上海市卫生局青年科研基金(2008Y002)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 相关作者：刘特高泳涛刘志学程蔚蔚王慧更多>>
- 相关机构：中国福利会国际和平妇幼保健院同济大学上海市嘉定区中医医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局青年科研基金上海市基础研究重大（重点）项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诱导子宫内膜癌细胞DNA错配修复及肿瘤增殖抑制基因启动子CpG岛去甲基化修饰的研究
- 2009年
- 目的:研究在用5-杂氮-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导体外培养的人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2及细胞周期调控基因p16启动子CpG岛的去甲基化,及对于该细胞的增殖抑制作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A;利用MTT比色法检测5-Aza-CdR对于HEC-1-A的增殖抑制的影响;利用流式细胞术(FCM)分析药物处理前后HEC-1-A的细胞周期;利用重亚硫酸盐处理及甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测hMLH1、hMSH2及p16基因启动子CpG岛的甲基化修饰;提取药物处理前后HEC-1-A细胞的总蛋白,利用Westernblotting检测hMLH1、hMSH2及p16蛋白的表达情况。结果:5-Aza-CdR对于人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(0.71±0.05)μmol.L-1];FCM分析显示HEC-1-A细胞在5-Aza-CdR处理前后均呈现明显的细胞周期差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期(P<0.05)阻滞。MS-PCR分析5-Aza-CdR显示著诱导hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛的去甲基化修饰。Western blotting检测发现IC50剂量的5-Aza-CdR处理HEC-1-A细胞前后,hMLH1、hMSH2及p16的表达量为(111.30±3.17)%、(76.99±1.19)%和(97.63±1.28)%明显高于空白对照组(P<0.05),提示该药物有提高上述蛋白表达的作用。结论:5-Aza-CdR可诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,hMLH1、hMSH2及p16启动子CpG岛的去甲基化修饰,从而有效抑制该细胞的体外增殖。
- 高泳涛刘特孙晓溪
- 关键词：子宫内膜癌DNA错配修复基因甲基化修饰
- siRNA诱导EZH2基因增强子的表观沉默及其对人前列腺癌细胞的增殖抑制被引量：2
- 2009年
- 目的通过小分子RNA(siRNA)介导靶基因沉默技术,干扰前列腺癌细胞中果蝇zeste基因增强子的人类同源物的表达,以探讨靶向EZH2基因的RNAi对前列腺癌细胞增殖抑制的效应。方法设计靶向EZH2基因的RNA干扰(RNAi)载体,构建重组表达质粒并且转染人前列腺癌细胞22RV1。利用MTT比色法检测靶向沉默EZH2表达对于22RV1的增殖抑制的影响;利用qRealtime-PCR鉴定转染组与空白组细胞中EZH2基因mRNA的表达量;提取各组细胞的总蛋白,利用Western Blotting检测EZH2蛋白的表达情况。结果在转染了靶向EZH2基因siRNA的细胞株中,可以检测到EZH2表达呈明显的下调趋势;而在空白对照组中其表达很稳定。另外,诱导EZH2基因沉默可以抑制该前列腺肿瘤细胞的增殖和生长。上述结果在各组细胞间呈现明显的统计学差异(P<0.05)。结论siRNA诱导的RNAi可以有效的抑制其靶基因EZH2的表达,同时可以抑制前列腺癌细胞的增殖和生长,是一种潜在的基因治疗新方法。
- 赵雅瑞罗诚祖黄文彬刘特
- 关键词：小分子RNA前列腺癌增殖抑制
- microRNA-101诱导zeste基因增强子的表达沉默及其对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制
- 2011年
- 目的:研究外源性microRNA-101前体在人脑胶质瘤SHG44细胞中的表达,及其对靶基因EZH2的沉默机制及调控宿主细胞的增殖抑制作用。方法:构建真核表达载体pRNAT-CMV3.2-mir101;利用脂质体转染法将空白质粒及重组子pRNAT-CMV3.2-mir101转染至SHG44细胞;检测microRNA-101的表达对于SHG44的增殖抑制的影响。结果:pRNAT-CMV3.2-mir101转染组细胞中mature microRNA-101呈高水平表达,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组SHG44细胞中的EZH2蛋白表达量显著低于对照组的表达量,两者具有显著的统计学差异。利用上调microRNA-101的表达,可以引起人脑胶质瘤细胞在体外培养过程中的增殖抑制。结论:microRNA-101可以有效的沉默宿主细胞SHG44中靶基因EZH2的表达,并且诱导该细胞在体外培养过程中的增殖抑制。
- 琚雄飞方巧云刘特
- 关键词：微RNAS人脑胶质瘤增殖抑制
- MicroRNA-101真核表达载体的构建及其在人胎盘绒毛癌中的表达被引量：3
- 2010年
- 目的:研究外源性microRNA-101前体的真核表达载体构建方法和其在人胎盘绒毛癌细胞JAR中的表达,及其对靶基因EZH2的沉默作用。方法:利用化学合成法合成microRNA-101前体分子(pre-microRNA-101)并克隆至真核表达载体pR-NAT-CMV3.2/Neo。通过酶切及测序法验证该阳性重组质粒pRNAT-CMV3.2-mir101的正确性。体外培养人胎盘绒毛癌细胞JAR;利用脂质体转染法将空白质粒及重组子pRNAT-CMV3.2-mir101转染至JAR细胞。应用Northern blotting检测各组细胞之间成熟microRNA-101(mature microRNA-101)的表达情况;应用Western blotting检测各组细胞中JAR的表达情况。结果:质粒酶切及测序结果显示pRNAT-CMV3.2-mir101上的microRNA-101与合成的pre-microRNA-101寡核苷酸序列完全一致,无碱基的突变和缺失。Northern blotting结果显示,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组细胞的总RNA中含有mi-croRNA-101阳性条带,说明该细胞中mature microRNA-101呈高水平表达。Western blotting结果表明,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组JAR细胞中的EZH2蛋白表达量(52.76±3.12)%低于对照组(81.18±2.96)%,两者具有显著差异(P<0.05)。结论:通过构建真核细胞表达质粒可以高效表达外源性microRNA分子;microRNA-101可以有效地沉默宿主细胞JAR中靶基因EZH2的表达。
- 李敏刘志学刘特程蔚蔚高泳涛王慧
- 关键词：小分子RNA表观遗传学
