国家自然科学基金(30871813)
- 作品数：9 被引量：31H指数：3
- 相关作者：杨明明龚月生周煌凯张云雁范鑫更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学榆林学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 易错PCR技术提高耐碱木聚糖酶基因xylBYG耐热性的研究被引量：2
- 2013年
- 为了研究耐碱木聚糖酶基因xylBYG耐热性,试验采用易错PCR技术对耐碱木聚糖酶基因xylBYG进行定向进化,经过2轮易错PCR产生突变基因产物,重组于表达载体pET-32a(+)中,并导入大肠杆菌BL21构建突变体文库。结果表明:经筛选获得了最佳突变菌株37D07,包含4个氨基酸替换,其最适作用温度比野生型提高了13℃,酶活约提高了17%,热稳定性也相应提高。
- 张雯石丽娜付宁杨明明龚月生
- 关键词：木聚糖酶易错PCR最适作用温度酶活
- 产耐热性纤维素酶菌株的分离·鉴定及其酶学性质研究被引量：9
- 2012年
- [目的]筛选耐热性纤维素降解细菌菌株,进行鉴定并研究其酶学特性。[方法]采用刚果红法从腐烂秸秆与腐殖质土壤样品中分离纤维素降解菌,通过形态学观察与16S rRNA序列分析鉴定其种属,并对该纤维素酶进行酶学性质研究。[结果]筛选到1株纤维素酶活性高的菌株NP29,经鉴定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)微生物。对该菌所产纤维素酶酶学特性的研究表明,该酶反应的最适pH为4.5,最佳反应温度为65℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。在37℃、pH7.0的条件下,该菌株在发酵36 h后纤维素酶活性可达1.8 U/ml,且产酶量与细菌生长密切相关。[结论]
- 杨丽娜杨明明龚月生
- 关键词：纤维素酶枯草芽孢杆菌酶学特性
- 应激诱导木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中表达被引量：2
- 2012年
- 克隆含有信号肽碱性木聚糖酶基因(xynA)片段与依赖转录起始因子σB的启动子PgsiB片段,将其克隆至实验室前期构建的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体上,并转化入枯草芽孢杆菌WB700菌株,获得重组菌BXS-W。当细菌生长至对数期中期时,施加不同的应激处理,采用DNS法测定木聚糖酶活性。结果显示,获得了xynA与PgsiB片段;成功构建表达载体pBXS,并获得重组菌株BXS-W;应激试验表明,施加的5种应激条件均极显著提高(P<0.01)木聚糖酶基因的表达量,其中以乙醇应激效果最好。
- 曹鹏涛杨丽娜龚月生张建杨明明
- 关键词：木聚糖酶枯草芽孢杆菌
- 外源木聚糖酶在枯草芽胞杆菌中信号肽筛选被引量：2
- 2011年
- 【目的】本试验旨在筛选引导表达外源木聚糖酶基因高效分泌的信号肽,为枯草芽胞杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统提供元件。【方法】构建信号肽筛选载体,载体是以含壮观霉素抗性基因的大肠-枯草穿梭载体为基本骨架,目标蛋白为耐碱性木聚糖酶,可在麦芽糖启动子Pglv诱导下表达。从枯草芽胞杆菌A1747基因组中扩增获得24个Sec途径信号肽,并将其全部链接到至筛选载体上,并在枯草芽胞杆菌WB700中实现表达分泌。重组菌在3%麦芽糖诱导下培养24h后用DNS法测定上清酶活。【结果】成功构建信号肽筛选载体pGPSX及24个表达载体,实现木聚糖酶表达分泌。且不同信号肽对于引导外源木聚糖酶分泌能力不同,其中YnfF信号肽引导分泌目标蛋白效率最高,上清酶活为37.2IU/mL。【结论】试验证明在枯草杆菌中对外源蛋白进行信号肽筛选是提高其分泌的有效途径,并获得了针对木聚糖酶高效分泌信号肽YnfF。
- 范鑫杨明明曹鹏涛张伟张雯宋秀平龚月生
- 关键词：木聚糖酶基因信号肽枯草芽胞杆菌
- 枯草芽孢杆菌高效表达系统的构建被引量：3
- 2011年
