北京市自然科学基金(5112027)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响
- 2013年
- 构建PcDNA3.1/necdin真核表达载体并制备稳定过表达Necdin的P19细胞克隆,检测稳定过表达Necdin对P19细胞增殖的影响。从正常培养P19细胞提取RNA反转录成cDNA,以此作为PCR模板扩增得到necdin目的基因,插入PcDNA3.1载体的EcoRⅠ和XhoⅠ位点;脂质体法将构建的真核表达载体PcDNA3.1/necdin转染P19细胞,G418筛选后挑取细胞单克隆,Western印迹鉴定细胞单克隆中Necdin的表达水平。CCK-8法检测过表达necdin对P19细胞增殖的影响。成功构建PcDNA3.1/necdin真核表达载体并获得稳定高表达Necdin的P19细胞克隆,检测发现P19细胞过表达Necdin后其细胞增殖未发生明显变化。P19细胞稳定过表达外源Necdin对其细胞增殖无明显影响。
- 惠焕动刘勇刘少君
- 关键词：NECDIN细胞转染P19细胞过表达细胞增殖
- 一种分离培养少突胶质前体细胞的改进方法被引量：1
- 2013年
- 目的:对少突胶质前体细胞的分离培养方法进行改良,为今后细胞移植治疗研究提供基础。方法:在大鼠少突胶质前体细胞分离纯化培养过程中添加不同浓度bFGF(5、10、20 ng/ml),显微镜观察少突胶质前体细胞在体外的生长情况,台盼蓝实验检测细胞存活率和获得率,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定,流式细胞术检测细胞纯度。结果:在少突胶质前体细胞培养过程中添加10 ng/ml的bFGF,可明显提高少突胶质前体细胞的产出率和纯度。分离的少突胶质前体细胞呈A2B5、NG2阳性,能进一步分化为成熟少突胶质细胞且表达MBP和O4。结论:在培养中添加适当浓度的bFGF的方法能有效获得高纯度的少突胶质前体细胞。
- 阙海萍赵沉浮刘勇刘少君
- 关键词：少突胶质前体细胞BFGF纯化细胞培养
