国家自然科学基金(81072739)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 肺岩宁方对ILK基因沉默后转染人肺癌A549细胞相关基因表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨整合素连接激酶(ILK)基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因表达的影响。方法:构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,随机分为阴性对照病毒感染细胞(NC)组、RNAi靶点病毒感染细胞(KD)组、10%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组、20%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组,以及阳性对照10%DDP干预的KD组,应用Real time-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因蛋白激酶B(Akt/PKB)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、转录因子-1(AP-1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与NC组比较,KD组GSK-3β、VEGF mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),cyclinD1、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Akt表达无变化,AP-1与β-catenin在mRNA水平表达升高(P<0.01)、蛋白水平表达则下降;与KD组比较,KD+10%肺岩宁含药血清和KD+10%DDP组具有下调VEGF、cyclinD1、MMP-9和β-catenin蛋白表达、上调GSK-3β蛋白表达,以及下调AP-1、cyclinD1 mRNA表达的作用(P<0.01);与KD组相比,KD+20%肺岩宁含药血清具有下调AP-1、cyclinD1和MMP-9蛋白表达的作用。结论:沉默ILK基因后可以明显降低GSK-3β、VEGF的表达,10%的中药肺岩宁方含药血清可能通过下调靶基因AP-1、cyclinD1、MMP-9、VEGF和β-catenin蛋白表达的作用而发挥其抗肿瘤的作用。
- 赵晓珍徐振晔周立娟王中奇吴继龚亚斌苏婉
- 关键词：肺岩宁方整合素连接激酶肺癌基因表达
- 肺岩宁对整合素连接激酶沉默后人肺癌A549细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2014年
- 目的在建立整合素连接激酶(ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,研究ILK基因沉默后对人肺腺癌细胞A549细胞生物学活性的影响及中药肺岩宁方对细胞活性的影响。方法构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,分为阴性对照病毒感染细胞组(NC组)、RNAi靶点病毒感染细胞组(KD组)、10%肺岩宁血清干预的NC组(NC+10%中药血清组)、10%肺岩宁血清干预的KD组(KD+10%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的NC组(NC+20%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的KD组(KD+20%中药血清组)及10%(10 mg/L)DDP干预的KD组(KD+10%DDP组)。MTT检测不同浓度的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,Transwell实验和克隆形成检测细胞的迁移和成瘤能力。结果①KD组与NC组相比,KD组细胞凋亡率上升(P<0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率明显降低(P<0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。②KD+10%中药含药血清组与NC+10%中药血清组相比,KD+10%中药血清组细胞凋亡率明显上升(P<0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率无显著性差异(P>0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。③KD+20%中药血清组与NC+20%中药血清相比,KD+20%中药血清细胞凋亡率下降(P<0.01),G2/M期细胞总数的百分比降低(P<0.01),转移率无显著性差异(P>0.05),克隆数目明显减少(P<0.05)。④KD+10%DDP组与NC+20%中药血清组相比,KD+10%DDP组细胞凋亡率上升(P<0.01),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P<0.01),转移率明显降低(P<0.01),克隆数目明显减少(P<0.01)。结论 ILK基因沉默后可以明显促进人肺腺癌细胞A549的凋亡,降低细胞迁移和成瘤能力,对细胞周期无调控作用;10%中药肺岩宁方含药血清有促进细胞凋亡及抑制细胞克隆形成的能力;20%中药含药血清可以抑制细胞克隆形成能力;10%DDP有促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和克隆形成的能力。
- 赵晓珍徐振晔周立娟王中奇吴继龚亚斌苏婉
- 关键词：肺岩宁
- ILK基因RNAi慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:进一步研究整合素连接激酶(ILK)的功能,构建ILK基因RNAi慢病毒载体,并对其在肺腺癌A549细胞株中干扰效率进行鉴定。方法:针对ILK基因RNAi有效靶序列,合成4对oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切的质粒pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,用shILKi-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度。获得重组慢病毒后感染人肺癌A549细胞,荧光显微镜观察GFP及Real-time PCR检测ILK在A549细胞中的表达。结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了ILK-shRNA慢病毒载体shILKi-LV。包装并浓缩慢病毒,滴度分别为6×108、6×108、5×108和4×108 pfu/mL;将病毒感染A549细胞,荧光显微镜下观察80%细胞表达绿色荧光,Real-time PCR检测ILK mRNA表达明显下降,其中染shILKi-KD-1的A549细胞中ILK2-ΔΔCt值为0.058,shILKi-KD-2、3和4的ILK2-ΔΔCt值分别为0.162、0.072和0.119,尤以ILKsiRNA-1抑制最明显。结论:成功构建shILKi-LV病毒载体并建立了A549-shILKi细胞模型,为ILK在肺癌信号转导通路中的研究提供了工作基础。
- 赵晓珍徐振晔许玲王中奇龚亚斌周立娟
- 关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶慢病毒感染肺肿瘤