- 【目的】优化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)启动子和表达宿主,构建其高效的表达系统,为重组枯草芽孢杆菌的研究和应用奠定基础。【方法】以β-半乳糖苷酶编码基因为报告基因,以诱导型的枯草芽孢杆菌麦芽糖操纵元启动子为调控元件、大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒为载体骨架,构建枯草芽孢杆菌高效表达载体pGJ222,将其电转化到B.subtilis 1A747菌株后进行诱导表达试验和葡萄糖抑制试验。利用同源重组的方法,用枯草芽孢杆菌组成型启动子P43替换了B.subtilis野生型菌株1A747麦芽糖操纵元的上游调控序列,得到优化重组表达宿主菌B.subtilis BCYL,将pGJ222转入B.subtilis BCYL后,对优化的表达系统进行诱导表达试验和葡萄糖抑制试验。分别用PCR扩增大肠杆菌和枯草芽孢杆菌维生素B12合成前期途径的谷氨酰-tRNA合成酶编码基因hemA,构建其表达载体,并将其转化B.subtilis BCYL中进行诱导表达检测。【结果】成功构建了枯草芽孢杆菌高效表达载体pGJ222,并实现了β-半乳糖苷酶的高效表达,其表达量占总可溶性蛋白的18%;质量分数5%的麦芽糖诱导24hβ-半乳糖苷酶活达到16U/mL。成功获得了优化重组表达宿主菌B.subtilis BCYL,其可使β-半乳糖苷酶活性有大幅度提高,在质量分数5%麦芽糖诱导24hβ-半乳糖苷酶活达到21U/mL,葡萄糖的抑制作用明显减弱。【结论】通过对启动子和表达宿主的优化,获得了枯草芽孢杆菌高效表达系统,为枯草芽孢杆菌基因工程研究提供了有力工具。
- 毕台飞胡雄斌宋巍杨明明
- 关键词：枯草芽孢杆菌同源重组Β-半乳糖苷酶
- 耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草杆菌中的表达及发酵条件优化被引量：3
- 2010年
- 研究耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中异源表达。从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌BYG5—20中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因xynA，将其构建在大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGJ148中得到重组质粒pGJ148-xynA。采用电转化法将重组质粒pGJ148-xynA转入枯草芽孢杆菌1A747中，得到重组菌电．GJ148-xynA，然后进行诱导表达以及培养基的优化。重组菌GJ148～xynA发酵上清液中木聚糖酶酶活可达93．32IU／ml。耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶基因xynA可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达，为枯草芽孢杆菌木聚糖酶分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。
- 周煌凯龚月生杨明明张云雁宋秀平
- 关键词：木聚糖酶枯草芽孢杆菌发酵条件
- 枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达被引量：3
- 2011年
- 构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。
- 段春燕龚月生范鑫杨明明张云雁周煌凯王新国
- 关键词：木聚糖酶基因信号肽枯草芽孢杆菌
- 麦芽糖诱导耐碱性木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达被引量：8
- 2011年
- 考察麦芽糖诱导木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌WB700中的表达。以麦芽糖为诱导剂,对诱导质量分数、诱导时机、诱导温度和麦芽糖的添加方式等主要因素进行了分析比较。结果表明,当菌体生长至发酵液吸光值OD600达到1.3时加入终质量分数为4.5%麦芽糖,37℃,持续诱导10 h,木聚糖酶活力达到最高,为56.32 U。通过SDS-PAGE检测对比显示:经麦芽糖诱导表达的木聚糖酶比不加麦芽糖诱导的木聚糖酶表达量高,表达效果更明显。
- 张云雁杨明明周煌凯段春燕龚月生
- 关键词：麦芽糖SDS-PAGE
- 低能日粮中添加木聚糖酶对肉仔鸡生产性能和养分利用率的影响
- 2011年
- 为了验证自产木聚糖酶的添加效果并确定其适应添加量,将180只健康且体质量接近的1日龄AA肉仔鸡,随机分为6组,每组6个重复,每重复5只。分别添加5个水平(0、500、1 000、1 500和2 000 U/kg)的自产木聚糖酶及1 000 U/kg的商品酶,研究其对肉仔鸡生产性能、养分利用率的影响,并比较自产酶与商品酶饲养效果。结果表明,与对照组比较,添加1 000 U/kg自产木聚糖酶可显著提高日增体质量、蛋白质利用率、能量利用率及粗纤维利用率(P<0.05),并显著降低平均日采食量和料肉比(P<0.05)。添加自产木聚糖酶1 000 U/kg与商品酶1 000 U/kg相比,日增体质量、采食量、料重比和蛋白质、能量及粗纤维利用率均没有显著性差异(P>0.05)。
- 宋秀平张雯范鑫杨明明龚月生
- 关键词：肉仔鸡木聚糖酶养分利用率
