国家自然科学基金(39830280)
- 作品数：41 被引量：344H指数：10
- 相关作者：张涌徐永平安志兴郑月茂卿素珠更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学中国科学院扬州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响被引量：11
- 2004年
- 实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附殖前胚胎发育的影响.电融合强度为140V/mm,10μs/次对的效率要较100V/mm,20μs/次和180V/mm,10μs/次时高,可以降低融合后重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率.施加直流电脉冲前先给予5V交流电场预处理数秒钟,然后在电极之间通以两个直流脉冲(140 V/mm,10μs/次,间隔0.1 s)与不用交流电预处理对融合率和重构胚的发育率无显著差异.另外实验比较了甘露醇和山梨醇两种融合液对融合及重构胚发育的影响,结果表明囊胚发育率差异不显著,但山梨醇较甘露醇融合液更容易操作.实验生出的4头克隆牛存活至今.
- 张利生毕春明李劲松吴昱琪寇朝辉姜岩蒋满喜吕自力王小宁孙青原陈大元
- 关键词：克隆牛电融合胚胎发育核移植卵母细胞
- 克隆波尔山羊的微卫星DNA鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的 :利用微卫星DNA技术进行体细胞克隆后获得个体的鉴定。方法 :提取正常山羊、供核波尔山羊、本地受体山羊及克隆个体的基因组DNA ,通过设计微卫星DNA多态PCR引物扩增微卫星DNA序列并对之进行微卫星DNA鉴定。结论 :通过微卫星DNA序列的扩增 ,证明克隆个体为供核波尔山羊的克隆。
- 刘建唐慧林杨跃飞鞠辉明成勇
- 关键词：体细胞克隆
- 出生前山羊小脑皮质神经元超微结构的观察被引量：1
- 2004年
- 应用超薄切片技术研究了第6周到出生前山羊小脑皮质神经元超微结构发育的变化。结果表明:(1)出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞在第10周龄以前一直处于未分化状态,第10周龄以后开始分化,但直到出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞内细胞器的种类和数量都增加缓慢。(2)小脑浦肯野氏细胞在第7周龄以前处于未分化状态;在第7周龄开始分化,第7～14周龄处于不成熟期;第15～18周龄浦肯野氏细胞处于发育成熟期,细胞内各种细胞器均出现并充满整个胞体,细胞核膜趋于成熟,核内常染色质发达,中央核仁发育成熟;浦肯野氏细胞自第19周龄开始进入成熟期,细胞内尼氏小体开始形成并发育,但其体积较小,界限不明显,这表明浦肯野氏细胞在出生前尚未完全成熟,出生后仍存在一个较长生后发育过程。
- 徐永平郑月茂赵慧英张涌蒲鹏卿素珠
- 关键词：山羊小脑皮质神经元超微结构
- 牛卵母细胞的去核与激活被引量：6
- 2004年
- 比较了Ionomycin(离子霉素)和乙醇及其与其他物质的组合激活牛卵母细胞的效果,并研究了去核时间、细胞松弛素B、末期去核等对去核效率的影响。结果表明,配合使用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)或放线菌酮(CHX)可显著提高Ionomycin或乙醇激活牛卵母细胞的效率,Ionomycin+6-DMAP激活的牛孤雌胚在8/16细胞之后的发育率明显高于乙醇+6-DMAP(或CHX)。牛卵母细胞的去核在成熟培养20h或之前进行效果较好,此时有较高比率的卵母细胞中第一极体与染色体位置靠近。牛卵母细胞在不含细胞松弛素B的操作液中可进行去核,但所得核移植胚胎的卵裂率明显下降,而对8/16细胞胚之后的发育没有明显影响。牛卵母细胞的末期去核率显著高于中期,二者核移植胚胎的早期发育率基本相同。
- 李裕强张琇安志兴张涌
- 关键词：卵母细胞发育
- 牛孤雌生殖胚与体外受精胚体外发育比较被引量：7
- 2004年
- 从卵巢采集的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)经体外成熟培养24h后,随机分为2组分别用于孤雌激活与体外受精。在相同培养条件下,比较孤雌生殖胚与体外受精胚的发育率和发育速度。结果表明:将牛孤雌生殖胚与体外受精胚分别置于mSOFaa和mBECMaa培养液中培养,卵裂率(89.3%vs.80.1%;83.2%vs.82.5%)、囊胚发育率(27.5%vs.24.0%;28.9%vs.21.9%)和孵化率(58.7%vs.56.7%;51.5%vs.53.3%),均无显著差异(P>0.05);孤雌生殖胚与体外受精胚在体外发育的速度基本相同。对孤雌生殖胚胎进行培养可以代替体外受精胚胎筛选最佳体外培养系统。
- 张琇李雪峰安志兴郭继彤张涌
