内蒙古自治区自然科学基金(2010BS1104)
- 作品数：19 被引量：39H指数：5
- 相关作者：邵国姜树原张颜波张姝黄丽华更多>>
- 相关机构：包头医学院泰山医学院附属医院汕头大学更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA甲基转移酶1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的表达被引量：6
- 2014年
- 目的研究DNA甲基转移酶(DNMT)1、3A和3B在低氧预适应小鼠大脑中的变化,探讨低氧预适应形成过程中DNMTs的变化与脑保护作用的关系。方法小鼠随机分成常氧组(H0)、低氧1次组(H1)或4次组(H4),取大脑皮质组织,应用实时定量PCR技术、免疫印迹技术和DNA甲基转移酶活性检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA和蛋白质及DNMT活性。结果 H1组和H4组DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白质水平较H0组显著降低(P<0.05),H4组DNMT活性较H0组降低(P<0.05)。结论 DNMT3A和3B水平及DNMT活力的变化可能与低氧预适应小鼠获得脑保护的关系密切。
- 周成江张姝姜树原黄丽华吕国蔚张颜波吉训明邵国
- 关键词：低氧预适应大脑DNA甲基转移酶小鼠
- 5-aza-dC对293A细胞增殖的影响
- 2013年
- 目的观察5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-dC)对293A细胞增殖的影响,初步探讨其在治疗肾脏肿瘤的作用及可能机制。方法实验组以1.0μmol/L的5-aza-dC处理人胚肾癌293A细胞,对照组加等体积的磷酸缓冲液(PBS),用MTT法测定实验组和对照组1～4 d的光密度值,通过比较实验组和对照组的第4天吸光度值来计算抑制率,流式细胞仪检测5-aza-dC对293A细胞株细胞周期的影响,实时定量PCR检测相关基因DNA甲基转移酶(DNMT)1、3A和3B mRNA的表达。结果 MTT检测实验组和对照组第4天的光密度分别为0.0663±0.0034和0.5453±0.0311,5-aza-dC能抑制人胚肾癌293A细胞的增殖;实验组与对照组相比,实验组91%细胞被阻滞在S期,5-aza-dC处理细胞后使细胞周期发生变化;实验组DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA相对于beta-actin mRNA的丰度值分别是0.036810892±0.007,0.008603032±0.001和0.023717786±0.005,而对照组相对丰度值是0.05594012±0.009,0.0362811±0.011和0.8751847±0.092;5-aza-dC处理使DNMT1、DN-MT3A和DNMT3B mRNA表达降低(P<0.05)。结论 5-aza-dC能抑制293A细胞株的增殖,其作用可能是通过降低DNMTs表达来干扰正常的细胞周期实现的。
- 刘璐张伟张颜波姜树原刘友黄丽华孟宪梅邵国
- 关键词：增殖
- 小鼠Reelin基因启动子克隆鉴定及生物信息学分析
- 2012年
- 目的克隆小鼠Reelin基因启动子区并分析其潜在DNA甲基化位点和转录因子结合位点。方法根据NCBI上小鼠Reelin 5'非翻译区序列设计引物,利用高保真PCR方法克隆昆明小鼠Reelin启动子区序列,并进行TA克隆,测序鉴定。利用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,通过PCR技术和测序技术对Reelin启动子-636 bp至-135bp序列甲基化情况分析。应用Methyl Primer Express software V1.0和TFSEARCH软件分析该区域甲基化位点和转录因子结合位点。结果成功克隆了小鼠Reelin基因启动子区0至-450片段。甲基化测序分析小鼠Reelin启动子区-636 bp至-135 bp序列没有CpG二核苷酸被甲基化。小鼠Reelin翻译起始点0至-450片段利用CpG岛序列分析软件分析显示,该区域C+G含量高达78.71%,CpG含量为14.44%。该区域有120多个潜在转录因子结合位点。结论在小鼠Reelin基因启动子区0～-450发现有一个CpG岛和多个转录因子结合位点,该区域可能在小鼠Reelin基因表达调控起重要作用。
- 张建军姜树原张颜波吴松泉牛敬忠邵国
- 关键词：REELIN启动子生物信息学DNA甲基化
- 低氧预适应对小鼠大脑HIF-α表达的影响被引量：3
- 2012年
- 目的观察重复性低氧对小鼠大脑内HIF-α蛋白质表达的影响。方法小鼠低氧0次(H0)、1次(H1)、4次(H4)后取海马组织,应用免疫组织化学技术,检测小鼠海马组织内HIF-α的蛋白表达变化。结果实验发现HIF-1α在H0、H1、H4组小鼠海马脑片中阳性表达,H4组染色明显加深,在大脑皮层和海马锥体细胞层、分子细胞层、齿状回均有较高表达。结论急性低氧预适应使小鼠大脑内HIF-α表达增加。
- 高冰张胜姜树原周立社邵国
- 关键词：低氧预适应大脑
- 人DNMT3B1原核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建人DNMT3B1原核表达载体,并进行初步表达。方法据Genebank中人DNMT 3B1 cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT 3B1,并将扩增产物克隆到原核表达载体PGEX-4T.3中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果 PCR扩增得到人DNMT 3B1的cDNA片段大小为2.6 kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到原核表达载体PGEX-DNMT3B1I,PTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为100 kd。结论成功构建了人DNMT3B1原核表达载体并完成其在E.coli BL21(DE3)中的诱导表达,为进一步在体外研究DNMT3B异构体提供了条件。
- 姜树原张颜波邹绮罗天娇张胜周立社邵国
- 蛋白表达系统的研究进展被引量：10
- 2014年
