中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金(2013A0606)
- 作品数：2 被引量：41H指数：2
- 相关作者：曾令兵徐进范玉顶张辉马杰更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院长江水产研究所更多>>
- 发文基金：中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：18
- 2013年
- 针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒。经PCR鉴定与测序分析确认正确后,以10倍梯度稀释重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了鲤疱疹病毒Ⅱ型的荧光定量PCR检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.999 1,斜率为-3.412;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×107copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出鲤疱疹病毒Ⅱ型,而对大鲵虹彩病毒(GSIV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)以及空白对照无检测信号。取江苏射阳和宝应两地疑似患病鲫组织核酸作为模板进行荧光定量PCR,结果表明反应体系中的病毒量分别为6.89×104copies/μL和3.02×102copies/μL。本研究建立的鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对因鲤疱疹病毒Ⅱ感染引起的养殖鲫造血器官坏死症的诊断与病毒病原定量检测有重要意义。
- 周勇曾令兵张辉范玉顶徐进
- 关键词：TAQMANREAL-TIMEPCR
- 鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用
- 针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1 446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒...
- 周勇曾令兵张辉范玉顶徐进
- 关键词：鲫鱼
- 文献传递
- 鲤疱疹病毒2型武汉株的分离与鉴定被引量：31
- 2013年
- 采用细胞培养、超薄切片电镜观察、巢式PCR检测以及病毒DNA克隆与测序分析等技术。从湖北武汉一循环水养殖系统中患出血病异育银鲫（Carassius auratusgibelio）体内分离鉴定了一株鲤疱疹病毒2型（Cyprinid herpesvirus2，CyHV-2）病毒，命名为鲤疱疹病毒2型武汉株（CyHV-2．WH）。患病鱼组织匀浆液接种锦鲤鳍条细胞系（Koi．Fin）可产生典型的细胞病变效应。用患病鱼组织匀浆液与细胞培养物分别人工感染异育银鲫，均可重复出与自然发病相同的症状，死亡率达100％。患病鱼脾与肾脏组织超薄切片电镜观察结果显示，病毒为具囊膜的球形病毒，囊膜直径为170-200am，病毒衣壳直径为110～120nm，病毒在细胞核内复制、组装。采用CyHV-2的特异引物对病鱼样本和感染细胞培养物样本进行巢式PCR检测，均能扩增出357bp的目的条带，将该扩增产物进行测序与比对分析后发现，其与GenBank中已报道的CyHV-2毒株的DNA解旋酶基因高度同源（99．44％以上）。与鲤疱疹病毒3型（CyHV-3）也有较高的同源性（81．55％）。系统进化分析结果显示，CyHV-2．WH株与JS2012、H．Fukuda、YCll0907等CyHV-2病毒株属同一分支。
- 徐进曾令兵杨德国张辉马杰江南范玉顶
- 关键词：异育银鲫病毒分离病毒鉴定
