国家科技支撑计划(2006BAI19B05-3)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王园园徐东刚王嘉玺邹民吉刘中成更多>>
- 相关机构：军事医学科学院河北大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- pIRES2-EGFP-IL-1ra-Fcε真核表达载体的构建及鉴定被引量：4
- 2008年
- 采用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因,利用重叠延伸PCR技术构建IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,以脂质体法转染293T细胞,同时采用气管滴注方式滴注大鼠肺部。经Western blot、RT-PCR及荧光显微镜观察此融合基因在293T细胞及大鼠肺组织中实现了表达,为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。
- 刘中成王园园邹民吉王嘉玺徐东刚
- 关键词：转染真核表达
- IL-1ra-Fcε融合分子的构建及其在293T细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:构建IL-1ra-Fcε融合基因的真核表达载体pCI-neo-IL-1ra-Fcε,研究其在体外的表达情况。方法:利用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆大鼠IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因。利用重叠延伸PCR技术合成了IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pCI-neo,以脂质体法转染293T细胞,G418筛选稳定表达细胞株。利用Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白的表达,并在EL-4/CTLL-2细胞中对融合蛋白活性进行了验证。结果和结论:成功构建了pCI-neo-IL-1ra-Fcε表达载体,Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白在293T细胞得到表达,并获得了稳定表达IL-1ra-Fcε的细胞株。表达的融合蛋白在体外具有拮抗IL-1的功能。为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。
- 刘中成王园园邹民吉王嘉玺徐东刚
- 关键词：转染真核表达
- 白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠过敏性哮喘的治疗作用及相关机制研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1ra）对大鼠过敏性哮喘的治疗作用及相关机制。方法雌性SD大鼠分为正常对照组、哮喘模型组、哮喘模型低剂量IL-1ra（6mg／kg）治疗组（低剂量治疗组）和高剂量IL-1ra（30mg／kg）治疗组（高剂量治疗组），每组10只。采用卵白蛋白腹腔及皮下注射致敏加雾化吸入激发的方法建立大鼠过敏性哮喘模型。激发前尾静脉注射不同剂量的IL—1ra。通过检测各组大鼠肺功能、肺泡灌洗液（BALF）炎性细胞构成、肺组织病理切片、血清总IgE含量等指标评价治疗效果，利用半定量RT—PCR检测信号转导子和转录激活子6（STAT6）mRNA以及核因子KB（NF-κB）mRNA表达情况。结果哮喘模型组大鼠呼吸速率[（206±11）次／min]、呼气流量[（77±8）μl/s]、BALF嗜酸粒细胞比例（24．8％±1．3％）、血清总IgE含量[（72．5±8．1）ng／ml]、STAT6表达（0．294±0．048）和NF-κB表达（0．686±0．052）均明显高于低剂量治疗组[分别为（183±9）次／min，（64±5）μL／s，18．5％±3．1％，（63．4±4．8）ng／ml，0．229±0．038，0．613±0．062，均P〈0．05]和高剂量治疗组[分别为（181±11）次／min，（57±4）μl／s，14．7％±2．1％，（41．4±7．8）ng／ml，0．194±0．076，0．352±0．267，均P〈0．05]。高剂量治疗组治疗效应优于低剂量治疗组（P〈0．05）。肺组织病理检查与以上结果相近。结论IL-1ra对大鼠过敏性哮喘具有明显的治疗效果，这种作用可能是通过同时调控STAT6 mRNA和NF-κB mRNA的表达实现的。
- 刘中成王园园邹民吉王嘉玺徐东刚
- 关键词：哮喘受体白细胞介素1细胞内信号肽和蛋白质类NF-ΚB
- IL-1ra-Fcε融合基因的克隆、表达及鉴定被引量：1
- 2008年
- 白细胞介素-1与免疫球蛋白E在过敏性哮喘发病中发挥着重要作用。本试验克隆了白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)及IgE分子恒定区cDNA片段,构建了融合基因原核表达载体IL-1ra-Fcε/pBV220。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了融合蛋白的高效表达,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白,主要以包涵体形式存在;利用分子筛和阳离子交换层析对表达产物经进行了纯化,纯化的包涵体复性后经体外功能试验表明,融合蛋白的活性与IL-1ra没有显著性差异;初步药代动力学分析显示IL-1ra-Fcε半衰期比IL-1ra延长了4.78倍。
- 刘中成邹民吉王园园王嘉玺徐东刚
- 关键词：融合基因半衰期
