浙江省自然科学基金(Y304083)
- 作品数：9 被引量：115H指数：8
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- 含gfp植物转基因表达载体的构建及在矮牵牛转基因不定根中的高效表达被引量：10
- 2008年
- 利用pBIN19、pGFP和pCHS质粒,成功构建了CaMV35S启动子驱动的gfp基因的植物转基因表达载体pBIN-35S-GFP,并导入野生型发根农杆菌K599。矮牵牛的转化实验表明,矮牵牛离体叶片被发根农杆菌K599(带pBIN-35S-GFP质粒)感染生根率达45%。对诱导的不定根基因组DNA的PCR检测表明,不定根基因组中含有发根农杆菌K599Ri质粒中的rolB基因和外源gfp基因;转基因不定根在蓝色光激发下能发出强烈的绿色荧光,表明构建的转基因载体pBIN-35S-GFP能实现gfp基因的高效表达。该载体在CaMV35S启动子的两端各有一个多克隆位点,可以方便地进行启动子替换,用于研究不同启动子的功能。此外,该载体在gfp基因的5′端含有多克隆位点,在3′端含有EcoRⅠ和BsmⅠ两个单一酶切位点,可以方便地在5′端连接上目标基因,表达含GFP的融合蛋白,进行目标基因编码蛋白的亚细胞定位;也可以方便地切除gfp基因,连上需要的目的基因进行转化。
- 徐纪明向太和
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转基因不定根
- 全雌性黄瓜中3个肌动蛋白基因片段的克隆和表达分析被引量：11
- 2008年
- 通过1次PCR扩增从全雌性黄瓜中同时获得了长度分别为1186bp、955bp和870bp的3个肌动蛋白基因片段Act1、Act2和Act3(GenBank登记号:DQ115881、DQ115882和DQ115883)。序列分析表明,3个肌动蛋白基因片段与GenBank中收录的肌动蛋白基因序列高度同源,与GenBank中收录的全长肌动蛋白基因(如AF386514.1、AF059484.1和AB010922.1等)的第2、第3个外显子和第2个内含子相对应。Act1中1￣580bp、984￣1186bp,Act2中1￣580bp、753￣955bp,Act3中1￣580bp、668￣870bp为外显子编码区,其余为内含子序列,3个基因内含子的两端序列均符合典型的"GT-AG"规则。RT-PCR分析表明,Act1仅在根中表达,Act2在根和雌花中表达,而Act3在所有检测的器官(包括根、茎、叶、卷须、雌花和幼果)中都表达,提示黄瓜根的生长发育需要多种肌动蛋白基因的参与,而Act2和Act3可能与黄瓜雌性系的形成发育有关。
- 徐纪明向太和
- 关键词：黄瓜肌动蛋白基因克隆
- 不同性别类型黄瓜品种基因组DNA的提取及RAPD标记的初步研究被引量：6
- 2005年
- 采用改良的异丙醇沉淀法成功地提取了11个不同性别类型黄瓜品种的基因组DNA.以此作为PCR扩增反应模板进行RAPD分析,结果从22个10bp随机寡核苷酸引物中筛选出2个引物S23和S91在全雌性品种MT700和其他性别类型的品种之间稳定地扩增出多态性.至于该多态性标记是否与黄瓜雌性性别有关,还有待进一步分析.
- 向太和王利琳胡江琴庞基良余爱华
- 关键词：黄瓜品种RAPD标记RAPD分析PCR扩增寡核苷酸全雌性
- 不同性别类型黄瓜ACC合酶基因的单核苷酸多态性标记和酶切扩增长度多态性标记被引量：16
- 2006年
- 黄瓜的性别分化与乙烯密切相关,1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合酶是乙烯生物合成过程中的关键酶.根据ACC合酶基因家族的保守序列设计PCR引物,从8个不同性别类型(雌雄同株、强雌性和全雌性)黄瓜品种中克隆了长度为1188bp的ACC合酶基因(CS-ACS2)片段(GenBank登记号为:DQ115884～DQ115886和DQ115875～DQ115879).经测序分析,3个雌雄同株性别类型品种的序列完全相同.与之相比,5个强雌性和全雌性品种中存在8个单核苷酸多态性(SNPs)标记,SNPs标记为4个A←→G和4个T←→C之间的转换.在8个SNPs中,有1个SNP位于内含子区域,其余7个SNPs都位于外显子区域.在7个位于外显子区域的SNPs中,有3个为非编码区的SNPs,4个为cSNPs.而在4个cSNPs中,有3个导致了编码的氨基酸序列改变.研究结果表明,与雌雄同株性别类型相比,雌性系中均存在单核苷酸的变异,这提示ACC合酶基因CS-ACS2的单核苷酸变异可能与黄瓜雌性系的发生形成有关.另一方面,根据SNP多态性还发展了一个酶切扩增长度多态性(CAPS)标记C-MT700.利用CAPS标记C-MT700能将强雌性优良品种MT-705与其他黄瓜品种相区别,该标记在黄瓜育种生产上具有一定的应用价值.此外,研究获得的SNPs标记和CAPS标记丰富了黄瓜的分子标记种类.
