国家质检总局科技计划项目(2005IK179)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：李树清杜凯姚宝安陈志飞王巧全更多>>
- 相关机构：华中农业大学上海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 利用套式PCR检测牛羊乏质体
- 2011年
- 为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较。结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段。套式PCR检测乏质体DNA量为0.2pg(相当于6个感染红细胞)。检测1 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份。首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国。同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体。上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5%(835/848)。检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定。
- 李树清王贵强陈志飞赵俊龙王巧全张子群由轩胡永强杜凯姚宝安
- 关键词：套式PCR
- 实时荧光PCR检测牛边缘无浆体方法的建立及应用被引量：5
- 2007年
- 根据牛边缘无浆体表面蛋白4的保守基因序列设计特异引物AMOC9/AMOC5、AMOC10/AMOC12和特异性探针MP,首次建立了牛边缘无浆体的实时荧光PCR检测方法,检测DNA的最低限度为200 fg。对中央无浆体、绵羊无浆体、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫和伊氏锥虫进行检测,无荧光检测信号。本研究用所建立的方法检测采自江苏和哈尔滨的180份抗凝血(奶牛和肉牛),其阳性率为8.9%。结果表明,建立的实时荧光PCR检测牛边缘无浆体的方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛边缘无浆体病的流行病学调查、检疫和监测。
- 王贵强李树清张子群陈志飞由轩王巧全杜凯姚宝安
- 关键词：实时荧光PCRTAQMAN-MGB探针
