山东省自然科学基金(Y2008C77)
- 作品数：16 被引量：36H指数：4
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- 相关机构：青岛大学医学院附属医院青岛大学更多>>
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- 犬同种异体脱钙骨基质复合骨髓基质干细胞片层与内皮祖细胞的体外培养被引量：1
- 2010年
- 目的:观察犬骨髓基质干细胞(bone marrow stroma stem cells,BMSCs)细胞片层及内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)上的生长情况,探讨利用其复合体构建功能性血管化组织工程骨的可行性。方法:应用细胞片层技术制备BMSCs细胞片层,培养犬内皮祖细胞,制备犬同种异体DBM。将DBM分别与BMSCs细胞片层、内皮祖细胞复合。测量DBM孔隙率,倒置相差显微镜、扫描电镜下观察DBM的结构及BMSCs细胞片层、EPCs在DBM上的附着、生长情况。结果:成功构建DBM/BMSCs细胞片层、DBM/EPCs复合体,BMSCs细胞片层、EPCs在DBM上的附着、生长状况良好,增殖迅速。结论:DBM/BMSCs细胞片层、DBM/EPCs复合体能够为生成具有骨样结构的组织工程骨提供良好的条件,并为组织工程骨的血管化创造有利的环境。
- 谭帅李宁毅荆恒高振华陈立强
- 关键词：脱钙骨基质内皮祖细胞
- 犬骨髓间充质干细胞片层的体外培养与制备被引量：1
- 2010年
- 背景:传统的组织工程方法在收获和转移细胞方面存在诸多不足,且难以形成致密的组织,明显限制了组织工程学的发展。目的:探讨犬骨髓间充质干细胞片层的体外培养与制备方法。方法:实验犬麻醉后抽取骨髓,采用密度梯度离心法体外分离骨髓间充质干细胞。取传至第4代细胞,按1×109L-1密度接种于直径3.5cm的温度反应性培养皿中,置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱内培养,待细胞增殖融合时再将培养皿的温度降至20℃培养20min,倒置显微镜下观察细胞形态学变化及细胞片层形成情况。结果与结论:犬骨髓间充质干细胞原代培养24h呈椭圆形或多角形,72h多数细胞伸展贴壁,7d时形成细胞集落,12d时细胞呈长梭形,完全融合,细胞界限不清。温度反应性培养皿中的骨髓间充质干细胞在降温至20℃时,细胞形态发生变化,呈短梭形,且逐步从培养皿底分离,形成含细胞外基质的完整的细胞片层。证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓间充质干细胞,通过改变应用温度反应性培养皿的温度,能获取完整的细胞片层。
- 荆恒谭帅高振华陈立强李宁毅
- 关键词：骨组织工程骨髓间充质干细胞
- 细胞片层技术的研究进展被引量：5
- 2010年
- 组织工程的发展表现出了巨大的潜力,然而传统的组织工程方法限制了组织工程学的发展。新的细胞片层技术应用温度反应性培养皿收获细胞,避免了传统方法的不足之处。该方法不使用蛋白水解,仅简单地改变温度反应性培养皿的温度,便可收获完整的细胞片层。应用细胞片层进行组织重建的方式主要有将片层直接植入受区位点、通过同型或异型细胞片层的叠加构建三维结构的组织以及细胞片层结合支架的方法构建三维结构的组织。细胞片层技术与传统的组织工程学方法结合将会促进组织工程学的发展。
- 荆恒陈欣李宁毅
- 骨髓基质干细胞片层复合聚乳酸羟基乙酸支架构建组织工程骨被引量：2
- 2013年
- 目的制备骨髓基质干细胞片层，探讨其对组织工程骨成骨的作用。方法培养骨髓基质干细胞（BMSCs）并向成骨方向诱导，利用温度反应性培养皿制备骨髓基质干细胞片层，光学及电子显微镜下观察其形态。将经过预处理的三维多孔聚乳酸羟基乙酸（PLGA）支架注射BMSCs悬液并复合干细胞片层后植入犬左侧下颌骨缺损，为实验侧；将未复合细胞片层的支架植入右侧．为对照侧。16周后，对新生骨行影像学及组织学观察分析。结果片层中细胞排列紧密，生长活跃。实验侧吸光度值高于对照侧（P〈0．05），并可见较多哈弗系统及板层骨样结构。结论经温度反应性培养皿制备的干细胞片层结合PLGA支架可形成具有板层状结构的组织工程骨。
- 姚超李宁毅刘风芝王玲玲于跃远隋爱华
- 关键词：骨髓基质干细胞聚乳酸羟基乙酸组织工程骨
- 骨髓基质干细胞的体外培养及其细胞片层制备被引量：10
- 2010年
- 目的探讨犬骨髓基质干细胞(BMSCs)的体外培养及成骨向诱导后细胞片层的制备方法。方法密度梯度离心法分离培养犬BMSCs,向成骨细胞方向诱导分化后,倒置相差显微镜和扫描电镜下进行形态学观察;将诱导后的BMSCs接种至温度反应性培养皿中,37℃、5%CO2饱和湿度培养,然后降温至20℃制备BMSCs的细胞片层。结果原代培养的BMSCs呈长梭形,漩涡状生长;向成骨细胞诱导后的BMSCs呈卵圆形或多角形,当温度降至20℃时,BMSCs从温度反应性培养皿上完全脱落。扫描电镜下观察可见到富含细胞外基质的完整BMSCs细胞片层。结论应用密度梯度离心法可有效获取BMSCs,并向成骨细胞诱导分化;应用温度反应性培养皿能获取完整的BMSCs细胞片层可包裹支架,并用于功能性成骨。
- 荆恒李宁毅谭帅高振华陈立强
- 关键词：骨髓基质干细胞
