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凝胶层析和离子交换层析结合法纯化重组降血压肽VLPVPR被引量：3: 2014年; 为了提高VLPVPR的纯度,采用凝胶层析结合离子交换层析的方法对VLPVPR进行纯化。先用Sephadex G-10凝胶对VLPVPR溶液脱盐,再考察离子交换剂(SP Sepharose Fast Flow和Q Sepharose Fast Flow)对重组降血压肽VLPVPR的纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。实验结果表明SP Sepharose Fast Flow不适于VLPVPR的纯化。采用Q Sepharose Fast Flow的纯化工艺为:上样量为柱床体积的10%,用10mmol/L pH9.0的CHES缓冲液洗脱,流速为1mL/min。VLPVPR回收率为93.8%,纯度达到47.2%。采用Q Sepharose Fast Flow纯化提高了VLPVPR的纯度。; 李艳孙海燕周丽珍刘冬; 关键词：纯化凝胶层析离子交换层析

重组血管紧张素转化酶抑制肽工程菌细胞破碎条件优化被引量：1: 2014年; 以重组血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP）工程菌E.coli BL21（pGEX-4T-2-AHP）破碎率、破碎液中目的融合蛋白浓度（GST-AHP）为主要考察指标,对重组血管紧张素抑制肽工程菌破碎条件进行了优化。结果表明,其最佳工艺条件为每克湿菌体重悬于3 mL含有2 mmol/L EDTA的1×PBS缓冲液中,加溶菌酶至终浓度20 000 U/mL,室温放置30 min后超声破碎30 min,4℃10 000 r/min离心10 min取上清液。在此最佳工艺条件下破碎液中可溶性GST-AHP浓度达到1.83 g/L。; 李艳孙海燕周丽珍刘冬; 关键词：COLI

响应面法优化超声波提取玉米醇溶蛋白工艺被引量：11: 2012年; 利用响应面法对玉米黄粉中醇溶蛋白的提取工艺进行优化。根据中心组合试验设计原理采用4因素5水平响应面分析法,对各个因素的显著性和交互作用进行分析。结果表明:玉米醇溶蛋白超声提取的最佳条件为超声时间27 min、超声功率480 W、乙醇体积分数70%、液料比10:1(mL/g),该条件下玉米醇溶蛋白提取率可达70.71%,纯度为90.33%。; 李娜刘冬徐怀德高丽霄李艳; 关键词：玉米黄粉玉米醇溶蛋白超声提取响应面法

大孔吸附树脂纯化重组降血压肽VLPVPR的研究被引量：4: 2014年; 考察大孔吸附树脂(DA201-CⅡ,D4020和HPD100B)对重组降血压肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。通过大孔树脂静态吸附解吸及动态吸附解吸实验,结果表明DA201-CⅡ最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:样品pH9.8,上样流速为2mL/min,上样量为100mL,70%乙醇洗脱75mL,洗脱流速为2.7mL/min。该条件下VLPVPR的回收率为96.9%,纯度为27.4%。; 李艳孙海燕周丽珍刘冬; 关键词：大孔吸附树脂纯化

大孔树脂纯化血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的工艺优化被引量：3: 2014年; 考察大孔树脂(AB8,D101,DM130,HPD100B,HPD826)对血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的较优工艺。结果表明,HPD100B最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:温度20℃,pH9.8,上样流速为3mL/(cm2·min),上样量达到180mL,洗脱液乙醇溶液浓度为60%,洗脱流速为0.25mL/(cm2·min),洗脱体积为45mL。此条件下,VLPVPR的解吸率达93.1%,纯度为28.8%,血管紧张素酶抑制率IC50为4.1μmol/L。; 李艳孙海燕周丽珍刘冬; 关键词：血管紧张素酶抑制剂大孔树脂纯化

