国家杰出青年科学基金(30325036)
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：四川大学华西医院四川大学四川省感染性疾病分子生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒X蛋白在HBV复制中作用的研究进展
- 2008年
- 王月宾唐红
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白HBV复制嗜肝DNA病毒公共卫生问题机体免疫反应肝脏细胞
- 肝纤维化发生机制的研究进展被引量：7
- 2006年
- 龙云唐红
- 关键词：肝纤维化成肌纤维细胞慢性肝损伤代偿反应
- 肝脏特异性转录调控序列的研究进展被引量：1
- 2009年
- 基因治疗是近年迅速发展的一种治疗方式,目前制约基因治疗发展的一个主要问题是其安全性和有效性难以保证,即不能达到治疗基因表达的空间、时序和表达水平的精确定位,特别是治疗基因表达的选择性不高,在非靶组织/细胞表达易产生毒副作用,并降低疗效。通过组织/细胞特异性转录调控元件使外源基因准确、有效地表达于特定组织细胞,从而提高基因治疗的有效性和安全性,已成为基因治疗领域的研究热点。目前研究表明,肝组织中的白蛋白基因和甲胎蛋白基因里有肝脏特异性转录调控序列如启动子、增强子,能启动基因仅在肝组织表达,故它们在转基因动物和基因治疗中得到广泛应用,且其联合应用对提高肝脏的特异性和转录活性有一定作用,在基因治疗研究中也得到了很好的应用,为病毒性肝炎、遗传代谢疾病、肿瘤性疾病等与肝脏密切相关疾病的致病机制和基因治疗的研究奠定了基础。本文就肝脏特异性转录调控序列的研究进展进行综述。
- 王亚莉唐红雷秉钧
- 关键词：基因治疗
- 乙型肝炎病毒动物模型的研究现状被引量：6
- 2006年
- 讨论了目前乙肝病毒动物模型建立的基本原理和方法,同时比较了各种模型的用途与优缺点,为研究者选择合适的动物模型提供了依据。
- 刘凤君唐红
- 关键词：乙型肝炎病毒动物
- 核激素受体等对乙型肝炎病毒转录与复制的影响
- 2009年
- 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)在非肝源细胞复制体系,观察核激素受体等对HBV基因转录和复制的调控作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4.1与核激素受体HNF4、和RXRa/PPARa以及HNF3的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3;用Northern吸印杂交检测HBV 3.5 kb、2.4/2.1 kb、0.7 kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果复制型HBV重组质粒pHBV4.1在肝癌细胞中,能检测到3.5 kb HBV RNA转录产物和HBV DNA复制中间体;用pHBV4.1转染NIH3T3细胞后,在没有核激素受体表达质粒共转染时未能检出3.5 kb HBV RNA等转录产物,也无HBV DNA复制中间体;当用核激素受体HNF4和RXRa/PPARa共转染时,能够激活3.5 kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF3未能激活HBV复制,但在核激素受体HNF4或RXRα/PPARα介导的病毒复制体系中,同时共转染HNF3时,均可见3.5 kb HBV mRNA的转录和HBV DNA复制水平下降。结论利用核激素受体等成功地建立HBV在非肝源细胞中的转录与复制,且显示HNF4和RXRa/PPARa可支持HBV在非肝源细胞中转录与复制;HNF3抑制HBV肝特异性基因转录与复制。
- 陈群王甦刘凤君唐红赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒核激素受体
- 肝细胞核因子3结合位点的突变及对抑制乙型肝炎病毒复制的影响被引量：3
- 2008年
- 目的研究肝细胞核因子（HNF）3结合位点HNF3β对HBV转录和复制调节作用的机制。方法通过分别位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1P和Sp区上的HNF3结合位点，构建HBV基因组2个或3个位点的复合突变，获得4个复合突变型重组质粒；分别转染非肝源性细胞小鼠成纤维细胞株（NIH3T3），Northern印迹法检测3．5kb、2．4kb／2．1kb、0．7kbHBVRNA的转录水平，Southern印迹法检测HBVDNA复制中间体水平．观察上述突变是否会影响HNF313对HBV转录和复制的抑制作用。结果在被转染的非肝源性细胞3T3中，HNF313仍能降低4个复合突变型HBV重组质粒3．5kbHBVRNA的转录水平，抑制HBVDNA的复制；与未共转染HNF3B相比，转录水平下降50％～75％、复制水平下降80％～96％。结论在位于HBV基因组的多聚酶编码区Pp、PS1p和Sp区上的3个HNF3结合位点中，即使其中2个或3个结合位点同时联合突变，HNF313仍能抑制HBV的转录和复制。Pp、PS1p和Sp区HNF3结合位点的突变不能阻断HNF313对HBV复制的抑制作用。
- 王甦唐红赵连三周陶友何芳刘丽刘凤君邓兰