- 向太和王利琳庞基良胡江琴申屠连峰吴锴
- 关键词：黄瓜
- 水稻(Oryza sativa L·)捕光叶绿素a/b结合蛋白基因全长cDNA的克隆和特性分析被引量：28
- 2005年
- 根据捕光叶绿素a／b结合蛋白基因（cab）家族中的保守序列设计PCR引物，扩增出的约310bpcDNA小片段为分子杂交探针，对构建的水稻cDNA文库进行杂交筛选，并结合PCR分析确定阳性克隆中cDNA片段的大小。通过对插入的cDNA片段最长的阳性克隆进行测序分析验证，克隆了水稻中1个cab基因全长cDNA，命名为cab-n8（GenBank登记号：AY445626）。cab-n8长为1128bp，从第55bp开始至789bp含有1个开放阅读框和1个终止密码子，编码244个氨基酸（GenBank登记号为AAR19267．1）；在3’端含有330bp的非编码区和Poly（A）18；在5’端有45bp的非编码区，在转录起始位点附近有TCA序列。通过序列分析，cab-n8编码的蛋白质在第54—216位包括典型的捕光叶绿素a／b结合蛋白功能域（chlorophll a／b binding domain）；在第141—158位含有无名指结构功能域（ring finger structure domain），该位点可能与捕光叶绿素结合蛋白与叶绿素a／b的结合有关；在第194—231位含有甘油醛-3-磷酸脱氢酶C端功能域（C-terminal domain of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase-like）。cab-n8编码的蛋白质预测的等电点和分子量分别为6．52和26955．80 Da。通过比较分析，cab-n8DNA序列（AY445626）和编码的氨基酸序列（AAR19267．1）与cab27DNA序列（AF094775．1）和编码的氨基酸序列（AAC67557．1）相似性最高，均为97％，显示cab家族基因在进化过程中是相当保守的。Northern blot分析表明，该基因在水稻叶和茎中表达没有差异，但光对其表达有明显的诱导促进作用。
- 向太和王利琳庞基良
- 关键词：水稻基因克隆
- 凤仙花离体培养再生植株并试管内开花被引量：14
- 2005年
- 研究以凤仙花无菌苗胚芽段作为外植体,经过不含任何激素的MS(0)培养基预培养、MS+6-BA3mg/L+NAA0.5mg/L培养基的诱导芽和根分化、MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L培养基的诱导开花,在60d左右实现了凤仙花离体培养再生植株并在试管内开花.凤仙花离体培养试管内开花不仅具有一定的商业开发价值,而且为深入研究外界条件对植物离体开花的调控提供了一个简便的实验体系.
- 向太和王利琳
- 关键词：凤仙花再生植株开花
- 发根农杆菌K599对大豆、黄瓜和凤仙花活体感染生根的研究被引量：8
- 2005年
- 利用野生型的发根农杆菌K599对属于不同科属的大豆、黄瓜和凤仙花进行活体感染实验,结果表明,发根农杆菌K599可使切割后的大豆、黄瓜和凤仙花子叶形成不定根,生根频率分别为100%、65%和91%。此外,发根农杆菌K599还可以使未进行创伤切割的黄瓜腋芽处形成不定根,生根频率为10%。根据发根农杆菌所具有的rolC基因序列,设计PCR引物,对再生的毛状根DNA进行PCR扩增,验证了再生的毛状根中含有发根农杆菌T-DNA序列。文章中获得的转基因根为进一步开展大豆、黄瓜的根结线虫病理以及凤仙花的矮化育种研究提供了前提材料。
- 向太和王利琳庞基良陈敏许超
- 关键词：发根农杆菌大豆黄瓜凤仙花活体
- 菊花组织培养植株再生及其后代的变异被引量：17
- 2006年
- 通过对微波处理后的菊花花蕾、叶片和茎进行组织培养,获得如下结果:1.菊花花蕾、叶片和茎3种外植体均能通过诱导形成愈伤组织,愈伤组织多以丛生苗的形式再生.其中,花蕾的愈伤组织诱导频率和苗的再生频率最高,花蕾可以作为菊花组织培养的良好起始材料;2.比较不同的培养基激素成分显示,在MS+6-BA3 mg/L+NAA 0.5 mg/L的培养基上菊花花蕾再生频率最高;3.从诱变育种的角度考虑,微波处理20 s对菊花花蕾的离体培养是较理想的剂量;4.在获得的再生植株中出现了明显可见的形态变异.形态变异主要有4种类型:1)花序由头状花序转变为唇形花,花、茎、叶等形态特征与唇形科的植物(如:紫苏)非常相似;2)节间比亲本长约0.5 cm左右,叶片变大,枝条分蘖能力降低;3)在同一植株上开出的花朵出现了3种不同深浅的红色,即粉红、玫瑰红、深红色;4)株形出现丛生状.本研究结果为进一步利用组织培养实现菊花育种和利用获得的突变体研究栽培菊花的起源和菊花花发育提供了极好的前提材料.
- 向太和
- 三种模式植物性别决定的研究进展(综述)被引量：8
- 2007年
- 综述白麦瓶草、玉米和黄瓜等模式植物性别决定的研究进展,并展望今后研究方向。
- 徐纪明向太和
- 关键词：模式植物性别决定性染色体性别决定基因
