国际科技合作与交流专项项目(2009DFA32620)
- 作品数：12 被引量：74H指数：6
- 相关作者：殷国俊曹丽萍贾睿杜金梁丁炜东更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南京农业大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 不同CpG-DNA序列对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)离体培养免疫细胞活性影响的研究被引量：1
- 2010年
- 采用Percoll密度离心等技术,对异育银鲫的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行离体培养,经人工合成的CpG-DNA序列作用后,测定其对头肾巨噬细胞的氧、氮呼吸爆发活性和对外周血白细胞增殖的影响,从CpG-DNA核心CG两端的侧翼序列(种属)、核心CG的数量和位置等方面观察CpG-DNA基序对异育银鲫免疫细胞活性的影响。结果表明:1670较1826和2006具有更显著的增强巨噬细胞的氧呼吸爆发活性和白细胞的增殖作用(P<0.05);1670-N与同浓度1670比较具有更强的提高白细胞的增殖能力;1670-D比同浓度的1670更能显著地促进白细胞增殖和巨噬细胞的氮呼吸爆发活性(P<0.05);1670-R对巨噬细胞氧、氮爆发活性及外周血白细胞的增殖无显著促进作用。结果证明了CpG-DNA可以通过促进巨噬细胞的氮氧爆发活性和增强外周血白细胞的增殖来提高机体的非特异性免疫功能,同时这种作用受到核心CG两端的侧翼序列、核心序列的位置数量及核心CG顺序的影响。
- 曹丽萍丁炜东张柳殷国俊
- 关键词：CPG-DNA
- 鱼类肝细胞分离、原代培养与应用研究综述被引量：9
- 2012年
- 鱼类肝细胞分离与原代培养技术已有30多年的历史,目前已有40多种鱼的肝细胞被分离、培养并用于各种研究中。主要讨论鱼类肝细胞的分离与培养方法以及不同条件对细胞生理的影响;概括鱼类肝细胞体外培养在生理学、环境毒理学和药理学等方面的应用研究,旨在为建立更多的鱼类肝细胞原代培养模型并应用于相关的研究领域提供参考依据。
- 贾睿曹丽萍丁炜东杜金梁徐跑殷国俊
- 关键词：鱼类肝细胞原代培养细胞分离
- 五味子提取物对用t-BHP损伤的异育银鲫原代肝细胞的影响被引量：7
- 2011年
- 以叔丁基氢过氧化物(t-BHP)诱导异育银鲫Carassius auratus gibel原代培养肝细胞损伤模型,采用不同的给药顺序,通过检测肝细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT/GPT)、微量丙二醛(MDA)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量以及肝细胞的增殖活性,研究了五味子提取物对急性肝细胞损伤的保护作用。结果表明:以浓度为1 mmoL/L的t-BHP作用肝细胞2 h诱导肝损伤模型,加入五味子提取物后能通过提高上清液中GSH-PX和SOD酶活力以及抑制脂质过氧化产物MDA的生成来减轻t-BHP对肝细胞的损伤,减少GPT的释放,使GPT活力水平的升高受到明显抑制,显著提高了肝细胞的存活率(P<0.05或P<0.01);预防治疗组(DT)中五味子提取物对损伤肝细胞的保护效果明显要优于预防组(D)和治疗组(T)。说明五味子提取物对由t-BHP造成的肝细胞急性损伤具有一定的保护作用,该保护作用可能与其抗氧化、清除自由基的能力有关;中药与损伤剂的给予顺序会影响五味子提取物对肝细胞的保护作用。
- 曹丽萍贾睿丁炜东殷国俊
- 关键词：异育银鲫五味子提取物原代培养
- 丹参提取物对CCl_4诱导建鲤肝损伤血清和肝脏生化指标的影响被引量：5
- 2012年
- 为了研究丹参提取物对建鲤肝损伤生化指标的影响,选取体质健康、无伤的建鲤120条,随机分成6组,每组20条。5个处理组,1个对照组。每日饲喂2次,连续饲喂8周。I组(CCl4)、II组(0.5%丹参提取物)、III组(1%丹参提取物),按0.05 mL/10g体重体内注射30%CCl4;IV组(0.5%丹参提取物)、V组(1%丹参提取物)体内不注射CCl4,只注射同体积植物油;VI为空白对照组,也注射同体积植物油。注射72h后采集建鲤的血清及肝组织进行化验。结果表明:与I组(CCl4)相比,III组(1%丹参提取物)血清中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性显著降低(P<0.05);总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的活性有所增加(P>0.05);超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量显著提高,丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)含量显著提高(P<0.05)。而IV,V组的上述指标则无明显变化,这说明1%丹参提取物对于抗CCl4诱导的肝损伤有较好的效果。
