1的原核表达被引量：2: 2014年; 构建柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1重组质粒pET-41a(+)/VP1,优化诱导表达条件,进行原核表达及蛋白纯化。通过PCR扩增获得VP1基因片段并转进大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)内进行表达。从时间、温度、诱导剂浓度三个方面优化表达条件,收集表达菌体,经镍柱和DEAE柱纯化后,用蛋白印迹检测免疫反应性。结果表明,目的蛋白为包涵体,分子质量约为61ku,与设计蛋白分子质量大小相符,以诱导5h、IPTG的浓度为0.20mmoL/L、温度为37℃时蛋白表达量最高。纯化后蛋白纯度达到94%,蛋白印迹检测具有免疫反应性。试验成功获取了柯萨奇病毒A组16型(CVA16)VP1蛋白,且该蛋白具有免疫反应性。; 王云龙米海李玉林王继创程蕾邓黎黎张春艳孙园园; 关键词：柯萨奇病毒 VP1基因原核表达蛋白纯化

一株高产脂肪酶产生菌16SrDNA的序列分析被引量：5: 2012年; 【目的】对分离获得的高产脂肪酶菌株进行鉴定,为其改造和更好利用奠定基础。【方法】对从食堂下水道中分离获得的一株高效产脂肪酶细菌(JLП-4)进行培养,提取其基因组DNA。设计16SrDNA通用引物,扩增16SrDNA基因片段,并连接到pUC19-T载体上,转化大肠杆菌DH5X,经PCR鉴定的阳性克隆摇菌培养后测序。【结果】提取获得较高质量的基因组DNA,扩增获得新分离菌株16SrDNA基因片段,长度为1528bp,BLAST相似性比对分析结果表明,其与伯克霍尔德氏菌16SrDNA序列相似性达97%,是一株与伯克霍尔德氏菌最近的革兰氏阴性菌。【结论】初步将高产脂肪酶细菌JLП-4鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德菌。; 孙新城马淑玲张玲丽张浩景建洲; 关键词：脂肪酶细菌

肠道病毒检测方法述评被引量：4: 2011年; 综述了肠道病毒的种类、结构、生物学特性、致病性及肠道病毒的检测方法.通过对各方法优缺点的比较,认为免疫学检测方法在方便快速检测肠道病毒中的独特优势,尤其是免疫胶体金标记法和酶联免疫吸附试验备受青睐.提出确定肠道病毒的共同抗原和研制胶体金多元化检测试纸条可作为今后肠道病毒的通用检测方法的研究重点.; 孙新城周贺娟; 关键词：免疫学检测

角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定: 2014年; 为制备角蛋白19片段(CYFRA21-1)的单克隆抗体(mAb),采用间接ELISA方法检测免疫小鼠的抗体效价,融合、筛选、克隆化单克隆抗体,将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水,采用辛酸硫酸铵法、蛋白A柱纯化腹水抗体,以SDS-PAGE凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度;利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定;采用阻断ELISA法测定mAb的敏感性(IC50)。结果表明,筛选获得4株分泌角蛋白19片段mAb的细胞株,将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔,分别获得效价为2.56×105、5.12×105、5.12×105、2.56×105的单克隆抗体,经纯化,抗体蛋白浓度为12.43mg/mL^16.00mg/mL,为IgG1型抗体,其IC50在1.03ng/mL^1.53ng/mL之间。说明获得了4株分泌高效价CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株,为建立CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。; 张慧茹翟晋豫刘珍王雪琴孟素香; 关键词：单克隆抗体 IGG

食品中3种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用被引量：12: 2011年; 目的:建立同步速测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。方法:利用基因组比对法寻找3种致病菌的特异性序列——沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和单增李斯特菌的prs基因,运用Primer Premier 5.0分别设计3对片段大小不同的特异性引物;通过优化反应体系,建立3种致病菌的多重PCR检测体系。结果:建立的多重PCR方法灵敏度测试结果分别为7.6、3.8、5.1pg/μL,在此灵敏度下可以扩增出全部特异性引物条带,验证性实验结果出现相应的目的条带且未发生交叉影响。结论:初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中沙门菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的三重PCR方法。; 钱志伟孙新城; 关键词：食源性致病菌沙门氏菌金黄色葡萄球菌单核细胞增生性李斯特菌食品检测

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