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国家自然科学基金(81271949)

作品数：7 被引量：15H指数：3
相关作者：陈飞虎葛金芳唐杰胡伟王志森更多>>
相关机构：安徽医科大学安徽医科大学第二附属医院合肥市第一人民医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金安徽省自然科学基金更多>>
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文献类型

  • 7篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 8篇医药卫生

主题

  • 5篇软骨
  • 5篇软骨细胞
  • 5篇骨细胞
  • 5篇关节
  • 5篇关节软骨
  • 5篇关节软骨细胞
  • 3篇蛋白
  • 3篇基因
  • 2篇信号
  • 2篇自噬
  • 2篇细胞
  • 2篇激酶
  • 1篇代谢
  • 1篇蛋白表达
  • 1篇蛋白激酶
  • 1篇调节激酶
  • 1篇信号调节
  • 1篇信号调节激酶
  • 1篇信号通路
  • 1篇荧光

机构

  • 8篇安徽医科大学
  • 3篇安徽医科大学...
  • 1篇合肥市第一人...

作者

  • 7篇葛金芳
  • 7篇陈飞虎
  • 4篇唐杰
  • 3篇胡伟
  • 3篇周仁鹏
  • 3篇王志森
  • 2篇吴繁荣
  • 2篇高文凡
  • 2篇潘春晓
  • 2篇吴小山
  • 1篇张礼菊
  • 1篇吴建贤
  • 1篇林梅英
  • 1篇邓子云
  • 1篇倪文琳
  • 1篇张晨晨
  • 1篇雷静
  • 1篇王志强
  • 1篇代贝贝
  • 1篇李悦

传媒

  • 3篇安徽医科大学...
  • 3篇中国药理学通...
  • 1篇中国临床药理...