- 犬骨髓基质细胞片层在构建组织工程骨中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞片层在构建组织工程骨中的价值。方法:制备犬同种异体脱钙骨基质(dermineralized bone matrix,DBM)。将人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)复合到DBM上。抽取犬髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离犬骨髓基质细胞(BMSCs)。将经成骨诱导的第3代细胞接种于温度反应性培养皿中,制备BMSCs细胞片层。用得到的BMSCs细胞片层包裹DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体,植入犬背阔肌血运丰富的肌筋膜下为实验侧,以无BMSCs细胞片层包裹的DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体为对照侧。术后4、8、12周取材,行组织学观察,评价体内异位成骨的情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行两样本均数差别的t检验。结果:实验侧成骨面积大于对照侧,2组差异有显著性(P<0.05)。术后12周,实验侧生成大量板层骨,有哈弗系统形成,骨髓腔内有红骨髓。对照侧有板层骨形成,无哈弗系统形成,骨髓腔内无红骨髓。结论:BMSCs细胞片层可促进具有致密板层骨和哈弗系统的组织工程骨的形成。
- 王玲玲李宁毅樊功为卜令学杨学财高振华
- 关键词：骨髓基质细胞组织工程骨
- 应用细胞片层技术构建组织工程骨修复犬下颌骨缺损的实验研究被引量：13
- 2012年
- 目的应用骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞片层构建组织工程骨修复犬下颌骨缺损,探讨细胞片层在成骨中的作用。方法采用密度梯度离心法分离和培养BMSCs,将BMSCs向成骨细胞诱导培养后,制备细胞片层。将细胞片层包裹到聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)支架表面,将其植入犬左侧下颌骨全层缺损中,对侧下颌骨植入无细胞片层包裹的支架复合体作同体对照。将16只犬分为4组,每组4只。术后4、8、12、16周分别处死1组,取材行大体及组织学观察。结果实验侧成骨好于对照侧,术后16周,实验侧骨缺损大部分被新生骨替代,舌侧形成与正常骨相似的密质骨,与正常骨断端骨性愈合。实验侧新生骨光密度值大于对照侧,两者差异有统计学意义(P<0.05)。实验侧可见较多哈弗氏系统及红骨髓,大量板层骨;对照侧哈弗氏系统较少。结论利用细胞片层技术可以构建出含板层骨结构的组织工程骨。
- 姚超卜令学王科李宁毅王玲玲于跃远
- 关键词：骨髓间充质干细胞组织工程骨下颌骨缺损
- 犬骨髓基质干细胞片层制备及向成骨细胞的分化(英文)
- 2010年
- 背景:目前传统的胰酶消化法和单细胞悬液转移细胞的方法存在诸多缺点,限制了骨组织工程学的发展。目的:培养骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,制备细胞片层。方法:密度梯度离心法分离犬骨髓基质干细胞,接种于DMEM成骨诱导培养基,向成骨细胞诱导分化,采用细胞片层技术,利用温度反应性培养基的温度变化,收获完整的细胞片层。结果与结论:刚接种至培养皿的原代细胞在培养瓶底散在分布,呈圆形,胞体透亮,折光性好,12d时细胞呈长梭形,完全融合,呈旋涡状生长;成骨诱导后的骨髓基质干细胞大部分变为方形、多角形和鳞片形,21～28d形成明显的圆形或卵圆形钙化结节;温度反应性培养皿中的间充质干细胞降温至临界温度32℃以下时,细胞便逐步从培养皿底分离,形成完整的骨髓基质干细胞片层。实验结果证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,应用细胞片层技术可获取完整的骨髓基质干细胞片层。
- 卜令学荆恒陈立强高振华李宁毅
- 关键词：骨髓基质干细胞温度变化密度梯度离心法组织工程骨
- 骨髓基质干细胞片层的制备及其在组织工程骨中应用的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)片层(cell sheet)的制备方法,并观察其在实验犬体内构建组织工程骨时的成骨作用。方法:密度梯度离心法获取实验犬骨髓基质干细胞,经成骨诱导培养后,利用温度感应性培养皿(temperature-responsive culture dish)制备细胞片层后在体外包裹犬同种异体脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),相差显微镜和扫描电镜观察细胞及片层形态;将复合体植入实验犬背阔肌筋膜下,组织学方法观察术后组织工程骨的骨形成情况。结果:细胞片层成功制备,并与支架材料复合良好,术后16周组织学显示形成类似板层骨的致密骨组织。结论:利用温度反应性培养皿可成功制备BMSC细胞片层,细胞片层包裹支架材料后在实验动物体内可形成具有类似板层骨结构的组织工程骨。
- 高振华李宁毅刘凤芝荆恒谭帅姚如永
- 关键词：骨髓基质干细胞骨组织工程
- 内皮祖细胞在骨组织工程中的应用
- 2010年
- 内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)可以来源于骨髓、脐带血、外周血及胎儿肝脏,其丰富的来源、较强的增殖能力及其参与血管发生(vasculogenesis)和血管新生(angiogenesis)的特性能够满足组织工程对种子细胞的要求,已成为构建血管化组织工程骨的新生力量。但目前来看,EPCs在骨组织工程中的应用研究较少,该文就目前有关EPCs的来源、分离与培养、鉴定、诱导与分化和在骨组织工程中的应用现状作一综述。
- 高振华李宁毅
- 关键词：内皮祖细胞骨组织工程血管化
