国家自然科学基金(30901344) 作品数:10 被引量:51 H指数:5 相关作者: 王芳 王芳 王鹏 季荔 王洪珍 更多>> 相关机构: 南京医科大学 江苏省人民医院 山东医学高等专科学校 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省实验诊断学重点实验室基金 山东省医药卫生科技发展计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
TLRs介导调控Treg细胞功能的研究进展 被引量:4 2012年 Toll样受体(toll like receptors,TLRs)属模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR),是重要的天然免疫分子.被视为联系固有免疫和适应性免疫的重要桥梁。Treg细胞(regulatoryT cells,Tregs)是一群具有抑制功能的T细胞亚群,能够抑制效应性T细胞的增殖、激活以及B细胞产生免疫球蛋白等。近来有研究表明Ⅲ.Treg细胞上TLRs的激活可增强或削弱Treg细胞的免疫抑制功能.TLRs对Treg细胞功能的调节作用可能对感染、肿瘤免疫监视、移植排斥等过程产生影响。因此,了解Treg细胞和TLRs间的联系,可能有助于发现新的治疗靶目标和治疗方法。 徐娟(综述) 王芳关键词:TLRS 细胞功能 TREG细胞 免疫抑制功能 介导 卵巢癌患者CD4^+T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达特点及临床意义 被引量:7 2015年 目的:探讨卵巢癌患者外周血和肿瘤组织CD4+调节T细胞中性T细胞相关分子标志物(Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR)的表达特点及其临床意义。方法 :流式细胞术检测31例卵巢癌患者,26例卵巢良性肿瘤患者和20例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CD127、CTLA-4及GITR的表达水平。结果:卵巢癌组织CD4+T细胞中的Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD127在卵巢癌组织CD4+T细胞中所占的比例显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01);卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4及GITR的表达水平均显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01),CD127的表达水平显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.01);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中Foxp3的表达水平显著高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者外周血CD4+T细胞中CD127的表达水平显著低于Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血及肿瘤组织中CD4+Treg细胞的表达水平显著高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组,Foxp3和CD127的表达水平与肿瘤分期有关,提示这两种标志物可作为判断卵巢癌疾病进展的重要指标。 张淑平 吴梦 柯星 娄鉴芳 黄珮珺 黄蕾 孙瑞红 潘世扬 王芳关键词:卵巢肿瘤 流式细胞术 Th17细胞的研究进展 被引量:6 2011年 免疫是人体的一种生理功能,人体依靠这种功能识别"自己"和"非己"成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原物质、人体本身所产生的损伤细胞、肿瘤细胞等,以维持人体的健康。人体的免疫反应可分为非特异性和特异性免疫,后者主要由T淋巴细胞和B淋巴细胞参与。CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成分,参与免疫应答的各个阶段, 季荔 王芳关键词:CD4阳性T淋巴细胞 白细胞介素17 TH17细胞 临床疾病 钙网蛋白融合HBsAg基因重组腺病毒新型载体疫苗的构建与鉴定 2011年 目的:构建表达钙网蛋白(calreticulin,CRT)与乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)融合基因重组腺病毒载体(Ad-CRT/HBsAg),为研发新型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)治疗性疫苗奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPowerTM Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用RT-PCR的方法扩增CRT基因,并进一步构建CRT与HBsAg基因融合重组的pJW4303表达载体,在构建过程中给融合基因加上特定的CACC接头,再克隆入载体pEN-TR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTMⅡEnzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆Ad-CRT/HBsAg。