国家自然科学基金(30700384)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- PLCζ在INS-1细胞中的表达及功能初步分析
- 2009年
- 目的:探讨磷脂酶Cζ(PhospholipaseCζ,PLCζ)在INS-1细胞中的表达,并初步分析PLCζ对葡萄糖刺激胰岛素分泌(Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。方法:(1)设计6类PLC的引物,RT-PCR检测INS-1细胞中各类PLC的表达。(2)设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素的含量,确定最适葡萄糖刺激浓度,设定时间梯度:20、40、60、80、120 min,以最适葡萄糖浓度刺激后ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适刺激时间。(3)用最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,半定量RT-PCR、Western Blot检测PLCζ的表达变化。结果:(1)6类PLC中PLCβ、PLCγ、PLCδ、PLCζ、PLCη在INS-1细胞中表达,PLCε不表达。(2)用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大,半定量RT-PCR、Western Blot检测葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达上调。结论:(1)先前发现在精子中特异表达的PLCζ在INS-1细胞中有表达。(2)葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达明显增加,提示PLCζ可能参与GSIS信号转导。
- 周恒宇邓华聪吴明罗娟
- 关键词：RT-PCR葡萄糖刺激胰岛素分泌
- 磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipase Cβ1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。方法设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100mmol/L,分别刺激INS-1细胞40min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120min,以最适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定最适的刺激时间。②以最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化。③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达。④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量。结果用40mmol/L葡萄糖刺激60min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01)。结论过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递。
- 周恒宇邓华聪郑宏庭蒋文南静陈丹燕
- 关键词：葡萄糖刺激胰岛素分泌过表达胰岛素瞬时转染
- 葡萄糖激酶基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达
- 2008年
- 目的构建葡萄糖激酶(GK)基因真核表达载体并于COS-7细胞内表达,为体外构建具有葡萄糖刺激性胰岛素分泌能力的基因工程细胞奠定基础。方法质粒pCMV4-GKZ1以EcoRI、BamHI双酶切,获得GK cDNA,与同样酶切的pcDNA3.1载体连接,建成重组载体pcDNA3.1-GKZ1,经酶切与测序鉴定。Lipofectamine2000介导pcDNA3.1-GKZ1转COS-7细胞,分别以RT-PCR及Western-blot对COS-7/GKZ1细胞中GKZ1基因的转录及表达进行检测。结果构建的pcDNA3.1-GKZ1重组载体经酶切有1450 bp的GKZ1 cDNA,序列经测序证实。COS-7/GKZ1细胞RT-PCR扩增出498 bp的目的片段,Western-blot可见54 kDa的特异性条带,而COS-7/pcDNA3.1细胞上述各项检测结果均为阴性。结论成功构建GK基因真核表达载体pcDNA3.1-GKZ1,并于COS-7细胞中成功转录与表达。
- 郑宏庭苏白海方芳
- 关键词：葡萄糖激酶COS-7细胞基因表达
- Bmi-1调节干性相关分子转录的初步分析被引量：3
- 2009年
- 目的探讨Bmi-1对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子转录表达的影响。方法分别构建鼠源和人源Bmi-1过表达载体pCI-GFP-mbmi1和pCI-GFP-hbmi1;瞬时转染鼠ES细胞CCE和人神经胶质瘤细胞U87;半定量RT-PCR检测胚胎干细胞中Oct-4、Nanog、c-Myc、Klf4和Sox2及肿瘤细胞中CD133、Nestin等干性分子的表达;克隆形成实验检测CCE细胞自我更新克隆形成能力。结果瞬时转染Bmi-1过表达载体后,CCE细胞中Nanog的表达上调,Oct-4、Sox2和Klf4的表达无明显变化;U87细胞中Nestin和Oct-4表达上调,CD133、Nanog变化不明显;两者c-Myc的转录表达均显著降低;过表达Bmi-1促进CCE细胞自我更新克隆形成。结论Bmi-1参与了对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子的转录调节。
- 阮艳蹇锐程小星牛翰婕周恒宇郑宏庭胡福泉
- 关键词：BMI-1干细胞转录调控
- 磷脂酶C与葡萄糖刺激的胰岛素分泌被引量：1
- 2009年
- 磷脂酶C（phospholipase C，PLC）是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶，在体内分布极为广泛。许多细胞外信息分子，如激素、神经递质、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以激活磷脂酰肌醇特异性PLCs。至今已鉴定出15种PLCs亚型。而每种PLCs亚型的特异分布和独特生理作用使得近年来对PLCs亚型的结构、功能、活化机制的研究成为热点。
- 周恒宇邓华聪蹇锐阮艳袁媛郑宏庭
- 关键词：磷脂酶C胰岛素分泌磷脂酰肌醇免疫球蛋白信号通路信息分子
