国家自然科学基金(u0632003)
- 作品数：10 被引量：35H指数：4
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- 广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析被引量：1
- 2010年
- 目的克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景。方法利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性。结果该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基。成功构建了重组质粒且目的基因在E.coliBL21中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白。融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景。
- 岳永亮于彦杰杨潇程梅何蔼曲振宇刘静王琳李卓雅詹希美
- 关键词：广州管圆线虫生物信息学原核表达免疫诊断
- 中国不同品系福寿螺主要形态比较被引量：11
- 2011年
- 目的描述我国广州地区福寿螺的形态差异,期望为广州管圆线虫病防治的研究及福寿螺蔓延控制的研究提供证据。方法对广州地区黑色福寿螺、黄色福寿螺、灰色福寿螺的螺壳、软体部、呼吸管、足、齿舌进行观察,描述三类福寿螺的形态学差异。结果对三类福寿螺的足及呼吸管进行HE染色分析,显示软体部颜色不同的原因主要是黑色颗粒的有无和沉积数量的多少。对福寿螺齿舌的观察显示,灰色福寿螺第一、第二突起与中央齿宽的比值明显大于黑色福寿螺和黄色福寿螺;在扫描电镜下,三类福寿螺的齿舌未见明显不同。结论我国广州地区的福寿螺存在三种变异。
- 孙志坚曾清香张波彭东觉曲振宇杨潇詹希美吴瑜
- 关键词：福寿螺软体部齿舌
- 弓形虫MIC6羧基端相互作用蛋白的筛选被引量：9
- 2011年
- 目的筛选与弓形虫微线体蛋白6羧基端(MIC6C)相互作用的蛋白。方法以GST-MIC6C蛋白作为探针蛋白,利用GST pull-down技术,从弓形虫裂解液中筛选与其相互作用的蛋白,SDS-PAGE分析实验产物;将目标蛋白条带转印至PVDF膜,测蛋白序列,BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白。制备目标蛋白的抗体,Western blot分析GST pull-down实验产物。结果 GST pull-down实验筛选到的目标蛋白的序列与弓形虫醛缩酶的序列一致;制备了醛缩酶的多克隆抗体,目标蛋白条带能被该抗体特异地识别。结论采用GST pull-down技术,初步筛选出与弓形虫MIC6C相互作用的蛋白为醛缩酶。
- 郑斌尹志奎何蔼詹希美
- 关键词：刚地弓形虫醛缩酶
- 重组刚地弓形虫MIC8 CTD蛋白及其多克隆抗体的制备被引量：5
- 2011年
- 目的制备弓形虫微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8 CTD)重组蛋白及其多克隆抗体。方法以弓形虫基因组为模板,PCR扩增MIC8 CTD基因片段,构建MIC8 CTD/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC8CTD融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的特异性及效价。结果构建了MIC8 CTD原核表达系统,表达并纯化了GST-MIC8 CTD融合蛋白;获得了抗该蛋白的兔源性抗血清,纯化后的多克隆抗体能特异识别MIC8 CTD,ELISA测定抗体效价为1∶8 000。结论制备的GST-MIC8 CTD融合蛋白具有免疫原性,用该抗原免疫动物可获得高效价的多克隆抗体。
- 郑斌尹志奎何蔼詹希美
- 关键词：刚地弓形虫多克隆抗体
- 不同水温下不同时间对福寿螺体内广州管圆线虫的杀灭作用被引量：1
- 2009年
- 目的观察不同水温下不同作用时间福寿螺体内广州管圆线虫死亡率的变化规律,为福寿螺的加工提供参考。方法将感染广州管圆线虫的福寿螺随机分为4组,记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。Ⅰ组5只,作为阴性对照;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组再分别分为4小组,分别为Ⅱ30、Ⅱ60、Ⅱ90、Ⅱ120,Ⅲ30、Ⅲ60、Ⅲ90、Ⅲ120,Ⅳ10、Ⅳ30、Ⅳ45、Ⅳ60,每小组5只。Ⅱ、Ⅲ组各小组分别在80±1℃、90±1℃的水中煮30s、60s、90s、120s,Ⅳ组各小组分别在100±1℃沸水中煮10s、30s、45s、60s。将所有螺壳消化后,观察福寿螺体内广州管圆线虫的死亡情况。结果80℃、90℃、100℃时福寿螺体内广州管圆线虫死亡率达100%的最短时间分别为90s、90s、45s。