- 关键词：孤雌生殖体外受精胚胎体外发育囊胚发育率发育速度孤雌激活
- 山羊胚胎小脑皮质的形成和发育被引量：7
- 2004年
- 对山羊胚胎小脑皮质形成及其神经元发育的形态学变化进行了研究。结果表明:(1)山羊胚胎小脑形成于第6周末,小脑皮质的外颗粒层、分子层首先形成。(2)发育过程中,山羊胚胎小脑的外颗粒层呈现出非常复杂的变化趋势:第7～10周外颗粒层达到一定厚度,第11～12周开始变薄,此后外颗粒层又开始变厚,直到第15～16周又变薄,17～18周再次增厚,此后再次变薄,直到出生前1周外颗粒层已经较薄,仅有4～5层细胞。(3)山羊胚胎的蒲肯野氏细胞可能在第8周以前就已聚集定位,第14周以后,蒲肯野氏细胞内部结构逐渐发育成熟,这说明蒲肯野氏细胞虽然发生较早,但其开始发育的时间较晚。
- 徐永平张涌郑月茂卿素珠赵慧英蒲鹏
- 关键词：山羊胚胎小脑皮质中枢神经形态学
- 由成年转基因山羊体细胞而来的克隆山羊被引量：64
- 2002年
- 在已经获得的乳腺特异性表达人促红细胞生成素 (rhEPO)成年转基因山羊 (Caprahircus)的基础上 ,取其耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞 ,进行体外传代培养 ,然后将这种培养的转基因山羊的体细胞移入去核的处于第Ⅱ次减数分裂中期的卵母细胞中 ,并进行电融合 ,构建重构胚胎 ,重构胚胎在体内培养 6d ,再将发育至囊胚或桑椹胚的重构胚胎移入同步情期的寄母羊子宫内。结果 ,有 2只寄母羊妊娠并最终产下 2只成活的克隆山羊。她们分别来自同一成年母羊的耳尖成纤维细胞和卵巢颗粒细胞。克隆羊经PCR RFLP图谱分析显示 :以克隆羊组织DNA为模板的PCR产物与相应的提供体细胞的基因羊的PCR产物的酶切图谱完全一致 ;并且经PCR对外源hEPO基因检测表明 2只克隆山羊均携带hEPO外源基因。
- 成勇王玉阁罗金平沈玉杨跃飞鞠辉明邹贤刚徐少甫劳为德杜淼
- 关键词：体细胞克隆山羊
- 几种不同化学激活方法对牛卵母细胞孤雌激活的影响被引量：30
- 2002年
- 为确定牛体细胞核移植胚胎的激活条件 ,比较了几种不同化学激活方法对牛卵母细胞激活的影响。选择明显具有第一极体的成熟卵母细胞 ,随机分为 9组 :1Ionomycin(I) +6 -甲氨基嘌呤 (D) (ID) ;2 I+D+细胞松弛素 B(CCB) (IDC) ;3I+放线菌酮 (X) (IX) ;4 I+X+CCB(IXC) ;5体积分数 7%乙醇 (E) +D(ED) ;6E+D+CCB(EDC) ;7E+X(EX) ;8E+X+CCB(EXC) ;9Sr2 + +CCB(SC)。Ionom ycin和乙醇的处理时间为 5min,6 - DMAP± CCB的处理时间为 4 h,放线菌酮± CCB的处理时间为 5 h,Sr2 + +CCB的处理时间为 10 h。培养36 h后 ,各组卵母细胞的卵裂率分别为 72 .0 % ,75 .5 % ,81.3% ,85 .1% ,81.7% ,82 .4 % ,74 .4 % ,78.1%和 5 1.0 % ;培养到 196 h时 ,各组的囊胚发育率分别为 18.2 % ,2 4 .5 % ,7.2 % ,11.9% ,11.1% ,19.4 % ,6 .7% ,12 .2 %和 2 .0 %。结果表明 ,在 10 mm ol/ L Sr2 +内培养 10 h不能有效地激活牛卵母细胞 ,Ionom ycin+6 - DMAP± CCB以及乙醇 +6 -DMAP+CCB结合使用可以有效地激活牛卵母细胞。Ionom ycin比乙醇对牛卵母细胞的激活作用强 ;6 - DMAP比CHX的激活效果好 ,激活液中
- 李雪峰安志兴郭继彤张涌
- 关键词：牛卵母细胞孤雌激活
- 山羊有腔卵泡中TGFβ2基因表达
- 2001年
- 采用 RT- PCR技术对关中奶山羊不同大小的有腔卵泡的卵泡膜细胞、颗粒细胞和卵丘卵母细胞复合体中转化生长因子 β2 (TGFβ2 )的基因表达进行了测定。结果表明 ,在有腔卵泡的各个时期都有 TGFβ2 基因表达 ;在卵泡膜、颗粒细胞和卵丘卵母细胞复合体中也检测到了该生长因子的 m RNA。推测 TGFβ2
- 王保莉张涌
- 关键词：山羊有腔卵泡TGFΒ2基因表达
- 山羊TGFβ_2部分cDNA的扩增和序列分析被引量：1
- 2001年
- 在人和小鼠等的 TGFβ2 基因序列基础上 ,选用 1对同源性引物 ,采用反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)技术从山羊卵泡总 RNA中扩增出 2 73bp的 TGFβ2 c DNA片段 ,进行序列测定 ,由此 c DNA序列推出了相应的 TGFβ2 蛋白分子的氨基酸排列。比较了山羊与人、小鼠、大鼠的 TGFβ2 部分 c DNA核苷酸的同源性和氨基酸的相似性 ,核苷酸同源性分别为 91.9% ,87.5 %和 88.6 % ;氨基酸相似性分别为 97.8% ,96 .7%和 96 .7%。
- 王保莉张涌
- 关键词：TGFΒ2CDNA山羊RT-PCR转化生长因子