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒复制
- 利用高压注射体内转染法实现HBsAg在小鼠肝脏中的高效表达被引量：4
- 2005年
- 目的:观察能否应用高压注射体内转染法实现外源DNA在肝脏中高效表达,为嗜肝病毒分子生物学研究奠定方法学基础。方法:将大容量乙肝病毒表面抗原表达质粒pVAX1/SDNA溶液,通过尾静脉快速注射入小鼠体内,用免疫组化检测小鼠心、肺、肝、脾、肾组织中HBsAg的表达情况。结果:经小鼠尾静脉高压注射pVAX1/S质粒DNA后,HBsAg主要在肝脏表达;且高压注射组明显强于缓慢注射组;高压注射5μgpVAX1/S质粒DNA后8小时,在肝脏观察到较强的HBsAg表达。结论:通过尾静脉高压注射,能实现HBsAg主要在肝脏高效表达。
- 刘凤君刘聪邓麟宇周陶友刘丽唐红
- 关键词：转染免疫组化
- 肝富集转录因子在HBV基因转录与复制中的作用研究被引量：1
- 2006年
- 目的观察各种肝富集转录因子对乙型肝炎病毒(HBV)基因转录和病毒复制水平的影响,探讨其在HBV嗜肝性机理中的作用。方法用复制型HBV重组质粒PHBV4.1与肝富集转录因子HNF1、HNF3、HNF4、HNF6、C/EBP或RXRΑ/PPARΑ的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3、HELA、293T、SW1353、CV-1和COS1。用NORTHERN吸印杂交检测HBV3.5KB、2.4/2.1KB、0.7KB MRNA的转录情况,SOUTHERN吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果用PHBV4.1转染NIH3T3细胞后,在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3.5KB HBV RNA转录,也无HBV DNA复制;当用肝富集转录因子共转染时,HNF4和RXRΑ/PPARΑ的表达能够激活3.5KB HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF1、HNF3、HNF6和C/EBP未能激活HBV复制。在HELA、293T、SW1353、CV-1和COS1细胞中,HNF4、RXRΑ/PPARΑ对HBV的转录和复制也具激活作用。进一步用突变型HBV重组质粒研究发现,C启动子HNF4结合位点的突变明显减弱了HNF4和RXRΑ/PPARΑ对HBV复制的激活作用。结论肝富集转录因子HNF4和RXRΑ/PPARΑ可支持HBV在非肝源细胞中的转录与复制;肝特异性基因转录是HBV嗜肝性的决定因素之一。
- 王松唐红何芳刘丽黄飞骏周陶友赵连三
- 关键词：乙型肝炎病毒转录嗜肝性
- 复制型HBV重组腺病毒的制备被引量：2
- 2008年
- 目的 通过细菌体内同源重组方法，构建含1．3拷贝HBV DNA片段（HBV4．1）的HBV复制型重组腺病毒。方法从质粒pTh—HBV4．1上获取HBV4．1片段，插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack—CMV中，构建含HBV4．1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV／HBV4．1。然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy—1进行同源重组。形成重组腺病毒质粒pAd—GFP／HBV4．1，经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增，获得腺病毒Ad-GFP／HBV4．1。通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达，检测腺病毒滴度和感染效率；采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在。结果经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack—CMV／HBV4．1扣重组腺病毒基因组质粒pad—GFP／HBV4．1构建成功；GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP／HBV4．1已成功包装；PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBVDNA片段。在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达（4．2—4．8）×10^7 efu／ml；当MOI为100时，感染HEK293细胞的效率〉90％。结论成功构建了携带1．3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP／HBV4．1，为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究奠定了基础。
- 尹华周陶友李红王月宾韩红霞唐红
- 关键词：腺病毒乙肝病毒同源重组
- 基因治疗中肝靶向研究的进展
- 2008年
- 王亚莉雷秉钧唐红
- 关键词：基因治疗肝靶向DNA重组技术肝脏体积转基因方法翻译后修饰
