国家重点基础研究发展计划(2006CB101802) 作品数:6 被引量:26 H指数:4 相关作者: 史成银 孔晓瑜 黄倢 吴成龙 刘莉 更多>> 相关机构: 中国水产科学研究院黄海水产研究所 中国海洋大学 中国科学院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
中国大菱鲆虹彩病毒(TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用 被引量:4 2008年 大菱鲆红体病虹彩病毒(turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国工厂化养殖大菱鲆的主要病毒性病原之一。本研究提取了该病毒DNA,依据其主要衣壳蛋白基因序列设计了PCR引物,优化了PCR反应参数,建立了TRBIV的PCR检测方法,测试了该方法的特异性和灵敏度,并应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查及研究了大菱鲆的外观症状(红体)与TRBIV感染的关系。结果显示,本研究建立的TRBIVPCR检测方法可以从相当于100ng病鱼组织中或103数量级的病毒粒子中检出TRBIV,也可以在不杀死被测鱼的情况下,仅从鱼体中抽取少量血液即可在1天的时间内完成大量样品的TRBIV检测,但不能从健康大菱鲆脾组织和患淋巴囊肿牙鲆的囊肿组织中扩增出任何产物,说明该方法具有很高的灵敏性和特异性;在所调查的山东半岛5家大菱鲆养殖场的19尾大菱鲆中,7尾为TRBIV阳性或弱阳性;具有"红体"症状的大菱鲆应当划分为"病毒性红体病"、"细菌性红体病"和"非病原性红体症"3种不同的类型。本研究为TRBIV的流行情况和传播途径调查、疾病的快速诊断和控制提供了技术手段;调查结果显示TRBIV已遍布山东半岛沿海地区的大菱鲆主产区,在地域上相距较远的多个大菱鲆养殖场流行,今后需要密切关注该病毒的传播和流行。 史成银 黄倢 杨冰 刘莉关键词:大菱鲆 虹彩病毒 PCR 大菱鲆红体病虹彩病毒主要衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的重组分泌表达 被引量:6 2009年 依据大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot viral reddish body iridovirus,TRBIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)基因序列,设计了一对特异性引物,并在正反向引物中分别引入EcoR I和Not I酶切位点,从而将PCR扩增得到的TRBIV MCP基因双酶切后定向克隆到真核表达载体pGAPZαA的GAP启动子的下游位点,并电转化入大肠杆菌DH5α宿主菌内。经抗生素Zeocin筛选、PCR、EcoR I和Not I双酶切以及测序分析,构建了含有α-factor信号肽的真核重组表达载体pGAPZαA MCP。重组表达质粒pGAPZαA MCP经Avr Ⅱ单酶切后电转导入毕赤酵母X-33中,挑选阳性克隆,提取表达上清经SDS-PAGE和Western-blot免疫印迹分析。结果显示,TRBIV MCP基因在酵母中成功实现分泌表达。阳性重组酵母菌经过72h诱导培养后,重组TRBIV MCP的表达量高达60.2μg/ml左右。 吴成龙 史成银 黄倢 孔晓瑜关键词:大菱鲆红体病虹彩病毒 毕赤酵母 半滑舌鳎IRF-7基因的全长cDNA克隆及表达分析 2012年 本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和607bp的3′-UTR。CsIRF-7 cDNA编码一个由433个氨基酸残基组成的多肽。氨基酸序列比对结果表明,CsIRF-7多肽与脊椎动物IRF-7相似,存在高度保守的3个结构域:DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、干扰素相关区(IRF associated domain,IAD)和丝氨酸富含区(Serine-rich domain,SRD)。全长氨基酸序列同源性分析发现,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7同源性较高,与4种硬骨鱼类的同一性和相似性分别介于48.5%~73.6%和65.4%~83.8%之间;其中与牙鲆的同一性和相似性最高,分别为73.6%和83.8%;而与哺乳类和鸟类IRF-7的同源性较低,其同一性和相似性分别仅为30.3%~32.2%和46.5%~52.5%。系统进化分析表明,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7聚为一类,并与其他脊椎动物的IRF-7和IRF-3共同组成了脊椎动物IRF-3亚家族。实时荧光定量PCR检测结果显示,CsIRF-7基因在半滑舌鳎的肝、肾、脾、血细胞、鳃、肠和心脏等7种检测的组织中均有表达,在肠中表达量最高,而在肝、鳃和血细胞中表达量相对较少。 刘万建 史成银 宋展 耿伟光 李赟 黄倢关键词:半滑舌鳎 POLY 基因克隆 鱼类细胞肿大病毒属全基因组结构和蛋白功能研究进展 2009年 鱼类细胞肿大病毒隶属于虹彩病毒科,是引起重要经济淡水鱼类和海水鱼类死亡的主要病原之一。近年来,由于其对野生和养殖渔业造成的巨大经济损失及其对环境的破坏,受到人们越来越多的关注。目前,细胞肿大病毒属共报道了5株虹彩病毒的全基因组序列,论文就该5株病毒的基因结构特征及其编码的蛋白功能研究进行综述,以期为研究病毒和宿主之间的相互关系提供依据,为虹彩病毒疾病的诊断和防治策略提供参考。 贾坤同 孔晓瑜 史成银关键词:虹彩病毒 基因组结构 蛋白功能 鱼类细胞肿大虹彩病毒病研究进展 被引量:12 2007年 鱼类细胞肿大虹彩病毒病在东亚和东南亚的真鲷、石斑鱼、大菱鲆、大黄鱼、鳜鱼等多种养殖鱼类中的频繁流行,致使感染鱼类出现大面积死亡,已成为危害养殖鱼类最严重的病毒病之一。文章综述了近年来鱼类细胞肿大虹彩病毒病的研究现状,重点介绍了该类疾病的流行病学、临床症状、组织病理学、分子生物学检测技术、病毒的传播途径、致病机制以及病毒的免疫防控等方面的研究进展,并对当前鱼类细胞肿大虹彩病毒研究中存在的问题进行了分析和展望。 吴成龙 孔晓瑜 史成银关键词:虹彩病毒 海水养殖鱼类中虹彩病毒无症状感染的套式PCR分析 被引量:5 2009年 大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国和韩国养殖大菱鲆的主要病毒性病原。本研究依据TRBIV的腺苷三磷酸酶(Adenosine triphosphatease,ATPase)基因序列,设计了特异性的引物,建立了一种检测TRBIV的套式PCR方法,该方法检测TRBIV的灵敏度大约为一步PCR的104倍。应用该方法对6种中国常见海水养殖鱼类进行TRBIV感染情况调查,在无明显发病症状的黑鲪(Sebastodes fuscescerns)、宽体舌鳎(Cynoglossus robustus)、半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)和非洲黑石斑鱼(Alphestes afer)4种鱼类中,扩增出长度约为471bp的特异性DNA片段。对这些来自于不同鱼类的DNA片段进行测序和序列比对后发现,它们之间完全相同,且与TRBIV的ATPase基因序列有100%的同源性。研究结果表明,在这4种海水养殖鱼类体内存在TRBIV的无症状感染,它们可能也是TRBIV的宿主。 贾坤同 梁玉波 宋晓玲 杨冰 刘莉 樊景凤 孔晓瑜 史成银 黄倢关键词:大菱鲆红体病虹彩病毒 无症状感染 套式PCR