国家自然科学基金(81171178)
- 作品数：16 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：山西医科大学同济大学兰州大学第一医院更多>>
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- 神经再生机制的研究进展被引量：8
- 2014年
- 传统观念认为,神经再生仅发生于哺乳动物胚胎期以及出生后早期,成年神经细胞不可再生.近年来关于神经再生机制的研究已经取得很大的进展.研究表明成年啮齿类和灵长类海马、嗅球等部位可产生新的神经元,具有一定再生能力.恢复成年神经细胞再生能力对于治疗一些顽固性疾病,如帕金森病、阿尔茨海默病、精神分裂症以及抑郁症等有很大作用,所以探讨各种促进神经再生作用的内外因素是目前研究的热点.本文对近几年来国内外关于神经再生机制的研究进行了总结和分析.
- 任斐彭婉舒贡时雨姜文婧李夏青
- 关键词：阿尔茨海默病顽固性疾病精神分裂症哺乳动物神经细胞
- 一种新的大鼠脊髓半离断损伤模型被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨一种对机体影响较小、复制性良好的大鼠脊髓损伤模型,为后期药物及干细胞干预脊髓损伤后修复提供条件。方法:采用改良注射针头连接注射器作为损伤工具,在不打开脊髓腔的前提下沿脊椎棘突左侧垂直插入脊髓,造成大鼠腰髓一侧离断性损伤。除观察动物的一半行为学改变外,并对脊髓损伤后对大鼠的感觉功能(热痛反应)、运动功能(抓力测试)变化进行定时观测,以确定模型复制成功。结果:大鼠麻醉苏醒后即刻出现一侧后肢瘫痪、拖地行走,但无排尿及排便失禁,动物一般状态良好,后期未见合并感染,表明动物模型复制成功。结论:用自制的注射器针头造成的脊髓损伤模型操作简便、损伤较小、重复好,并且因与其折射相连,可在造模同时局部给予药物或试剂进行干预,为探索脊髓损伤再生困难的分子机制提供了实验基础。
- 齐超李夏青张宏
- 关键词：SD大鼠脊髓损伤
- 髓磷脂相关抑制因子和作用机制
- 2015年
- 成人中枢神经系统(CNS)损伤后,其神经功能恢复和解剖增长的有限主要是因为髓磷脂相关抑制剂(MAI)的存在。MAI结合到神经生长锥上的三聚体受体复合物刺激胞内信号通路,该通路可引起肌动蛋白细胞骨架的重排,导致生长锥的崩溃和轴突再生的抑制。MAI中的Nogo-A、MAG和OMgp通过膜结合受体及它们共同的受体:Nogo-66 Receptor-1(Ng R1),调节细胞骨架动力学和抑制神经增长的信号传导机制,旨在为今后科研领域探讨能够阻断和抑制这些髓磷脂抑制因子的新药或制剂提供思路,为治疗CNS损伤后神经再生和功能恢复寻找新的方案。
- 高美玲李夏青
- 关键词：髓磷脂轴突再生NOGO中枢神经系统细胞骨架
- 血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用被引量：6
- 2015年
- 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。
- 高美玲王红张彩云兰婧李夏青
- 关键词：细胞外信号调节激酶蛋白激酶B
- A型肉毒毒素重链对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10的表达及神经突起再生的影响被引量：4
- 2018年
- 目的:探讨人工重组A型肉毒毒素重链(BoNT/A重链)对大鼠脊髓损伤局部颈上神经节蛋白10(SCG10)表达、神经突起再生以及损伤侧后肢感觉及运动功能的影响,为阐明BoNT/A重链促神经突起生长的作用提供实验依据。方法:大鼠单侧腰段脊髓横断损伤模型基础上局部及鞘内给予BoNT/A重链;于用药后不同时间提取局部蛋白进行双向电泳,并根据双向电泳提示的蛋白点群变化的分子量和等电点,选取SCG10为目标蛋白行Western Blot检测及神经突起测定;通过抓力和热痛敏实验测试损伤侧后肢的运动和感觉功能情况。