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测Ad-CRT/HBsAg载体是否能正确表达目的蛋白。结果:构建的含有CRT/HBsAg融合基因的腺病毒表达克隆,经PCR和测序鉴定构建正确。重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增,获得的病毒滴度为2.68×1011 pfu/ml,且这个重组病毒载体能正确表达CRT/HBsAg融合蛋白。结论:成功构建了CRT/HBsAg融合基因重组腺病毒载体(rAd-CRT/HBsAg),为此重组载体用于治疗HBV慢性感染以及HBsAg阳性肝癌奠定基础。 张兰春 王宝红 王芳 马春玲关键词:钙网蛋白 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒表面抗原 腺病毒表达载体 治疗性疫苗 非小细胞肺癌患者血清中SP70的检测及其临床意义 被引量:24 2012年 目的评价血清中单抗NJ001相关靶抗原SP70能否成为检测非小细胞肺癌(NSCLC)的新型血清肿瘤标志物。方法以SPC—A1为抗原免疫新西兰兔,制备多抗。用多抗包被微孔板,NJ001为一抗,酶标记的羊抗鼠抗体为标记抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并优化实验条件;采用该法对2007年10月至2011年6月从南京医科大学第一附属医院收集的经病理确诊的175例肺癌(包括80例肺腺癌、70例肺鳞癌和25例小细胞肺癌)、25例肺良性疾病患者和300名健康体检者血清中SP70进行检测;同时与电化学发光法检测癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和角质蛋白19片段(CYFRA21—1)进行比较;各组问阳性率比较采用,检验或Fisher确切概率法。结果肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌和肺良性疾病组的阳性率分别为68.8%、51.4%、16.0%和12.0%,均明显高于健康体检组(7.3%);NSCLC组(肺腺癌和肺鳞癌)阳性率高于小细胞肺癌组(60.7%vs16.0%,x2=17.23,P〈0.05)和肺良性疾病组(60.7%vs12.0%,r=20.41,P〈0.05);68例有分期资料的NSCLC患者中,早期组(x2=30)的阳性率达76.7%。另外,ELISA法对NSCLC患者SP70总检出率高于CEA、NSE和CYFRA21—1(32.7%、18.0%和37.3%),差异有统计学意义(60.7%vs32.7%,χ^2=23.63,P〈0.05;60.7%vs18.0%,χ^2=57.22,P〈0.05;60.7%vs37.3%,χ^2=16.34,P〈0.05)。结论NSCLC患者血清中SP70阳性检出率较高,SP70可能是潜在的用于诊断NSCLC的血清肿瘤标志物。 彭婪 潘世扬 王芳 黄佩珺 徐婷 黄蕾 张丽霞 黎青 张红梅 徐建 秦雪君 韩月 徐娟 朱善军关键词:肺肿瘤 HSP70热休克蛋白质类 酶联免疫吸附测定 良恶性胸腔积液鉴别中SP70检测的临床意义 被引量:13 2012年 目的探讨SP70抗原的检测对鉴别癌性胸腔积液和非癌性胸腔积液的诊断价值。方法采用病例对照研究。收集2011年7月至2012年2月经临床确诊的肺癌患者胸腔积液108例和非癌性胸腔积液122例,采用双抗体夹心ELISA法对胸腔积液中SP70抗原进行检测;同时与电化学发光法检测CEA、CYFRA21—1和NSE的结果进行比较;采用直接免疫荧光法对胸腔积液脱落细胞上的SP70抗原进行检测,并与HE染色法的脱落细胞学检测结果进行比较,各组问阳性率比较采用矿检验或Fisher确切概率法。结果癌性胸腔积液患者中SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的阳性率分别为72.2%、58.3%、52.8%和30.6%,显著高于非癌性胸腔积液组(9.8%、13.1%、23.O%和19.7%),SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的特异度分别为90.2%、86.9%、77.0%和80.3%;非小细胞肺癌组的总阳性率显著高于小细胞肺癌组的阳性率(74.3%〉0.0%),差异有统计学意义(P=0.02〈0.05),癌性胸腔积液患者中SP70的阳性符合率高于传统脱落细胞学HE染色的阳性符合率(72.2%〉47.2%),差异有统计学意义(x2=14.03,P〈0.05)。结论测定胸腔积液中及脱落细胞上的SP70抗原,能提高癌性胸腔积液诊断的敏感度和特异度。 杨瑞霞 潘世扬 王芳 徐建 黄珮珺 张燕 徐娟 韩月 朱善军 曹艳 王鹏 许雨乔 娄鉴芳 史新惠关键词:酶联免疫吸附测定 荧光免疫测定 胸腔积液 虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒表达载体的构建与鉴定 2010年 目的:构建表达虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为腺病毒中和抗体流行水平的定量检测奠定基础。方法:采用腺病毒表达系统(ViraPower Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体。