四川省自然科学基金(2002A071)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：杨健张仁刚敬保迁陈大斌任碧轩更多>>
- 相关机构：川北医学院更多>>
- 发文基金：四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi抑制胰腺癌细胞survivin表达的实验研究
- 2008年
- 目的用RNA i方法抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。方法用免疫细胞化学技术和RT-PCR检测胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达,构建针对survivin基因的siRNA表达载体并进行酶切和测序鉴定,用脂质体转染胰腺癌细胞PANC-1,RT-PCR初步分析siRNA表达载体对survivin表达的抑制作用。结果survivin在胰腺癌细胞PANC-1中有较高表达,siRNA表达载体可以有效的抑制survivin的表达,抑制率达60%。结论用RNAi表达载体可以有效抑制胰腺癌细胞PANC-1中凋亡抑制蛋白survivin的表达。
- 杨健张仁刚陈大斌任碧轩敬保迁
- 关键词：RNAI胰腺癌SURVIVIN
- 人生存素基因的克隆、表达与抗血清制备被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达重组人生存素,制备其抗血清并检测其免疫识别活性。方法用RT-PCR方法从培养的人白血病细胞株HL-60中克隆人生存素cDNA,克隆到原核表达载体pET32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,目的蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫小鼠制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价,Western blot和免疫细胞化学法鉴定抗血清的特异性。结果所克隆生存素cDNA序列与Genbank中序列完全一致,将其读码框插入原核表达载体pET32a(+)诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证实重组蛋白为分子量约37KD的融合蛋白,表达量占总菌体的30%,纯化后融合蛋白的纯度为95%,所制备的鼠抗血清的效价达1:1600,Western blotting证实其有较好的特异性,可以检测肿瘤细胞生存素的表达。结论我们已克隆并表达了人生存素基因,所制备的抗人生存素血清可用于相关肿瘤检测。
- 杨健张仁刚敬保迁
- 关键词：生存素抗血清融合蛋白
- 重组人生存素单体分子与双体分子的原核表达研究
- 2008年
- 目的重组并高效表达人生存素单体分子和双体分子。方法PCR扩增人生存素基因,将其单一读码框和双读码框重组到原核表达质粒载体pKpL5的表达框内,限制性内切酶分析后,于42℃诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达结果。结果经限制性核酸内切酶分析,表达重组人生存素单体分子质粒pKpL5-sSURVIVIN和表达人生存素同源双体分子质粒pKpL5-dSURVIVIN均正确构建,可高效表达分子量约18.5KDa的人生存素单体分子与分子量约35KDa的同源双体分子,所表达的目的蛋白可被抗人生存素的多克隆抗体特异性识别。结论该研究成功高效表达人生存素单体分子与同源双体分子,为进一步研究其生物活性与免疫原性奠定了物质基础。
- 杨健张仁刚敬保迁
- 关键词：生存素原核表达