结果:(1)BoNT/A重链可干预脊髓损伤后局部蛋白谱的变化,MW位于18—25kDa、等电点在5—7范围的蛋白点可以作为蛋白点群变化的代表之一;(2)作为分子量位于18—25kDa/等电点在5—7的蛋白成分之一的SCG10在单纯损伤时较正常对照组其表达有所增高,给予BoNT/A重链后, SCG10的表达显著增强(P<0.05);(3)免疫荧光结果显示:单纯损伤时SCG10的阳性表达主要分布于损伤周边细胞的胞体,应用BoNT/A重链后,SCG10阳性分布于胞浆和细胞突起且以损伤近头端的周边区域较为显著;(4)突起测定结果显示:BoNT/A重链可促进脊髓损伤周边神经细胞突起增长,包括突起数目增多及含有突起的神经细胞百分比增多(P<0.05);(5)给予BoNT/A重链后,损伤侧后肢肌力明显优于单纯损伤组(P<0.05),但感觉功能未见明显改善。结论:脊髓损伤局部给予BoNT/A重链可促进生长相关蛋白SCG10的表达并促进损伤周边神经细胞突起生长,改善肌肉抓力。BoNT/A重链有助于脊髓损伤后的再生修复。
- 王亚芳高扬李志强刘雅赵明伟袁海霞李夏青
- 关键词：肉毒毒素脊髓损伤神经突起
- 体外原代培养小鼠胚胎背根神经节细胞的神经化学特征
- 2012年
- 目的探讨胚胎背根神经节(DRG)感觉神经元作为体外研究神经多肽的细胞模型之有效性。方法采用免疫荧光及相差显微技术对30只胚胎小鼠背跟神经节细胞选择性神经多肽的分布、细胞大小及其多肽表达与细胞大小之间的关系进行观察比较。结果培养时间达3周龄的DRG细胞主要以中小直径(30～20μm)的细胞为主,与成年在体脊髓DRG细胞的形态多形性特征类似;选择性神经多肽(钙调素基因相关多肽、P物质、甘丙肽和nociceptin)的表达也随着体外培养时间的延长明显增强,且从早期仅在胞体部位表达到3周时细胞周围神经突起也出现显著免疫荧光阳性。此外,体外培养达到3周时,降钙素基因相关多肽和P物质主要在体积较小的神经细胞表达,与成年鼠DRG的分布特征一致。而甘丙肽与nociceptin在不同大小DRG神经元的表达没有像降钙素基因相关多肽和P物质一样随着培养时间的延长而出现明显改变。结论胚胎小鼠DRG神经细胞培养可以作为研究感觉神经细胞某些重要的神经多肽(降钙素基因相关多肽,P物质)在调节感觉神经细胞内相关信号转导通路中作用的体外模型。
- 李夏青Julie ACoffield王志如张宏
- 关键词：感觉神经元间接免疫荧光法
- A型肉毒素重链干预神经细胞组蛋白3乙酰化水平的初步研究
- 2018年
- 目的通过对离体神经细胞培养及大鼠在体脊髓损伤模型施予BoNT/A重链,观察损伤局部组蛋白乙酰化水平的变化,为探讨BoNT/A重链干预神经细胞再生的分子机制提供实验依据。方法将BoNT/A重链加入细胞培养液或在脊髓损伤模型基础上局部给予小剂量BoNT/A重链;收集细胞及损伤局部脊髓组织,采用免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot等方法对细胞和脊髓组织内选择性组蛋白亚类的乙酰化水平进行检测。结果不论是体内应用还是培养液内加入BoNT/A重链,细胞和组织内组蛋白3的乙酰化水平皆明显增多;BoNT/A重链所致的Neuro-2a细胞组蛋白3乙酰化水平的增高与神经突起的增长相匹配,即同一时间点组蛋白乙酰化水平显著增高的同时,神经突起的生长也呈显著增长;脊髓损伤基础上给予BoNT/A重链所显示的组蛋白3乙酰化的表达量增高呈现双时相高峰(2 h和48 h)。结论 BoNT/A重链可促进组蛋白3的乙酰化;在同一时间点,组蛋白3的乙酰化水平与神经突起增长的长度相一致;组蛋白3乙酰化可能是BoNT/A重链促神经突起生长的相关机制之一。
- 兰婧刘福高扬李志强刘雅赵明伟袁海霞李夏青
- 关键词：A型肉毒素组蛋白乙酰化
- 小鼠神经母细胞瘤细胞株用于A型肉毒毒素重链体外实验的可行性研究被引量：2
- 2015年
- 目的探讨小鼠神经瘤母细胞（Nero-2a）细胞株用于A型肉毒毒素重链（BoNT／AHC）体外细胞模型的可行性。方法对体外培养1～5h的Nero-2a细胞和经A型肉毒毒素（BoNT／A）重链作用的Neuro-2a细胞（细胞接种于96孔培养板后随机分为对照组、0．01nmol／L组、0．1nmol／L组、1nmol／L组和10nmol／L组），进行BoNT／AHC相关受体的检测，观察BoNT／AHC作用不同时间（24、48及72h）后BoNT／AHC对细胞突起生长状况的影响，包括有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数。数据经GraphPadPrism5．