首先利用PCR的方法扩增虫荧光色素酶基因使其具备特定的CACC接头,以连接、转化、提取质粒等方法克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆,经PCR及测序鉴定正确后,用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆rAd-Luci。表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒。经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测rAd-Luci载体是否能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并检测此酶蛋白的功能活性。结果:用PCR的方法扩增到具有CACC接头的虫荧光色素酶基因,其重组入门和腺病毒表达克隆经PCR和测序鉴定构建正确,重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增后获得的病毒滴度为1.8×1011 pfu/ml,此病毒能正确表达虫荧光色素酶蛋白,并且具有较强的功能活性。结论:成功构建了虫荧光色素酶报告基因重组腺病毒载体,为此重组载体用于腺病毒中和抗体的定量检测奠定基础。 马春玲 王芳 刘琳琳 王法权关键词:腺病毒表达载体 中和抗体 microRNA与Toll样受体在NF-κB信号通路中的相互调控作用 被引量:3 2013年 Toll样受体(toll.1ikereceptors,TLRs)是一种模式识别受体,参与慢性炎症反应及肿瘤微环境的形成。当其识别相应配体后,可以通过活化一系列信号转导分子激活TLRs通路,介导相应免疫反应。在此过程中,研究发现microRNA(miRNA)家族成员在TLRs通路中发挥了重要作用。一方面TLRs可以诱导miRNA的表达或上调其表达水平,同时miRNA也可调控TLRs通路。 娄鉴芳 王芳关键词:NF-ΚB信号通路 TOLL样受体 MICRORNA 模式识别受体 TLRS 慢性炎症反应 Human herpesvirus 6A induces apoptosis of HSB-2 cellsvia a mitochondrion-related caspase pathway 被引量:1 2010年 Apoptosis plays an important role in the pathogenesis of viral infections.In this study,we investigated the cell death processes during productive HHV-6A infection and the underlying mechanisms.Annexin V-PI staining and electron microscopy indicated that HHV-6A is a strong inducer of apoptosis.HHV-6A infection decreased mitochondrial transmembrane potential and led to morphological changes of mitochondria.The cell death was associated with activation of caspase-3 and cleavage of DNA repair enzyme poly (ADP-ribose) polymerase,which is known to be an important substrate for activated caspase-3.Caspase-9 was activated significantly in HHV-6A-infected cells,whereas caspase-8 was not activated obviously.Moreover,HHV-6A infection upregulated Bax and downregulated Bcl-2.This is the first demonstration of mitochondrion-mediated,caspase-dependent apoptosis in HHV-6A-infected cells. Lingyun Li Jing Chi Feng Zhou Dandan Guo Fang Wang Genyan Liu Chun Zhang Kun Yao关键词:APOPTOSIS CASPASE Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症相关性研究 被引量:5 2011年 目的从免疫学角度探讨Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症(EM)的关系。方法应用流式细胞技术检测40例EM及40例对照组外周血中Th1/Th2型细胞的百分比。结果 EM组外周血中,Th1型细胞较对照组显著降低(P〈0.05);而Th2型细胞较对照组显著升高(P〈0.05);EM组Ⅲ~Ⅳ期患者外周血中,Th2型细胞明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P〈0.05)。结论 EM患者外周血中Th1型细胞明显减少,Th2型细胞明显增多,呈Th2优势漂移的现象,并且与疾病的分期相关,Th1/Th2型细胞模式失衡在EM的发病机制及疾病进展中可能具有重要的作用。 王洪珍 王芳 马春玲关键词:子宫内膜异位症 TH1细胞 TH2细胞 流式细胞术