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肝癌特异性血管抑制疗法的真核表达载体的构建及其表达: 2007年; 目的构建受甲胎蛋白(AFP)增强子和白蛋白(Alb)启动子调控的含有血管抑制素(angiostatin)K5序列的真核表达载体,通过基因转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞,观察angiostatinK5的表达。方法用RT-PCR法从正常人真核细胞扩增出angiostatinK5基因,将AFP增强子和Alb启动子调控序列定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并将angiostatinK5cDNA置于上述调控序列之下,从而构建得到重组真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His。利用细胞培养、脂质体介导的细胞转染,将angiostatinK5基因导入肝癌细胞。利用SDS-PAGE和Westernblot法检测肝癌细胞中angiostatinK5的表达。结果通过酶切鉴定及DNA测序证实目的真核表达载体pcDNA3.1-AFAB-angiostatinK5-His与预期的结果相同。SDS-PAGE及Westernblot分析证明,angiostatinK5在肝癌细胞中得以表达。结论构建的肝癌特异性重组真核表达载体可增加对AFP阳性肝癌细胞的治疗的特异性,并用于实现对肝癌的特异性血管抑制作用。; 徐宏勇徐立高建宏李开宗窦科峰; 关键词：肝细胞癌血管抑制素

肝癌自发性破裂的外科诊治被引量：5: 2008年; 目的:对肝癌自发性破裂出血的临床表现、发病机理及治疗方法进行探讨。方法:对63例肝癌自发性破裂患者进行回顾性分析。结果:该组肝癌自发性破裂出血患者中,手术治疗47例,选择性肝动脉栓塞9例,保守治疗7例;4例死于失血性休克,3例于术后死于肝肾功能衰竭,其余患者均经相应的保守治疗或手术治疗和围手术期处理后出血得以控制。结论:准确的诊断、积极有效的围手术期处理与正确的术中处理或有效的保守治疗是肝癌自发性破裂出血治疗的重要措施。; 杨雁灵徐小平吴国强高志清窦科峰; 关键词：肝癌破裂出血

肿瘤相关糖蛋白-72特异性T细胞活化融合基因的分子克隆被引量：3: 2003年; 目的克隆正常人T细胞CD3ξ胞内区、跨膜区基因,将其与肿瘤相关抗原肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)特异性单链抗体基因克隆入真核表达载体。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从正常人外周血T细胞扩增出CD3ξ胞内区、跨膜区基因;应用PCR法扩增抗TAG-72特异性单链抗体(scFv)基因;将该单链抗体与CD3ξ基因顺序克隆构建重组真核表达载体scFv-CD3ξ-pcDNA3.0并测序。结果抗TAG-72 scFv cDNA片段为729 bp,与已知的序列相符;CD3ξ胞内区、跨膜区的cDNA片段为306 bp,与Gene Bank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。结论成功构建了含抗肿瘤相关抗原TAG-72scFv及CD3ξ胞内区、跨膜区序列的重组表达载体scFv-CD3ξ-pcDNA3.0,为制备消化道肿瘤靶向性嵌合锚定T细胞奠定了实验基础。; 徐宏勇徐立李开宗窦科峰刘彦仿Hinrich Abken; 关键词：特异性T细胞融合基因分子克隆消化道肿瘤

胃肠道肿瘤靶向抗癌胚抗原单链抗体与T细胞表面受体基因的融合分子构建被引量：9: 2004年; 目的　将胃肠道癌胚抗原 (CEA)特异性单链抗体基因与人T细胞CD3ζ胞内区、跨膜区基因克隆入真核表达载体 ,表达相应的融合分子 ,以期制备消化道肿瘤靶向性杀伤T细胞。方法　应用PCR法扩增抗CEA特异性单链抗体 (scFv)基因 ;用RT PCR法从正常人外周血T细胞扩增出CD3ζ胞内区、跨膜区基因 ;将单链抗体插入CD3ζ基因序列的上游 ,构建重组真核表达载体scFv CD3ζ pcDNA3.0并测序。结果　抗CEAscFvcDNA片段为 810bp ,与已知的序列相符 ;CD3ζ胞内区、跨膜区的cD NA片段为 4 38bp ,与基因库公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。结论　成功制备了具有抗肿瘤相关抗原CEA靶向性及CD3ζ胞内区、跨膜区信号转导功能的重组分子。; 徐立徐宏勇樊代明; 关键词：胃肠道肿瘤癌胚抗原单链抗体免疫疗法

靶向性肿瘤相关抗原TAG-72的scFv-CD28融合基因的真核表达载体的构建被引量：5: 2002年; 目的　构建含抗肿瘤相关抗原TAG 72单链抗体及CD2 8胞内区及跨膜区融合基因的哺乳细胞表达载体 ,为制备消化道肿瘤靶向性嵌合锚定T细胞 ,并探讨其对消化道肿瘤的杀伤活性。方法　应用PCR法 ,将抗TAG 72单链抗体 (singlechainvariablefragment ,scFv)克隆入哺乳细胞表达载体pcDNA3 .0 ,在 5′端及 3′端分别引入相应酶切位点 ;用RT PCR法从正常人外周血T细胞克隆CD2 8胞内区及跨膜区的cDNA ,然后将其克隆于scFv的下游 ,并在 5′端及 3′端引入相应的酶切位点。结果　抗TAG 72scFvcDNA片段为 72 9bp ,与已知的序列相符 ;CD2 8胞内区及跨膜区的cDNA片段为 2 40bp ,与Genebank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳测序加以证实。结论　完成了抗肿瘤相关抗原TAG 72scFv及CD2 8胞内区及跨膜区融合基因scFv CD2 8 pcDNA3 .0的构建 ,为制备消化道肿瘤靶向性嵌合锚定T细胞奠定了实验基础。; 徐宏勇徐立李开宗窦科峰付由池刘彦仿; 关键词：共刺激信号 CD28分子

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陕西省自然科学基金(2001SM38)