天津市应用基础与前沿技术研究计划(10JCYBJC09300) 作品数:10 被引量:83 H指数:6 相关作者: 张桂华 朱珠 兰青阔 赵新 王永 更多>> 相关机构: 天津科润农业科技股份有限公司 天津市农业科学院 天津市种子管理站 更多>> 发文基金: 天津市科技支撑计划 天津市应用基础与前沿技术研究计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
基于SNP标记的黄瓜杂交种纯度鉴定方法 被引量:27 2012年 根据国际葫芦科基因组数据库CuGenDB中序列信息,应用高分辨率熔解曲线技术筛选出用于黄瓜杂交种纯度鉴定的SNP位点CLA6(A/G),该位点在33个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.401,处于中度多态;结合焦磷酸测序技术,建立基于CLA6位点的SNP-Pyrosequencing黄瓜杂交种纯度鉴定方法。利用该鉴定方法检测黄瓜杂交种优一90粒种子,结果其种子纯度为96.7%,该结果与CLA0位点及SSR鉴定结果相符,表明该鉴定技术适于黄瓜杂交种纯度鉴定,具有用于DUS测试分析的潜力。 兰青阔 张桂华 王永 赵新 朱珠 崔兴华 郭永泽 程奕关键词:黄瓜 种子纯度 SNP标记 焦磷酸测序 基于高分辨率熔解曲线技术快速筛选黄瓜SNP_1 被引量:6 2011年 为筛选用以黄瓜纯度检验和品种鉴定的SNP位点,以17个黄瓜杂交品种及其34份亲本为SNP筛选群体,利用高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术筛选SNP位点。本研究通过HRM分析和焦磷酸测序确认,获得CLA0(TT/--)、CLA1(C/T)和CLA6(A/G)三个SNP位点,群体中多态信息量(PIC)分别为0.549、0.366和0.477;并对市售12个杂交黄瓜种分型鉴定,结果表明,三个SNP位点适用于其中11个市售品种的纯度鉴定,具备用于品种鉴定的潜能。 兰青阔 张桂华 王永 赵新 朱珠 孙玉河 郭永泽 程奕关键词:黄瓜 SNP标记 高分辨率熔解曲线 利用DNA池技术提高基于InDel标记的种子纯度鉴定效率 2012年 为提高基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测通量,降低检测成本,本研究模拟10种DNA Pooling进行PCR、Pyrosequencing及等位基因频率分析。通过TTest分析不同Pooling间等位基因频率的差异性,确定3 Pooling为种子纯度检测最适Pooling数;建立3 Pooling-InDel-Pyrosequencing标准曲线,其R2达0.999 1;根据该标准曲线,检测黄瓜杂交品种"园中王"30粒杂交种种子纯度,结果为96.67%。本研究丰富了基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测技术体系。 兰青阔 余景会 赵新 王永 张桂华 朱珠 陈锐 李欧静 郭永泽 程奕关键词:INDEL标记 黄瓜 种子纯度鉴定 复合EST-SSR标记在大白菜品种鉴定中的应用 被引量:5 2013年 利用EST-SSR分子标记技术,对12份大白菜品种鉴定方法进行了研究。通过对GenBank数据库中公布的大白菜EST序列的分析,合成了30对核心EST-SSR引物,其中21对均可得到有效扩增,10对具有较高的多态性。为了更加高效的对大白菜品种进行鉴定,根据这10对多态性较高的引物对12份市售大白菜品种鉴定的结果及扩增条带的相互位置差异,研制了由多个引物对组成的2套复合EST-SSR标记,建立了多重SSR的反应体系及反应条件。筛选得到的2套标记组合,多态率分别为88.9%和97.0%,多态信息量均为0.910%,数据表明这2套复合标记技术可以表达大白菜品种间的多态性,高效准确的对12份大白菜品种进行鉴定。 赵新 王永 兰青阔 陈锐 李欧静 余景会 朱珠 郭永泽关键词:大白菜 种子 津南芹菜EST-SSR指纹图谱的构建及遗传差异分析 被引量:8 2012年 以天津市津南11个芹菜育种材料为研究对象,利用EST-SSR分子标记技术构建津南芹菜分子指纹图谱,并用于遗传多样性分析。从GenBank数据库查询芹菜EST序列1122条,使用BatchPrimer3在线软件扫描分析获得194个候选EST-SSR位点,并设计141对SSR-PCR引物。选择其中47对引物进行多态性分析,确认8对引物具有多态性。