运用Spearman等级相关,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组作用时间与加权平均死亡率(WM)呈显著正相关(P<0.01)。运用3次模型分析Ⅱ、Ⅲ组作用时间与WM的曲线方程分别为Y=0.274+0.016x+2.01E-007x3(R=1,P<0.05);Y=0.274+0.016x-9.46E-005x2+1.30E-007x3(R=1,P<0.05)。显微镜下观察高温作用后的广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫(L3)结构破坏严重。结论温度相同时,L3死亡率与时间呈正相关;作用时间过短,80℃、90℃<1 min,100℃<30s,不能将L3全部杀死。
- 彭东觉张波孙志坚曲振宇贺华良杨潇岳永亮詹希美
- 关键词：福寿螺广州管圆线虫L3水温
- 广州管圆线虫感染福寿螺模型的建立被引量：2
- 2009年
- 目的建立具有足够感染度的感染有广州管圆线虫的福寿螺模型。方法将福寿螺随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,每组16只。分别用每只螺0条、1500条、2500条、3500条一期幼虫感染福寿螺。感染24h后以相同感染数量相同时间重复感染一次。35～40d后,使用酶消化法查找三期幼虫,观察螺的死亡率、感染率、感染度等指标。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组死亡率分别为0、31.25%、31.25%、62.5%;Ⅰ组各螺无三期幼虫感染,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组感染率均为100%;感染度Ⅲ组和Ⅳ组明显高于Ⅱ组(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组之间感染度差异无统计学意义(P>0.05)。结论无广州管圆线虫感染时,Ⅰ组螺可正常生存,无死亡;Ⅱ组螺死亡率较低,但感染度亦不高;Ⅳ组螺感染度较高死亡率亦高;Ⅲ组福寿螺死亡率较低、感染度较高、感染虫数较均衡,最适宜作为模型。
- 孙志坚彭东觉贺华良何蔼杨潇曲振宇詹希美
- 关键词：广州管圆线虫福寿螺
- 中国南方不同品系福寿螺对广州管圆线虫易感性的研究被引量：5
- 2011年
- 目的本实验室前期的研究根据福寿螺外壳及软组织特点将其分为3类:黑色福寿螺、黄色福寿螺、灰色福寿螺。本实验通过对三类福寿螺对广州管圆线虫易感性进行研究,期望为广州管圆线虫病的防治提供证据。分别使用低剂量(1000条L1/只)和高剂量(4000条L1/只)的广州管圆线虫感染三类福寿螺以观察其易感性,结果发现高剂量感染组中,黄色福寿螺感染率低于灰色福寿螺(P<0.05)。黄色福寿螺对广州管圆线虫的易感性相对较低,这可能是黄色福寿螺在中国多个省份占优势的一个原因。
- 曾清香孙志坚张波彭东觉曲振宇杨萧吴忠道詹希美何蔼
- 关键词：福寿螺广州管圆线虫易感性
- 广州市广州管圆线虫中间宿主感染调查被引量：4
- 2012年
- 目的了解广州市广州管圆线虫中间宿主的感染情况。方法采用人工消化法消化从广州市东、西、南、北、中各区收集的褐云玛瑙螺、福寿螺、中华圆田螺和同型巴蜗牛,对消化后的螺类材料中的广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫进行观察和计数。结果褐云玛瑙螺阳性率为13.27%(30/226),平均感染度为794条/只;同型巴蜗牛阳性率为2.86%(2/70),平均感染度为115条/只。161只福寿螺和189只中华圆田螺无阳性检出。结论广州市广州管圆线虫的自然疫源地中,褐云玛瑙螺占主导地位。不同区域褐云玛瑙螺的感染率差异较大。褐云玛瑙螺的感染度与其重量相关。
- 黄坤梁焯华杨潇詹希美张东京刘茜陈婧李卓雅
- 关键词：广州管圆线虫中间宿主流行病学调查
- 凋亡在寄生虫与宿主相互关系中的作用被引量：1
- 2010年
- 细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的哪过程.细胞凋亡普遍存在于低等到高等生物中,受着精密的调控.寄生虫感染宿主细胞后可诱导或抑制细胞凋亡,成为寄生虫致病机制以及免疫逃避方式之一.深入了解寄生虫与宿主相瓦关系中凋亡的作用及其信号通路,可进一步丰富寄生虫与宿主相互关系的理论体系,为研发新型抗寄生虫药物提供候选靶点,从而更好地控制寄生虫病.
- 杨潇詹希美
- 关键词：凋亡寄生虫宿主
- 生物信息学在寄生虫学中的应用
- 2009年
- 生物信息学是建立在生物学和信息科学基础上的一门新兴学科，基因组信息学、蛋白质的结构模拟以及药物设计是生物信息学的三个组成部分。随着基因组学的发展，寄生虫病的研究进入分子水平，形成了分子寄生虫学这一门新兴学科。随着寄生虫的基因和蛋白质数据的激增，生物信息学在寄生虫学研究中的重要性越来越突出了。
- 杨潇詹希美
- 关键词：生物信息学寄生虫学基因组蛋白质组