- 利用重组蛋白表达技术，对蛋白质功能结构进行研究，给人类生产、生活带来了极大的影响，在各个领域发挥了重要的作用。本文主要分析原核和真核两种表达系统的优缺点，综述一些现有表达系统的研究进展，旨在对后续关于表达系统选择的工作提供一些参考。1蛋白表达的涵义 自上个世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到工业、农业等各个领域，并已取得显著成效。如今人类社会面临人口增加、资源匮乏、环境污染加剧、疑难病诊断和治疗等重大问题，都需要在不同程度上依赖基因工程的发展和应用来加以解决。重组DNA技术在分子水平上对生物医学的发展有很大的意义，如决定蛋白质结构的根本物质是DNA，而直接对蛋白质进行改造是很难实现的，所以必须在DNA水平上对基因进行改造或修饰。蛋白表达就是重组DNA的一种实现技术，是用人为的方法将某一供体生物的遗传物质一DNA大分子提取出来，之后在离体的条件下用适当的工具酶进行切割，再把它与载体的DNA分子连接起来，然后一起导入受体细胞中，从而使得外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达[1]。
- 陈晓娟闫少春邵国
- 关键词：重组蛋白表达重组DNA技术基因工程技术蛋白质结构生物医学
- 腺瘤性大肠息肉中DNA甲基转移酶mRNA的表达改变
- 2013年
- 目的研究三种DNA甲基转移酶(DNA methyltranferase,DNMT)在腺瘤性大肠息肉发生发展中的作用。方法从7例腺瘤性大肠息肉和7例正常大肠粘膜组织中提取RNA后反转录成cDNA,beta-actin作为内参,利用real-time PCR技术对三种DNMT的表达情况进行。结果腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT1 mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是1.02×10-3±4.87×10-4和8.67×10-4±2.18×10-4,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT1表达无有显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3A mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是3.26×10-2±4.96×10-3和3.00×10-2±5.20×10-4,它们之间无显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3B mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是2.95×10-1±0.60×10-2和8.78×10-2±0.13×10-2,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT3B表达有显著差异(P<0.05)。结论 DNMT3B可能在腺瘤性大肠息肉的发生中起到了重要作用。
- 张伟张颜波张姝姜树原栗鹏孟宪梅邵国
- 关键词：大肠息肉DNA甲基转移酶
- 过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响
- 2013年
- 目的构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响。方法据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布。同时检测p21蛋白表达情况。结果成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P<0.01);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显著增多(P<0.05)。p21 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节。
- 张姝张伟姜树原张颜波吴松泉黄丽华孟宪梅吉训明邵国
- 关键词：DNA甲基转移酶3B细胞增殖P21
- 小鼠PP1基因启动子克隆鉴定及潜在甲基化位点分析
- 2012年
- 目的 PP1分子是一种与学习记忆相关的分子,目前对其表达调控尚未有系统的研究。为了研究小鼠PP1基因启动子区甲基化潜在的位点和转录因子结合位点而克隆小鼠PP1启动子区。方法本实验利用NCBI上小鼠PP15'非翻译区序列设计引物,使用高保真Taq酶,利用PCR方法扩增昆明小鼠PP1启动子0至-320序列,并进行TA克隆,测序鉴定。利用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,通过PCR技术和测序技术对PP1启动子0至-320序列甲基化情况分析。然后再应用Methyl Primer Express software V1.0和TFSEARCH软件分析该区域甲基化位点和转录因子结合位点。利用CpG岛序列分析软件分析。结果成功克隆得到PP1基因启动区0到-320 bp片段。甲基化测序分析该片段只有一个CpG位点被甲基化。软件分析表明小鼠PP1翻译起始点到-320 bp区域C+G含量高达70.25%,CpG含量为11.75%,含有70个潜在的转录因子结合位点。结论在小鼠PP1基因启动子区0～-320发现有一个CpG岛和多个转录因子结合位点,该区域可能在小鼠PP1基因表达调控起重要作用。
- 张姝张颜波吴松泉牛敬忠邵国
- 关键词：DNA甲基化
- 人DNA甲基化转移酶3B1真核表达载体的构建和鉴定
- 2010年
- 目的:构建人DNA甲基化转移酶3B1(DNMT3B1)真核表达载体pCMV-DNMT3B1。方法:根据Genebank中人DNMT3B1cDNA序列设计并合成特异性引物,提取HCT116细胞总RNA,利用PCR技术扩增出DNMT3B1,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中。结果:PCR扩增得到人DNMT3B1的cDNA片段大小为2.6kb,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到真核表达载体pCMV-DNMT3B1。结论:成功构建了人DNMT3B1真核表达载体,为进一步研究DNMT3B1提供了条件。
- 姜树原邵国张胜黄丽华龚向峰周立社
