国家自然科学基金(39770679)
- 作品数：8 被引量：59H指数：4
- 相关作者：吕斌徐顺清周宜开陈志飞高世同更多>>
- 相关机构：同济医科大学华中科技大学中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染被引量：5
- 2003年
- 为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .
- 吕斌吴少廷周宜开徐顺清张仁利高世同林敏张志仁
- 关键词：弓形虫感染
- 用重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性被引量：9
- 2000年
- 目的 建立一种特异性强 ,灵敏度高的结核分枝杆菌 (结核菌 )的检测及药敏试验方法。方法 采用生物发光技术检测可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体phage 40 ,对不同细菌的发光反应和药敏试验进行测定 ,探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和特异性。结果 phage 40对各种分枝杆菌均有特异性发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性意义 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,在 4 2× 10 6 ml时最大发光值为 2 84 7mV ,结核菌的发光值最低 ,H37Ra在 6 4× 10 6 ml时最大发光值为 72 4mV ,H37Rv在 7 6× 10 6 ml时的最大发光值是 74 3mV ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核菌的发光强度比非耐药结核菌强 ,其强度差异有显著性意义。phage40的药敏试验结果与常规罗氏培养基法符合率一致 ,可在 72h内得到结果。结论 生物发光技术可快速、敏感地检测结核菌 ,通过发光分析 ,建立了一种简便。
- 吕斌徐顺清陈志飞符志军李开赏周宜开
- 关键词：结核分枝杆菌噬菌体抗药性微生物
- 采用发光分析方法进行结核分枝杆菌快速药敏试验
- 2000年
- 吕斌徐顺清周宜开
- 关键词：结核分枝杆菌药敏试验抗生素
- 利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性被引量：4
- 2001年
- 目的 利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理 ,来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况 ;采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数 ,对 4 3份结核杆菌样本进行快速检测 ,并与L J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L J培养法相比 ,阳性率和真阴性率分别为 95.7%、90 % ,最佳检测的细菌浓度为 10 7～ 10 8CFU/ml,最佳药敏试验的利福平浓度为 1mg/ml ,利福平与结核分支杆菌孵育 4 8小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性 ,是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。
- 符志军吕斌徐顺清李开赏陈志飞
- 关键词：结核病抗结核病药利福平结核分支杆菌耐药性
- 利用重组分支杆菌噬菌体快速筛选耐利福平结核分支杆菌被引量：41
- 2000年
- 目的 采用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结核分支杆菌噬菌体进行结核分支杆菌利福平药敏试验研究 ,建立一种特异、灵敏、快速的利福平药敏试验方法。方法 采用生物发光方法分别检测重组分支杆菌噬菌体对不同细菌在不同浓度利福平培养基中的发光水平 ,并与罗氏培养基进行药敏试验比较。结果 在不同细菌中 ,噬菌体均特异地对分支杆菌有发光反应 ,分支杆菌的发光值与大肠杆菌相比差异有显著性 ,而大肠杆菌的发光值与阴性对照差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;在各分支杆菌中 ,BCG的发光值最高 ,mc15 5次之 ,结核分支杆菌最低。在含利福平的培养基中 ,耐药结核分支杆菌的发光强度比非耐药结核分支杆菌强 ,其强度差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;通过对不同浓度利福平进行筛选试验 ,得出最适于利福平药敏试验的利福平浓度为 2 μg/ml;采用该浓度的利福平对结核分支杆菌标准株和临床分离株进行药敏试验 ,结果与罗氏培养法的结果一致。温敏噬菌体Phage88的检测灵敏度在各种分支杆菌中均大于正常噬菌体Phage 40 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 结论重组噬菌体可特异地检测结核分支杆菌利福平耐药性 ,灵敏度高 ,可在 72h内得到结果 ,Phage 88的效果优于Phage 40 ,采用温敏株可提高检测的灵敏度和特异性。
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- 关键词：利福平药敏试验结核分支杆菌
- 用Phage88快速检测结核分枝杆菌被引量：3
- 2000年
- 目的 建立一种特异性强、灵敏度高的致病性分枝杆菌的检测及药敏试验方法。方法 应用可表达荧光素酶的结核分枝杆菌噬菌体 Phage88,采用生物发光方法对不同细菌的发光反应和药敏试验进行检测。结果 Phage88特异地对各种分枝杆菌发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ,不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核杆菌的发光值最低 ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核杆菌的发光强度比非耐药结核杆菌强 ,其强度有明显差异。结论 用 Phage88噬菌体检测结核分枝杆菌是一种快速、敏感的检测和药敏试验方法。
- 吕斌徐顺清周宜开陈志飞符志军李开赏
- 关键词：结核分枝杆菌
- 用重组温敏分枝杆菌噬菌体快速检测结核分枝杆菌被引量：1
- 2000年
- 〔目的〕 利用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结核分枝杆菌噬菌体 phage88,通过检测其发光特性以建立一种特异性强 ,灵敏度高的致病性分支杆菌的检测及药敏试验方法。〔方法〕 采用生物发光方法检测对结核分枝杆菌特异的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应和药敏试验结果 ,并与罗氏培养基方法进行比较 ,探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和特异性。〔结果〕 phage88特异地对各种分枝杆菌均有发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核杆菌的发光值最低 ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核杆菌的发光强度比非耐药结核杆菌强 ,其强度有明显差异。〔结论〕 可表达荧光素酶的重组温敏噬菌体可特异地检测结核杆菌活力和耐药性 ,灵敏度高 ,在 72 h内得到结果 ,是一种快速、敏感的结核分枝杆菌检测和药敏试验方法。
- 吕斌徐顺清周宜开陈志飞符志军
- 关键词：结核分枝杆菌
- 重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究被引量：1
- 2001年
- 采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件 .结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核分枝杆菌的发光值最低 ;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40 ,差异显著 .因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌 ,但Phage 88的效果优于Phage 40 .
- 吕斌徐顺清符志军陈志飞李开赏周宜开
- 关键词：生物发光