构建基于Excel格式的津南芹菜EST-SSR指纹图谱,包括8对引物在供试材料中扩增到的44条多态性条带信息。遗传多样性分析显示,供试材料间遗传相似系数介于0.409~0.864之间,平均为0.664。本研究建立的津南芹菜EST-SSR指纹图谱稳定有效,可用于芹菜种质资源鉴定和品种真实性检测。 兰青阔 李欧静 张继波 赵新 朱珠 陈锐 徐石勇 王永 郭永泽关键词:芹菜 SSR标记 指纹图谱 基于复合EST-SSR标记的大白菜种子纯度鉴定及SNP位点获取 被引量:9 2013年 以10份大白菜杂交种及其亲本为研究对象,基于NCBI基因组数据库中EST序列信息,应用SSR标记及高分辨率溶解曲线技术筛选出用于大白菜杂交种纯度鉴定的SNP位点及复合SSR位点,并根据高通量分子检测技术种子纯度鉴定的需要,对单粒种子育苗条件、单株植株提取状态、快速DNA提取方法、复合PCR体系的建立等关键技术进行了摸索及优化。结果显示:经过48h破壳状态的单粒种子,采用改良CTAB法可于3h内得到较高质量的DNA;同时经7d达到苗期状态的单株叶片,采用chexe-100法亦可于40min内完成DNA提取;筛选得到的SNP位点可对6份大白菜杂交种进行纯度鉴定,复合SSR位点可对10份大白菜杂交种进行纯度鉴定。 赵新 王永 兰青阔 贺长征 陈锐 李欧静 刘娜 朱珠 郭永泽关键词:大白菜 种子 纯度鉴定 SNP 基于SNP标记的种子纯度高效检测分析模型的建立 被引量:8 2012年 单核苷酸多态性(SNP)标记具有二态性等优点,可用于种子纯度鉴定。应用焦磷酸测序技术对黄瓜SNP位点CLA13(C/G)进行了分析。结果表明,该位点在16个黄瓜杂交种中多态信息量达0.556,处于高度多态,适于其中7个品种的纯度检测;为提高种子纯度鉴定效率,引入DNA Pooling技术,建立高效率的3Pooling SNP Pyrosequencing检测分析模型,并验证了分析模型的可行性。 李欧静 张桂华 兰青阔 王永 赵新 朱珠 陈锐 郭永泽关键词:SNP标记 种子纯度鉴定 基于InDel标记快速检测黄瓜津优38种子纯度 被引量:28 2011年 以黄瓜品种津优38中插入缺失(InDel)标记为研究对象,筛选获得能够区分津优38父本、母本及其杂交种的[TT]缺失位点;应用焦磷酸测序技术检测该位点,初步建立基于InDel标记的津优38种子纯度鉴定方法并检测8批种子样品。结果表明,应用焦磷酸测序技术检测[TT]缺失位点能明显区分出津优38父本、母本及杂交种;基于InDel标记的津优38种子纯度鉴定方法具有高准确性、高通量、操作简单、易于自动化等优点;8批种子样品平均种子纯度为97.08%,与SSR鉴定结果(95.83%)基本相符。 兰青阔 张桂华 王永 赵新 朱珠 杜胜利 程奕关键词:INDEL标记 黄瓜 种子纯度 基于EST-SSR标记的花椰菜种子品种鉴定 被引量:5 2014年 利用EST-SSR分子标记技术对13份市售花椰菜(Brassica oleracea L.var.botrytis)种子进行品种鉴定研究。通过对GenBank数据库上公布的花椰菜EST序列信息的分析,合成EST-SSR核心引物36对,其中20对可得到有效扩增,11对具有较高的多态性,并结合3对十字花科芸薹属EST-SSR引物对13份花椰菜的鉴定结果及扩增条带的相互位置差异进行分析,应用其中5对EST-SSR引物即可表达不同花椰菜品种间的多态性,高效准确地对13份市售花椰菜进行品种鉴定。 王永 刘娜 李梅 赵新 刘莉莉 兰青阔 王超楠 陈锐 朱珠 李欧静 郭永泽关键词:花椰菜 种子 EST-SSR 应用正交设计对大白菜纯度鉴定中EST-SSR反应体系的优化 被引量:1 2013年 以3份大白菜杂交种及其亲本为试验材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA,采用正交设计对Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA和Taq酶5因素4水平进行优化,结果表明,适用于大白菜纯度鉴定EST-SSR检测体系为:在10μL反应体系中包含3.0mmol·L-1MgCl2、400μmol·L-1dNTPs、0.20μmol·L-1SSR引物、4ng模板DNA和0.05UTaq酶。利用该优化的体系,对3份大白菜杂交种进行单株育苗试验,每份杂交种取单株140株进行纯度鉴定。结果显示,扩增带型清晰、稳定,纯度检测结果与田间试验结果基本吻合,可用于大白菜种子纯度分子标记的进一步研究。 赵新 贺长征 兰青阔 陈锐 齐志伟 李欧静 朱珠 王永 郭永泽关键词:大白菜 纯度鉴定 正交设计 EST-SSR