- 杜金梁曹丽萍贾睿殷国俊
- 关键词：丹参提取物四氯化碳建鲤肝损伤生化指标
- 建鲤急性肝损伤模型的建立及当归提取物的保肝和抗氧化作用研究被引量：17
- 2012年
- 通过四氯化碳(CCl4)诱导建鲤Cyprinus carpio var.Jian肝损伤并建立急性肝损伤模型,以研究当归提取物(Extract from Angelica sinennsis,EAS)对肝脏组织的保护和抗氧化作用。采用CCl4腹腔注射法造模,分别测定不同时间和剂量下建鲤血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性及丙二醛(MDA)的含量,确定出建模的合适注射浓度和作用时间;用添加0.5%和1.0%(质量分数,下同)的EAS饲料,预防性喂养建鲤60 d后,通过测定鲤血清和肝脏组织中相关生化指标来观察EAS的保肝和抗氧化作用。结果表明:用体积分数为15.00%的CCl4-橄榄油一次性腹腔注射(剂量为0.1 mL/10 g体质量)建鲤72 h后,能诱导鲤血清中GPT、GOT和LDH活性显著性升高(P<0.05),MDA大量生成;投喂含0.5%和1.0%的EAS饲料均能显著抑制CCl4致建鲤血清中GOT、GPT和LDH活性的升高(P<0.05),提高血清中总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量及肝组织总抗氧化能力(T-AOC),抑制肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)水平下降;同时,0.5%的EAS还能显著恢复血清中SOD水平和肝组织中谷胱甘肽(GSH)水平,抑制MDA生成。本研究结果表明,EAS对CCl4诱导的建鲤肝组织损伤具有保护作用,该作用与EAS的清除自由基和抗氧化能力有关。
- 曹丽萍贾睿丁炜东杜金梁殷国俊
- 关键词：四氯化碳建鲤当归抗氧化
- 建鲤体内外急性肝损伤模型的建立被引量：3
- 2012年
- 以四氯化碳(CCl4)为肝毒剂,建立建鲤体内外急性肝损伤模型。体内,采用腹腔注射法造模,按0.1 mL/10g一次性分别注射0、6.25%、12.5%和15%CCl4-橄榄油溶液(v/v),于造模后24～144 h取血,测定建鲤血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平;体外,0、2、4、8、16、32 mmol·L-1CCl4分别作用于原代培养的建鲤肝细胞4 h后,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存状况,同时收集细胞培养上清,测定其GPT、GOT、LDH、MDA、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活力。结果显示,12.5%、15%CCl4-橄榄油溶液腹腔注射建鲤24 h后即能引起血清中GOT、GPT和MDA显著升高,15%CCl4溶液造模组48 h能显著提高血清中LDH水平,4个指标均在CCl4作用96 h后恢复到接近正常水平;8～32 mmol·L-1CCl4作用体外培养肝细胞4 h时,细胞上清中GPT、GOT、LDH和MDA含量显著升高、SOD和GSH活力显著下降,肝细胞存活率显著下降,分别为空白对照组的66.29%、54%和37%,且有剂量依赖性。结果表明,分别采用15%CCl4-橄榄油腹腔注射建鲤72 h和8 mmol·L-1CCl4作用体外培养肝细胞4 h可以构建体内外急性肝损伤模型。
- 曹丽萍贾睿丁炜东杜金梁殷国俊
- 关键词：四氯化碳建鲤MTT
- 玫瑰茄水提物对t-BHP诱导原代培养异育银鲫肝细胞损伤生化指标的影响被引量：10
- 2011年
- 以叔丁基氢过氧化物(t-BHP)诱导异育银鲫(Carassius auratus gibel)原代培养肝(细胞)损伤模型,采用不同的给药顺序,通过检测肝细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT/GPT)、微量丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,研究玫瑰茄水提取液(aqueous extract ofHibiseus sab-darifaL.)对急性肝细胞损伤的保护作用。结果表明:以浓度为1 mmol.L-1的t-BHP作用肝细胞2 h诱导肝损伤模型;玫瑰茄水提取液能通过提高上清中GSH-PX和SOD酶活力以及抑制脂质过氧化产物MDA的生成来减轻t-BHP对肝细胞的损伤,减少GPT的释放,使GPT活力水平的升高受到明显抑制(P<0.05或P<0.01),显示出对t-BHP造成的肝细胞急性损伤有一定的保护作用,该保护作用可能与其抗氧化,清除自由基能力有关;中药与损伤剂的给予顺序影响着玫瑰茄对肝细胞的保护作用,从对生化指标测定值的分析中可以看出,预防治疗组(DT)中玫瑰茄对损伤肝细胞的保护效果明显要优于预防组(D)和治疗组(T)。
