山东省自然科学基金(Y2008D55)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：姜亦飞黄兵于可响林树乾马秀丽更多>>
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- 1型鸭肝炎病毒CL株感染性分子克隆的构建被引量：3
- 2009年
- 【目的】构建1型鸭肝炎病毒(DHV)的感染性克隆,用于研究其基因组的结构与功能。【方法】用RT-PCR方法扩增出覆盖整个1型鸭肝炎病毒CL株基因组3个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆(BR-CL)。将BR-CL在体外转录出的RNA转染鸭胚肾细胞,并传至第6代,利用RT-PCR方法和间接免疫荧光试验进行鉴定。将获得的子代病毒(CL-R)在SPF鸡胚上传代,观察鸡胚死亡及胚体病变情况。通过胶体金免疫电镜观察子代病毒粒子的形态。【结果】RT-PCR、间接免疫荧光和胶体金免疫电镜均检测到了子代病毒。通过感染SPF鸡胚试验发现,子代病毒能致死鸡胚。【结论】本研究成功构建出具有感染性的DHV全长cDNA克隆,这在国内外还是首次报道,为进一步揭示DHV基因组的结构和功能提供了良好的技术平台。
- 于可响马秀丽李玉峰吴静林树乾姜亦飞黄兵
- 关键词：全长CDNA克隆
- 1型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建
- 2011年
- 参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的MluⅠ线性化位点均成功引入。
- 于可响沙明利林树乾姜亦飞黄兵
- 关键词：全长CDNA克隆
