深圳市科技计划项目(200602060) 作品数:5 被引量:17 H指数:3 相关作者: 桂耀庭 蔡志明 唐爱发 余振东 郭新 更多>> 相关机构: 北京大学深圳医院 中山大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 深圳市科技计划项目 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
PigM基因在小鼠中的表达及其在精子发生中的功能探讨 被引量:4 2006年 目的筛选与精子发生相关的基因。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸及小鼠不同组织中的表达。结果通过4、91、8、35、54、日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达杂交点(GenBank登录号:NM-026234),生物信息学分析发现该基因全长3 979 bp,含有1 272 bp的完整ORF,编码一个有423个氨基酸、分子量为49.788的蛋白质。PigM蛋白与大鼠同源基因PigM蛋白有96%的同源性,与人PigM蛋白有89%的同源性,显示该基因在哺乳动物中高度保守。RT-PCR分析表明PigM基因特异性表达于睾丸组织及18日龄后的小鼠睾丸中。结论PigM基因的表达与小鼠精子发生的过程一致,显示其可能在精子发生中起着重要作用。解释该基因的生物学功能,可对揭示人类无精、弱精和少精引起的男性不育的病因,治疗和预防男不育及寻找新的男子避孕药的靶位点具有重要意义。 唐爱发 余振东 桂耀庭 郭新 张立兵 张键荣 刘春霖 蔡志明关键词:基因芯片 精子发生 睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析 被引量:3 2007年 目的筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织及人不同组织中的表达。结果通过4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因(GenBank登录号:AK016041),全长有803bp,含有606bp的完整ORF,编码一个有201氨基酸、分子量为22.686kDa的蛋白质,我们将其命名为TSC23。亚细胞定位预测显示TSC23基因可能在细胞核中表达。SMART功能域分析表明氨基酸序列1~18区域为信号肽功能域,36~58区域为穿膜功能域。TSC23蛋白在人的同源基因GenBank登录号为XM-371248,在201个氨基酸区域内有75%的同源性。RT-PCR分析表明TSC23基因特异性表达于人和小鼠睾丸组织中,且只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达。结论TSC23为人和小鼠睾丸特异性表达基因,只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达,提示其可能在精子发生中起着重要作用。 余振东 蔡志明 唐爱发 桂耀庭关键词:基因芯片 克隆 精子发生 RT-PCR SPACA4基因在人和小鼠的表达及其生物信息学分析 被引量:1 2007年 目的 分析SPACA4在小鼠和人的表达特性.方法 本研究通过对小鼠SPACA4基因(mSPACA4)在4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸中的Affymetrix芯片杂交,结合RT-PCR实验和生物信息学软件,分析mSPACA4及其同源基因hSPACA4的表达特性.结果 芯片杂交结果显示,mSPACA4基因在小鼠35d睾丸中开始表达,半定量RT-PCR结果与之完全一致.RT-PCR结果还显示,mSPACA4和hSPACA4分别在8种小鼠组织和10种人组织中呈现睾丸特异性表达.生物信息学分析显示,亚细胞定位预测该基因是跨膜蛋白(34.8%)或质膜上(34.8%)表达.mSPACA4蛋白的信号肽剪切位点在第19~20个氨基酸之间,跨膜区在第2~20及101~126个氨基酸之间.结论 mSPACA4和hSPACA4均为睾丸特异性表达基因,mSPACA4特异性地在35d龄后的小鼠睾丸中表达,SPACA4具有作为男子避孕药的靶点进行研究的潜在价值. 唐爱发 余振东 桂耀庭 郭新 龙云 李贤新 周锦堂 朱辉 高新 蔡志明关键词:基因芯片 精子发生 新基因TSBAG的生物信息学分析及其在小鼠睾丸组织中的表达 被引量:9 2007年 目的:筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法:将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,通过杂交信号的比较,筛选出差异表达的基因。用生物信息学软件对该基因进行生物信息学分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织中的表达。结果:通过4日龄、9日龄、18日龄、35日龄、54日龄和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达功能未知的新基因(GenBank登录号:BC049770),全长891 bp,含有702 bp的完整ORF,编码一个233个氨基酸、相对分子量为26.938 kD的蛋白质,我们将其命名为TSBAG(testis-specific BAG-like protein)。亚细胞定位预测显示,TSBAG基因可能在细胞核中表达。EBI功能域预测发现,在蛋白质序列8-62处有一个BAG功能域。RT-PCR分析表明,TSBAG基因特异性表达于小鼠睾丸组织中且具有时序性表达。TSBAG蛋白在人的同源基因GenBank登录号为AY349359,在233个氨基酸区域内有83%的同源性。结论:TSBAG基因在小鼠睾丸组织中特异性表达,且与小鼠精子发生过程一致。 余振东 唐爱发 桂耀庭 张立兵 张键荣 郭新 蔡志明关键词:基因芯片 精子发生 RT-PCR 新基因TSC21的生物信息学分析及其原核载体构建表达 被引量:3 2007年 目的用生物信息学分析新基因TSC21并进行蛋白表达及纯化。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交并筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。运用RT-PCR分析该基因小鼠不同组织及人不同组织中的表达。对人的TSC21基因进行cDNA克隆、蛋白表达及纯化。结果通过不同日龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因(GenBank登录号:NM-028825),全长有810bp,含有543bp的完整ORF,编码一个有180个氨基酸、分子量为21.040kDa的蛋白质,我们将其命名为TSC21。亚细胞定位预测显示TSC21基因可能在细胞核中表达。基因功能域预测表明在氨基酸34-40处有CK1和CK2磷酸化位点,在氨基酸100-106处有PKA(cAMP-dependent protein kinase A)磷酸化位点。RT-PCR分析表明TSC21基因特异性表达于小鼠睾丸组织。TSC21蛋白在人的同源基因GenBank登录号为NM-152670,在180个氨基酸区域内有82%的同源性,人TSC21(hTSC21)基因特异性地表达于人睾丸组织中。成功构建PET-28a2c(+)vector/hTSC21表达载体,并转化BL21,以IPTG诱导蛋白表达,对诱导剂浓度、诱导时间进行优化后以镍离子亲和层析纯化目的蛋白。结论TSC21基因在小鼠及人的睾丸组织中特异性表达并具有高度同源性,显示其可能在精子发生中起着重要作用。所得人TSC21蛋白可进行其蛋白结构活性、睾丸组织中的定位分布及在男性不育等疾病检测的研究。 余振东 唐爱发 吴波 桂耀庭 张立兵 郭新 蔡志明关键词:克隆 精子发生 RT-PCR