膜技术分离纯化花生蛋白酶解液制备活性短肽被引量：5: 2014年; 对膜技术在花生蛋白酶解液分离纯化应用的工艺进行了研究。考察了超滤膜截留相对分子质量（1、3、5 kDa）、超滤压力（0.086、0.121、0.157、0.193 MPa）、超滤温度（30、35、40、45℃）、超滤加水量（0.5-5.5倍）对超滤效果的影响,以及考察加水次数（1-12次）对纳滤脱盐效果的影响。结果表明：超滤操作的最适工艺为用截留相对分子质量为1 kDa的超滤膜,在超滤压力0.193MPa、超滤温度45℃的条件下进行恒体积超滤,加水量以加入3倍水为最适,此时短肽透过率可达65.01%,透过液中短肽的相对分子质量主要分布在283-402 Da之间;纳滤操作在纳滤温度为常温（20℃）、纳滤压力为1.5 MPa的条件下进行,采用间歇式恒容纳滤方式,最适加水次数为10次,此时Na＋脱除率为（69.78±0.69）%,短肽损失率仅为2.00%。采用最适的先超滤、后纳滤联用工艺制备的花生短肽液经冻干后,冻干粉对ACE的IC50为0.78 mg/mL,体外抗氧化活性为ORAC值（以Trolox计）（2 359.50±40.43）μmol/g,表明短肽同时具有较强的ACE抑制活性和体外抗氧化活性。; 周丽珍李艳孙海燕唐旭蔚从彦丽万红霞刘冬; 关键词：膜分离纳滤酶解液血管紧张素转化酶

玉米醇溶蛋白高水解度酶解制备短肽被引量：3: 2015年; 以高水解度水解蛋白为目标,对酶解玉米醇溶蛋白制备短肽的工艺进行了研究。选择了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶,采用均匀试验设计法对三种酶的酶解工艺进行了考察,同时还对复合酶水解、理化前处理技术的作用进行了探讨。实验结果对三种酶的酶解工艺条件进行了优化;明确了三种酶复合水解时,得到的水解度均显著高于单酶水解结果,且其中以"碱性蛋白酶+中性蛋白酶+胃蛋白酶"顺序的复合酶组合得到的水解度最高达(29.95±0.87)%;考察的加热、添加亚硫酸钠、超声等三种理化前处理技术,对玉米醇溶蛋白水解度没有明显的影响。总而言之,应用合适的蛋白酶及酶解方式,玉米醇溶蛋白水解制备短肽,可以达到较高的水解度。; 刘冬周丽珍李艳孙海燕唐旭蔚从彦丽万红霞; 关键词：酶解玉米醇溶蛋白水解度

高温花生粕中花生蛋白提取工艺研究被引量：9: 2012年; 采用碱溶酸沉法,并结合匀浆、超声和纤维素酶等前处理从高温花生粕中提取花生蛋白。由正交回归实验得到碱溶酸沉提取最佳条件为:碱溶温度为60℃、pH9.5、料液比1:8(m/v),在此条件下搅拌浸提120min后,提取率为64.2%。匀浆或超声前处理均可增加蛋白提取率,超声处理后提取率增加尤为显著,提高了12.3%,而纤维素酶前处理则对提取率无显著作用。; 高丽霄刘冬徐怀德李娜李艳; 关键词：高温花生粕碱溶酸沉前处理

酶法水解花生蛋白制备短肽及其降血压活性试验被引量：6: 2015年; 对酶法水解花生蛋白制备高水解度短肽的工艺进行研究。选用碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶分别对单酶水解工艺、复合酶水解工艺及前处理条件进行考察。研究发现：单酶水解优化工艺虽可达到较高水解度（27.85%、23.40%）,但水解时间长（386.25、382.68 min）、底物质量浓度低（1.09、1.07 g/100 mL）;所考察的前处理技术中除亚硫酸钠前处理外,热处理、超声处理条件对水解度无显著影响。研究得到理想的酶法水解条件为：以花生蛋白（质量浓度为5 g/100 mL）为原料,先用亚硫酸钠（质量浓度为0.07 g/100 mL）进行前处理;随后进行复合酶酶法水解,调整料液体系至pH 8.0、温度50℃,按加酶量为7 429.79 U/g加入碱性蛋白酶,水解120 min,随后将料液体系调至pH 6.8、温度45℃,按加酶量为7 642.50 U/g加入菠萝蛋白酶,水解120 min,测得蛋白质水解度为（33.21±0.70）%。通过对原发性高血压大鼠的作用试验表明,灌胃剂量在1 000-1500 mg/kg（按体重计）时,给药4 h后,大鼠收缩压显著降低,降压效果可持续8 h,表明酶法水解产物（花生短肽）有明显的降血压效果。; 刘冬周丽珍李艳孙海燕唐旭蔚从彦丽万红霞; 关键词：酶法水解短肽降血压花生蛋白原发性高血压大鼠

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广东省科技计划工业攻关项目(2011B010500006)

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