年份

  • 1篇2019
  • 1篇2016
  • 3篇2015
  • 2篇2014
  • 1篇2013
共 7 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
2014年
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFPC2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。
倪文琳唐杰潘春晓葛金芳陈飞虎
关键词：PEGFP-C2软骨细胞基因表达蛋白表达
钙络合剂BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响及其可能机制被引量：3
2015年
目的观察BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞,分为正常组(p H 7.4)、酸化组(p H 6.0)、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组,激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化,实时荧光定量PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3的表达,吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与p H 7.4正常组比较,p H 6.0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内Ca2+的浓度,且自噬标志物Beclin-1、ULK1 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,酸性自噬溶酶体形成增多,同时酸化刺激能引起Ca MKKβ及pAMPK蛋白表达水平增高,磷酸化蛋白p-m TOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和Ca MKKβ及p-AMPK表达明显降低,p-m TOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+有关。
高文凡陈飞虎葛金芳邓子云雷静周仁鹏王志森
关键词：BAPTA-AM关节软骨细胞CA2+
核糖体蛋白RPS3在ATPR诱导的人慢性粒细胞白血病细胞K562细胞分化过程中的作用及相关机制研究
慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)是一种骨髓造血细胞克隆性异常增生性血液系统肿瘤，其临床症状以外周血白细胞增多、肝脾肿大为主。通常认为，慢性粒细胞白血病的发病机制是在染色体水平上...
杨小娟
关键词：慢性粒细胞白血病K562细胞细胞分化
酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a表达的影响被引量：1
2015年
目的:pH 6.0培养条件下观察神经生长因子(NGF)对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)基因和蛋白表达的调控作用及其机制。方法:体外提取培养原代大鼠膝关节软骨细胞,酸性环境下观察细胞NGF高亲和力受体TrkA的表达情况;不同浓度NGF刺激观察ASIC1a的表达变化;10 ng/m L NGF刺激不同时间胞外信号调节激酶(ERK1/2)及c-fos磷酸化的时效关系,阻断ERK1/2(PD98059 30μmol/L)后观察cfos磷酸化水平和ASIC1a的表达;RT-PCR检测ASIC1a基因的表达,Western Blot检测Trk-A、ASIC1a、ERK1/2、p-c-fos蛋白的表达。结果:在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境可高出3倍,ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,10 ng/m L时趋于稳定;NGF刺激后,ERK1/2及c-fos活化增强,4 h达到最大水平;阻断了ERK1/2之后,p-c-fos和ASIC1a蛋白表达下降,差异具有显著性(P<0.01)。结论:在酸性环境下,NGF促进了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的上调,并且ERK1/2信号通路的活化可能参与了这一过程。
唐杰胡伟吴繁荣葛金芳潘春晓高文凡陈飞虎
关键词：关节软骨细胞酸敏感离子通道神经生长因子胞外信号调节激酶
ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定被引量：3
2015年
饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法鉴定子代小鼠基因型。ASIC1基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子(ASIC1+/-)、纯合子(ASIC1-/-)和野生型(ASIC1+/+)。
周仁鹏吴小山王志森葛金芳陈飞虎
关键词：基因敲除小鼠PCR
ASIC1a对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响被引量：3
2014年
目的研究ASIC1a(acid-sensing ion channel 1a)对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响。方法 SD大鼠关节软骨细胞分离、培养与鉴定,建立软骨细胞ASIC1a表达沉默模型。将软骨细胞分为正常组(pH7.4)、pH 6.0酸化组、以及ASIC1a特异性阻滞剂PcTx-1、表达沉默组和非特异性阻滞剂Amiloride处理的酸化组,对二甲基亚甲蓝分光法检测大鼠关节软骨细胞培养上清中GAG的含量,氯胺T法检测Hyp的含量,ELISA法检测MMP-2、TIMP-2的含量,Western blot法检测酸化及阻断ASIC1a后ERK1/2、p38 MAPK磷酸化蛋白的表达。结果激活ASIC1a明显抑制大鼠关节软骨细胞GAG、Hyp和TIMP-2代谢水平(P<0.01),对MMP-2的代谢水平降低抑制作用较弱(P<0.01),且ASIC1a能引起ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平升高,阻断ASIC1a后,磷酸化水平升高受到明显抑制(P<0.01)。结论 ASIC1a参与了酸诱导的大鼠关节软骨细胞基质代谢的失衡,其机制可能与激活ERK1/2和p38MAPK磷酸化有关。
张礼菊胡伟唐杰吴繁荣葛金芳陈飞虎吴建贤
关键词：关节软骨细胞基质代谢丝裂原激活蛋白激酶羟脯氨酸糖胺聚糖
酸敏感离子通道1a在酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其机制研究被引量：7
2013年
目的研究酸敏感离子通道1a(acid-sensing ion chan-nel 1a)在体外培养的酸诱导的大鼠关节软骨细胞自噬的作用及其可能机制。方法Ⅱ型胶原酶消化法分离大鼠关节软骨细胞,鉴定后传代培养,观察在不同pH条件下诱导的细胞自噬情况以确定胞外酸化条件;将软骨细胞分为pH7.4环境下培养的正常组、pH 6.0的酸化组、以及经ASIC1a非特异性阻断剂Amiloride和特异性阻断剂PcTX1处理的酸化组,RT-PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3及ERK1/2、p38MAPK磷酸化蛋白的表达,透射电子显微镜法(TEM)观察自噬小体数量的变化;通过使用ERK1/2、p38MAPK磷酸化抑制剂(PD98059、SB203580),采用RT-PCR和Western blot法观察ERK1/2及p38MAPK对酸诱导的软骨细胞自噬的影响。结果 pH 5.5和pH 6.0胞外酸化刺激均能明显升高软骨细胞自噬水平(P<0.01);与pH 7.4组比较,酸化组软骨细胞Beclin-1 mRNA及LC3、磷酸化的ERK1/2和p38MAPK蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),且自噬小体数量增多,ASIC1a阻断剂组自噬水平及ERK1/2、p38磷酸化蛋白表达水平较酸化组明显降低(P<0.01),且自噬体数量减少;与pH 6.0组相比,ERK1/2磷酸化抑制剂处理后,Beclin-1 mR-NA和LC3蛋白的表达均下调(P<0.05,P<0.01),而p38磷酸化抑制剂组自噬水平则无明显变化。结论胞外酸化环境下能诱发软骨细胞自噬,阻断ASIC1a能明显减弱酸化诱导的软骨细胞自噬,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。
张晨晨唐杰胡伟葛金芳林梅英陈飞虎
关键词：自噬关节软骨细胞LC3ERK1
大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定
2016年
目的构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段;NheⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上;构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRLTK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段;成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P<0.01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。
周仁鹏吴小山王志森谢亚亚李悦代贝贝王志强葛金芳陈飞虎
关键词：启动子荧光素酶报告基因
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