- 曹丽萍丁炜东殷国俊
- 关键词：异育银鲫玫瑰茄原代培养
- 水飞蓟素对四氯化碳致鲫肝(细胞)损伤的保护和抗氧化作用被引量：20
- 2013年
- 为了评价水飞蓟素(Silymarin,SM)对鲫(Cyprinus carpio)肝(细胞)的保护和抗氧化作用,分别从体外和体内两个方面探讨其作用效果。在体外,利用8 mmol/L的四氯化碳(CCl4)作用肝细胞4 h构建鲫肝细胞体外损伤模型,用不同质量浓度的水飞蓟素(100、300和600μg/mL)对鲫肝细胞进行前处理(CCl4损伤前加药)、后处理(CCl4损伤后加药)和前后处理(CCl4损伤前后均加药),然后检测细胞活力和细胞上清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。在体内,用含水飞蓟素的饲料(0.1、0.5和1.0 g/kg)饲喂鲫60 d,再腹腔注射30%四氯化碳-植物油混合液,然后检测血清和肝组织匀浆中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)等生化指标。研究结果表明,水飞蓟素不同程度地抑制CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,提高SOD活性及肝细胞的存活率。体内研究发现,0.5和1.0 g/kg水飞蓟素显著降低CCl4损伤导致的血清中GPT、GOT、LDH活性升高,显著提高总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量,有效提高肝中谷胱甘肽(GSH)含量、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)含量(P<0.05或P<0.01);而0.1g/kg的水飞蓟素除了抑制LDH显著升高外,对其他指标均无效果。综合以上结果认为,水飞蓟素对鲫肝有保护作用,可防治鱼类肝(细胞)损伤,该保护作用可能与其抗氧化作用有关。
- 贾睿曹丽萍杜金梁徐跑殷国俊
- 关键词：水飞蓟素四氯化碳保肝作用肝损伤抗氧化
- 水飞蓟素对建鲤肝细胞DNA损伤的保护作用及相关细胞因子的影响被引量：6
- 2014年
- 为了评价水飞蓟素对建鲤肝组织损伤的保护作用,探索其可能的保肝机制,本研究用含水飞蓟素(0.1、0.5和1.0 g/kg)的饲料饲喂建鲤60 d,再腹腔注射30%四氯化碳(CCl4)植物油混合液,损伤72 h后采集肝组织,分别研究肝指数、肝细胞DNA损伤、肝组织病理切片、核转录因子NF-κB/C-Rel及细胞因子i NOS和IL-1β的mRNA表达量的变化。结果显示,0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4导致的建鲤肝指数增大,同时能有效减少肝细胞DNA断片的产生,对肝细胞彗星的慧尾长、尾部DNA百分含量、尾矩及Olive尾矩等损伤指标均有显著改善作用;水飞蓟素能明显减轻CCl4作用导致的肝组织广泛性空泡变性、细胞轮廓不清、核固缩和核溶解等组织学病变;0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4诱导的NF-κB/C-Rel和i NOS表达量的增加,而低、中、高浓度的药物均能显著下调IL-1β的表达量;随着水飞蓟素浓度的增大,对肝指数、肝细胞DNA损伤、病理切片及细胞因子的mRNA表达的影响均表现出剂量效应。结果表明,水飞蓟素能有效改善肝细胞DNA的损伤程度,其保肝作用可能与抑制NF-κB活化及下调其下游细胞因子i NOS和IL-1β的表达有关。
- 曹丽萍杜金梁丁炜东贾睿殷国俊
- 关键词：建鲤水飞蓟素四氯化碳核转录因子免疫因子
- 鲫鱼肝细胞分离与原代培养方法的优化被引量：5
- 2011年
- 通过不同的分离方法和培养条件探索鲫鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定的鲫鱼肝细胞原代培养模型。用台盼蓝染色检测细胞存活率;用WST-1检测细胞活力,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果显示:组织块培养4～5 d后肝细胞从组织块中迁出并增殖,但这种方法所需时间长且细胞不易收集;机械分散法收集的细胞少,细胞存活率低;而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的分离和培养效果。用0.1%胰蛋白酶消化30 min,每克肝重可收集1.47×108个细胞,平均存活率为91.43%。培养基和血清浓度均会影响肝细胞的贴壁和生长。在含有10%(V/V)胎牛血清(FCS)M199培养基中,4%CO2、28℃,肝细胞培养8～9 d后传代。
- 贾睿曹丽萍丁炜东杜金梁徐跑殷国俊
- 关键词：鲫鱼肝细胞胰蛋白酶原代培养