0 One．wavANOVA分析。结果体外培养后Neuro-2a细胞表达高亲和力的突触囊泡蛋白2（SV2）和低亲和力的三涎酸神经节苷脂亚型lb（GTlb）受体。与对照组相比，BoNT／AHC能明显促进Neuro-2a细胞突起再生及突起长度增加，其中0．1nmol/BoNT／AHC作用24h后突起的Neuro-2a细胞百分比为（20．61士4．87）％高于对照组[（15．27士3．56）％，F=37．7，P〈0．001]、神经突起的总数量为（2．18士1．241个高于对照组（1．68土0．99）个，（F=9．54，P〈0．001）、平均突起的长度为（38．76士38．11）gm，与对照组（23．38士27．13）gm相比差异无统计学意义；当BoNT／AHC的浓度增加为1、10nmol／L时，有突起的Neuro-2a细胞百分比分别为（15．08士5．27）％和（12．65士5．65）％，神经突起的总数量分别为（1．65土0．85）个和（1，64士0．85）个、平均突起的长度分别为（33．75土39．11）μm和（18．95士21．71）μm，与对照组相比差别不大，差异无统计学意义。随作用时间的延长（48h和72h）0．1nmol／L组有突起细胞的百分比、细胞突起的长度以及突起总数与对照组相比均增高，且差异具有统计学意义，而1，10nmol／L组中细胞变化差异无统计学意义。结论Neuro-2a细胞可用于BoNT／AHC体外研究的细胞模型，BoNT／AHC的作用表现为低浓
- 王红高美玲兰婧乔欢李夏青
- 关键词：肉毒毒素类突触蛋白类神经节苷脂类
- 辣椒素受体干预大鼠周围神经压榨性损伤后再生
- 2015年
- 目的:于大鼠坐骨神经压榨性损伤模型基础上观察辣椒素受体拮抗剂AMG517对神经损伤后再生过程的影响。方法:采用2.5%戊二醛固定标本、1%四氧化锇后固定、分别制备半薄切片(1μm)和超薄切片(60nm)、并进行甲苯胺蓝及醋酸铀-枸橼酸铅染色,对一侧坐骨神经损伤的损伤近端、损伤中心及损伤远端之有髓及无髓神经的数量及其结构特点进行观察和计数。结果:坐骨神经压榨性损伤后,损伤远端发生Wallerian变性,尔后,由损伤近端逐渐开始出现神经突起及雪旺细胞的再生。如果损伤前30 min于同侧足底皮下注射辣椒素受体拮抗剂ANG517(300μg/kg BW)后,损伤近端(距损伤中心0.2 cm)、损伤中心及损伤远端(距损伤中心0.2 cm)部位有髓和无髓神经簇再生的数量明显多于未用药组,尤以损伤后2周时表现更为明显。结论:辣椒素受体作为位于周围神经末梢的伤害性感受器,其功能状态的变化可以影响神经再生过程;抑制辣椒素受体可以加快或促进周围神经损伤后再生。
- 张宏齐超高美玲王红李夏青
- 关键词：辣椒素受体
- LncRNA AK051397在BMP-2诱导的C2C12成骨分化中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的研究骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)诱导后表达上调的LncRNA AK051397在C2C12成骨分化过程中的作用。方法 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程,实时定量PCR技术与碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨相关指标。对C2C12细胞在BMP-2诱导下,成骨分化过程中的LncRNAs表达变化进行芯片分析(ArrayStar LncRNA Array),筛选出表达明显上调的LncRNAs,最后采用siRNA干扰的方法下调LncRNAs表达后分析其对成骨分化过程的影响。结果 BMP-2诱导C2C12成骨分化过程中,成骨指标ALP、SPT增高,成肌指标MYOG降低。芯片结果表明,LncRNA AK051397在BMP2诱导后表达明显上调,处理组与未处理组相比升高4.9倍(P<0.05)。干扰AK051397后成骨分化指标ALP、SP7表达下降,MYOG表达上升。结论 LncRNA AK051397在C2C12细胞中具有促进成骨分化的作用,同时也具有抑制细胞成肌分化的作用。
- 高艳程晨李静肖伟凡潘秋辉
- 关键词：骨形态发生蛋白2成骨分化C2C12细胞
