江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(D203)
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
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- 液态芯片技术分析RA患者血清免疫复合物对滑膜细胞分泌细胞因子的影响被引量：1
- 2011年
- 目的用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响。方法用聚乙二醇(PEG)沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)阳性的RA患者及健康人对照血清IC,间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平。体外培养RA患者关节FLS,分别用RA患者ACCP-IC阳性IC(ACCP+-IC)、ACCP-IC阴性IC(ACCP--IC)及健康人对照血清IC(C-IC)刺激FLS,培养24 h后,用液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果 10份RA患者血清中提取的IC,包括ACCP+-IC 6份和ACCP--IC 4份,刺激FLS 24 h后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACCP+-IC组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8水平均显著高于ACCP--IC组。3组刺激物组刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论 ACCP+-IC具备更强的促FLS分泌GM-CSF、IL-6和IL-8的活性。
- 高德玉王凯刘阳夏海萍严孝岭虞伟李晓军
- 关键词：类风湿关节炎细胞因子免疫复合物抗环瓜氨酸肽抗体
- 量子点标记链酶亲合素-生物素系统用于抗核抗体检测的对比研究与评价被引量：1
- 2015年
- 目的对比研究不同颜色量子点(QDs)标记链霉亲合素(SA)-生物素系统在抗核抗体(ANA)间接免疫荧光实验(IIFA)检测中的效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素化羊抗人Ig G(生物素化二抗),用IIFA检测临床样本血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记二抗(FITC-二抗)为对照。比较和评价3种QDs-SA的应用效果。结果对114例患者血清研究发现,QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素二抗检测可见与FITC-二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,阳性结果符合率均为100%,平均抗体滴度均高于FITC-二抗标记检测结果(P<0.01)。尤其对核仁型、核均质型与核点型ANA荧光模式检测效果优于FITC-二抗结果。相关分析结果显示:QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA与FITC-二抗标记ANA定性结果高度一致(Kappa=0.979),滴度均呈高度正相关(P均<0.01)。结论 QDs-SA用于IIFA法检测ANA总体结果稳定、灵敏、可行,可获得较FITC-二抗检测更加敏感和稳定的实验结果。
- 张晶虞伟夏海萍李晓军张宇顾宁
- 关键词：抗核抗体
- 胶原诱导关节炎模型小鼠CCP抗原特异性T细胞的量子点标记检测及其与CCP特异性淋巴细胞增殖的关系
- 2014年
- 目的建立基于量子点(quantum dots,QDs)标记环瓜氨酸肽(CCP)抗原特异性T细胞(CCP-AST)的流式细胞分析术(FCM),研究胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠CCP-AST的阳性率及其与CCP抗原特异性淋巴细胞增殖的关系。方法构建CIA小鼠模型,用QDs标记链霉亲合素(QD705-SA)结合生物素化的CCP对CCP-AST(CD4+CD8-CCP-TCR+)进行体外标记与FCM检测,同时将CCP与小鼠脾单个核细胞(MSMC)进行共培养,并对其增殖刺激指数(SI)、CCP-AST阳性率及其他参数做相关分析。结果成功建立检测QDs标记CCP-AST的FCM术,发现CIA组小鼠CCP-AST阳性率[中位数(第25分位数,第75分位数)]为0.575%(0.475%,1.185%),显著高于PD2B对照肽的0.165%(0.113%,0.240%)和健康组小鼠的0.085%(0.000%,0.205%),差异均有统计学意义(P均<0.01)。CIA组小鼠经CCP刺激,MSMC出现明显的增殖反应,SI值为4.710,高于健康组小鼠CCP刺激的SI值0.860,差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示,CIA组小鼠CCP-AST阳性率与CCP刺激MSMC的SI值呈显著正相关关系(r=0.734,P<0.05),与关节炎症指数之间亦呈正相关(r=0.611,P<0.05)。结论 QD705-SA结合生物素化的CCP,可实现对CCP-AST的有效标记和FCM检测,CIA组小鼠CCP-AST阳性率与CCP抗原刺激的特异性淋巴细胞增殖结果显著相关,并与CIA小鼠关节肿胀和炎症程度关系密切。
- 张敏杰张晶夏海萍刘国瑞严孝岭虞伟李晓军
- 关键词：量子点环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞
- 人软骨糖蛋白-39对CIA大鼠淋巴细胞体外增殖作用的研究
- 2011年
- 目的观察人软骨糖蛋白-39（HCgp39）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠淋巴细胞激活的影响，探讨其在类风湿关节炎（RA）发病中的作用。方法建立CIA大鼠模型，分别在建模1、2、3、4、5、6、7、8周后，分离、培养大鼠脾淋巴细胞，CCK-8法检测HCgp39对淋巴细胞增殖的影响，ELISA法检测血浆中抗HCgp39抗体及COMP的分泌水平，分析指标之间相关性。结果建模2周后，HCgp39抗原特异性T细胞与对照组比较出现明显增殖反应（P均〈0．01），与建模时间、抗HCgp39抗体水平显著正相关，与血管翳和滑膜炎症评分显著负相关。各组抗HCgp39抗体水平和COMP水平较对照组显著增高（P均〈0．01），且抗HCgp39抗体水平与建模时间及COMP呈显著正相关。结论HCgp39可刺激CIA大鼠脾淋巴细胞的体外异常增殖，初步提示nCgp39抗原短肽在CIA早期及后续的发病过程中可能起着一定作用。
- 夏海萍张晶白彩琴虞伟李晓军武建国
- 关键词：增殖反应
- 抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用
- 2014年
- 目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均<0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。
- 李利平王洁张敏杰虞伟李晓军
- 关键词：类风湿因子瓜氨酸化类风湿关节炎酶联免疫吸附试验
- 两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价被引量：2
- 2012年
- 目的对比研究两种不同粒径量子点(QDs)标记抗体在抗核抗体(ANA)检测中的成像效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655和QD605标记第二抗体(二抗),用间接免疫荧光分析(IIFA)检测114例自身免疫病患者和30例健康对照者血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗为对照。单特异性ANA用免疫印迹法(IBT)确认。比较和评价各法应用效果。结果经对114例患者血清研究发现,两种QD标记二抗均可见与FITC标记二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,但ANA滴度略显不同,对核颗粒型与胞浆颗粒型ANA测定灵敏度以QD655为最高,QD605次之,FITC标记二抗相对较弱。而对核均质型、核仁型与核着丝点型ANA测定灵敏度高低依次为FITC、QD655和QD605标记二抗。相关分析结果显示,两种QD与FITC标记物检测ANA滴度结果均呈高度正相关,r值分别为0.834、0.832(P均<0.01)。两种QD标记二抗对核颗粒型、胞浆颗粒型荧光模式与FITC标记二抗检测结果阳性符合率均为100%;而核均质型与核仁型检测,阳性结果符合率为80.6%～84.4%。30例用FITC标记二抗检测ANA阴性血清中,两种QD标记二抗检测均见1例ANA阳性。两种QD与FITC标记物检测ANA总符合率均超过90.0%,有高度的一致性(Kappa值均>0.75)。结论 QD655和QD605标记二抗用于ANA检测总体结果稳定、灵敏、可行;QDs粒径越大其标记二抗测定ANA灵敏度越高,但对某些低滴度免疫荧光核型(包括核均质型、核仁型与核着丝点型)ANA有漏检可能。
- 张晶虞伟张宇夏海萍李晓军顾宁
- 关键词：量子点抗核抗体
