四川省应用基础研究计划项目(04JY029-002)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的:构建一种含有重组免疫毒素DT390-mRantes(白喉杆菌外毒素390片段-活化T细胞表达与分泌调节因子)的真核表达质粒,并用于治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。方法:利用自提的MBP诱导C57BL/6小鼠产生EAE,将mRantes导入含有DT390的真核表达质粒SRα中,经阳离子纳米脂质体包被后,治疗小鼠EAE,同时对其临床症状、脑部病理改变、外周血相关细胞因子及T/B细胞比例进行检测,了解该重组免疫毒素的治疗效果。结果:成功构建真核表达质粒DT390-mRantes-SRα,治疗组小鼠临床症状减轻,脑部特异性淋巴细胞浸润减少,外周T细胞相关细胞因子表达降低,T/B细胞比例降低。结论:新型重组免疫毒素DT390-mRantes治疗小鼠EAE有较为明显的效果,为治疗人的多发性硬化(MS)提供有益的借鉴。
- 贾怡李虹陈文捷吕梅励李明远蒋忠华张林
- 关键词：DT390重组免疫毒素
- EAE小鼠模型的构建及其免疫学机制的探讨被引量：10
- 2008年
- 目的用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型并初步探讨EAE发病的免疫学机制。方法用MOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠,观察实验动物的症状及中枢神经系统的病理改变;应用MTT法测定EAE小鼠脾脏T淋巴细胞活化增殖程度;应用ELISA技术测定EAE小鼠血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体水平。结果EAE组发病率为100%,HE染色观察到脑脊髓炎性细胞浸润,白质脱髓鞘等病理改变;EAE小鼠脾脏MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖活化,血清IFN-γ浓度和抗MOG35-55抗体随病情的加重而升高。结论用MOG35-55多肽成功诱导了C57BL/6小鼠EAE模型;并推断EAE的发生可能与MOG35-55反应性T淋巴细胞的活化、抗MOG35-55抗体和IFN-γ升高有关。
- 泰淑红李虹贾静吕梅励张林
- 关键词：髓鞘少突胶质细胞糖蛋白实验性自身免疫性脑脊髓炎干扰素-Γ
- mM IP-1α-DT390重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达研究
- 2007年
- 目的构建小鼠M IP-1α(mM IP-1α)基因和白喉杆菌外毒素DT 390基因的真核融合表达载体,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR获得mM IP-1α基因,插入含DT 390基因的真核质粒SRα,获得真核表达载体SR-αmM IP-1-αDT 390。重组载体经PCR、限制性内切酶酶切及DNA序列测定鉴定,用Po lyF ect脂质体转染N IH 3T 3细胞,然后用免疫荧光技术检测目的蛋白的表达,并利用转染N IH 3T 3细胞后的培养上清体外测定mM IP-1-αDT 390融合蛋白的选择性细胞毒活性。结果成功构建真核表达质粒SR-αmM IP-1-αDT 390,mM IP-1-αDT 390融合蛋白可在N IH 3T 3细胞株中正确表达,细胞转染上清对小鼠活化T淋巴细胞具有较强的细胞抑制效应。结论mM IP-1-αDT 390融合基因真核表达载体的获得及功能的部分研究为进一步研究其抗炎效果和临床应用奠定基础。
- 吕梅励李虹梁伟波陈文捷贾怡蒋忠华张卫东张林
- 关键词：巨噬细胞炎症蛋白-1Α重组免疫毒素真核表达
- 免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究被引量：1
- 2006年
- 目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性。结果构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达。表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞。结论免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础。
- 陈文捷李虹贾怡张林吕梅励李明远蒋中华
- 关键词：免疫毒素DT390真核表达
- 一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes真核表达质粒的构建及功能
- 2005年
- 目的构建一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes的真核表达质粒,并对这种免疫毒素的功能进行初步研究。方法通过RT-PCR的方法,从小鼠肝脏中获得Rantes基因;将Rantes基因插入到含有DT390片段的真核质粒SRα中,构建成重组质粒;重组质粒转入大肠杆菌JM109,筛选出含有正确插入片段的克隆;限制性内切酶酶切图谱分析重组质粒,并进行DNA序列分析;用脂质体介导法转染NIH3T3细胞,免疫荧光检测重组质粒的表达情况;MTT法测定DT390-Rantes的表达活性。结果经过酶切分析及DNA测序证实,Rantes基因正确插入到真核表达质粒SRα中,并在NIH3T3细胞中表达;MTT法证实,重组免疫毒素DT390-Rantes能在体外杀伤活化的T细胞。结论成功地构建了一种新型重组免疫毒素真核表达质粒DT390-Rantes-SRα,该质粒可在真核细胞中瞬时表达,其转染上清对活化的T细胞具有杀伤作用。
- 贾怡李虹陈文捷吕梅励李明远蒋忠华张林
- 关键词：免疫毒素RANTESDT390真核表达
- mMIP-1α-DT390核酸制剂治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的研究
- 2007年
- 目的新型重组免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂对实验性变态反应性脑脊髓炎治疗的效果研究。方法用MBP免疫C57BL/6小鼠诱发EAE,建立人多发性硬化症的动物模型。将构建的真核质粒SRα-mMIP-1α-DT390直接导入EAE模型小鼠C57BL/6肌肉,使重组免疫毒素在其骨骼肌内高效表达。通过对模型小鼠的临床症状的评分、病理切片所显示的中枢神经系统炎症细胞浸润的情况及流式细胞技术检测的外周T细胞的动态变化等指标对核酸制剂的疗效进行评估。结果新型免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂治疗EAE模型小鼠,使小鼠临床症状得到改善:发病延迟、平均临床评分下降、症状严重程度降低;神经系统的病理切片显示治疗后小鼠的脑部活化的淋巴细胞浸润减轻;流式细胞仪检测结果显示治疗后小鼠外周血T细胞数量下降,而B淋巴细胞基本维持正常水平。结论所有检测指标均提示该免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂可有效的治疗自身免疫性疾病。
- 吕梅励李虹梁伟波陈文捷贾怡李明远蒋忠华张林
- 关键词：MIP-1ΑDT重组免疫毒素
- 小鼠MIP-1α-DT390重组免疫毒素原核表达载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的构建小鼠MIP-1α基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的原核融合表达载体,诱导并鉴定该蛋白的表达。方法通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,通过PCR扩增质粒SRα-DT390获得DT390基因,酶切、连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组质粒证实构建成功后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导融合蛋白表达,并用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法鉴定。结果成功构建了mMIP-1α与DT390基因的原核融合表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达蛋白的相对分子质量与预期值一致,并可被抗mMIP-1α和抗白喉毒素的特异性抗体所识别。结论获得了mMIP-1α与DT390融合基因在原核系统中的稳定表达,为研究其临床应用奠定了基础。
- 吕梅励李虹梁伟波李明远蒋忠华贾怡陈文捷张林
- 关键词：MIP-1Α重组免疫毒素原核表达
