国家自然科学基金(30360039)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：海南医学院山西医科大学海南医学院附属医院更多>>
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- 小鼠单个卵母细胞中18S rRNA基因表达研究
- 2007年
- 目的:探讨小鼠卵母细胞发育成熟与18S rRNA基因表达的关系。方法:根据Genbank中公布的小鼠18S rRNA保守区序列(363bp),用DNAclub软件设计两对特异性引物,RT-PCR检测单个GV、MⅠ期卵母细胞18S rRNA的表达;取单个MⅠ期卵母细胞二次PCR产物连接至pTG19-T载体、转化大肠杆菌感受态细胞,取阳性克隆进行测序。结果:RT-PCR检测显示18S rRNA基因在小鼠单个GV期、MⅠ期卵母细胞中均有表达,且在未成熟卵母细胞中,MⅠ期的表达明显强于GV期的表达。测序结果表明小鼠单个卵母细胞表达的18S rRNA基因与参考序列(Genbank NR_003278)完全一致。结论:小鼠MⅠ期之后的卵母细胞发育需要蛋白质的合成,卵母细胞的成熟可能与核糖体18S基因表达有关。
- 宋绪华洪灯景雅符史干
- 关键词：RRNA卵母细胞小鼠
- 小鼠线粒体ATP8基因RNA干扰载体构建被引量：1
- 2007年
- 目的:构建ATP合成酶亚基8(ATP8)基因的RNA干扰载体。方法:应用小干扰RNA(smallinterference RNA,siRNA)法表达构建ATP8的RNA干扰载体,重组质粒经BamHI和EcoRI酶切鉴定;选择其中单个克隆进行单向测序鉴定。结果:重组质粒DNA能被BamHI切开而不能被EcoRI酶切,所提质粒为阳性重组载体;测序鉴定结果与设计的shRNA完全一致。结论:成功构建了pG-PH1/GFP/Neo-mouse-shATP8 RNA干扰质粒,为下一步进行ATP8基因RNA干扰在卵母细胞发育成熟中的作用奠定基础。
- 洪灯宋绪华符史干景雅
- 关键词：线粒体基因小鼠
- 小鼠单个GV期卵母细胞中ATP8基因的表达分析被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP8(ATP合酶亚基8)基因的表达情况。方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞;用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达:其中cDNA的合成分两种方法进行:一是将GV期单个卵母细胞直接进行RT合成cDNA,二是先用DNA酶加EcoRⅠ酶祛除mtDNA和核DNA后再进行RT;回收产物构建克隆质粒并测序。结果:1.5%琼脂糖电泳显示、测序结果均表明ATP8基因在GV期卵母细胞中有表达。结论:小鼠GV期卵母细胞特异表达的ATP8基因可能与卵母细胞的正常发育成熟相关。
- 洪灯宋绪华符史干景雅
- 关键词：小鼠卵母细胞
- 18S rRNA基因siRNA表达质粒的构建和鉴定
- 2006年
- 目的:构建和鉴定水牛18SrRNA干扰真核表达载体,为进一步研究18SrRNA功能奠定基础。方法:人工设计合成水牛18SrRNA-sh565干扰序列,经基因重组定向克隆插入到真核表达载体pGPH1/GFP/Neo,随机挑选2个克隆菌提取质粒并进行酶切和测序鉴定。结果:质粒酶切和测序结果显示,siRNA寡核苷酸按正确方向和序列插入质粒。结论:成功构建pGPH1/GFP/Neo-buffalo-18S rRNA-sh565干扰表达质粒。
- 王维钱建新董克家
- 关键词：RNA干扰RRNA真核细胞质粒水牛
