国家高技术研究发展计划(2006AA100308)
- 作品数：41 被引量：176H指数：7
- 相关作者：刘志刚石存斌吴淑勤林天龙吴海强更多>>
- 相关机构：深圳大学中国水产科学研究院珠江水产研究所福建省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划深圳市科技计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 东亚飞蝗消化系统蛋白质组双向电泳的分析被引量：4
- 2012年
- 为了优化东亚飞蝗消化系统双向电泳技术,建立东亚飞蝗消化系统蛋白表达图谱,探讨雌、雄东亚飞蝗消化系统蛋白组分的差异,利用pH值为3~10和pH值为4~7的胶条分别对雌、雄东亚飞蝗消化系统进行双向电泳分析,进行蛋白组学分析.研究结果发现：雌性东亚飞蝗消化系统蛋白种类多于雄性,雌性东亚飞蝗消化系统特异蛋白中偏酸性蛋白数量与偏碱性蛋白相当,而雄性东亚飞蝗消化系统特异蛋白中酸性蛋白多于碱性蛋白.在雌、雄东亚飞蝗消化系统相匹配蛋白中,含量差异达3倍以上的蛋白约占总匹配蛋白的50%.可见,雌、雄东亚飞蝗消化系统蛋白组分存在差异.
- 李燕良邬玉兰闫浩杨芷菁陈义坤刘志刚
- 关键词：东亚飞蝗蛋白组分双向电泳
- 点带石斑鱼过敏原分离、鉴定与纯化被引量：1
- 2009年
- 目的对点带石斑鱼的主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法通过十二烷基硫酸钠-聚丙炳酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离点带石斑鱼的蛋白质组份,采用免疫印迹(Western-blotting)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对主要过敏原进行初步纯化。结果SDS-PAGE结果显示,点带石斑鱼粗提液含有13条蛋白带,含量高的有8条,分子量分别为43,34,28,25,22,17,15,9kD;Western-blotting显示,对点带石斑鱼过敏患者的阳性混合血清能与其中4个蛋白条带起反应,分子量分别为34,28,24,22kD。离子交换层析可初步纯化出22kD的过敏原蛋白。结论初步分离得到分子量为22kD的点带石斑鱼主要过敏原,为临床诊断和治疗鱼类过敏性疾病提供理论依据。
- 吴序栎吉坤美黄艳君刘志刚
- 关键词：点带石斑鱼免疫印迹离子交换层析
- 点带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆点带石斑鱼hepcidin前体cDNA序列,构建其成熟肽pET-32a融合表达载体。结论根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物,以点带石斑鱼(Epinephelelus malabaricus)肝脏为材料,通过RT-PCR扩增hepcidin cDNA序列,用比对推导的氨基酸序列预测其成熟肽段。再将成熟肽cDNA序列亚克隆至pET-32a构建原核表达并进行原核融合表达。结果获得点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列1条,GenBank登录号为HM474788。DNA序列的Blast分析以及推导氨基酸序列NJ进化树分析表明,HM474788是点带石斑鱼第1条报道的抗菌肽hepcidin cDNA序列。成功构建了该序列的成熟肽原核融合表达载体pET-32a-hepcidin(EM1),并成功在大肠杆菌origami(DE3)中表达。结论成功克隆点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列,成熟肽成功在大肠杆菌中融合表达,为后续有关石斑鱼hepcidin的功能研究与实践应用奠定重要基础。
- 陈大玮邓利李荔彭永鹤刘志刚
- 关键词：点带石斑鱼抗菌肽HEPCIDIN分子克隆原核融合表达
- 哈氏弧菌外膜蛋白与溶藻弧菌脂多糖偶联疫苗的效果研究被引量：5
- 2007年
- 采用十二烷基肌氨酸钠法提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)SpGY020601株的外膜蛋白(OMPC),采用酚水法提取溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)EpGS021001株的脂多糖(LPS)。通过碳化二亚铵(EDC)介导的缩合反应,将哈氏弧菌的OMPC与溶藻弧菌的LPS偶联。OMPC-LPS偶联物、未偶联的哈氏弧菌OMPC、溶藻弧菌LPS、哈氏弧菌OMPC和溶藻弧菌LPS的简单混合物以及生理盐水按相同程序免疫卵形鲳(Trachinotus cvatus)。检测血清溶菌酶活性、血清抗体微量凝集反应结果显示,卵型鲳经OMPC-LPS偶联物、OMPC、LPS以及二者的简单混合物免疫后,各免疫组间血清溶菌酶活性没有显著差异(P>0.05),但均显著高于生理盐水对照组(P<0.05);OMPC-LPS偶联物免疫组的血清抗溶藻弧菌EpGS021001抗体效价较单纯溶藻弧菌LPS免疫组、简单混合物免疫组出现得早,抗体滴度高;与此类似,OMPC-LPS偶联组中抗哈氏弧菌SpGY020601的血清抗体效价较单纯哈氏弧菌OMPC组、简单混合组出现得早,抗体滴度高,且持续时间长;对EpGS021001、SpGY020601的攻击,OMPC-LPS偶联物免疫组的保护率分别为85%和95%,高于单纯溶藻弧菌LPS免疫组的70%、单纯哈氏弧菌OMPC免疫组的75%,也高于简单混合物免疫组的80%和82.5%。
- 李华石存斌钱永华潘厚军吴淑勤
- 关键词：溶藻弧菌哈氏弧菌外膜蛋白脂多糖
- 斜带石斑鱼口服PELA-OmpK微球疫苗的示踪及免疫效果被引量：14
- 2008年
- 采用可生物降解的合成高分子聚DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide–co–polyethylene glycol,PELA),包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK后,制备成PELA-OmpK微球。微球粒径小于10μm,且94%粒径小于5μm,平均粒径为2.8μm。蛋白包裹率达79.4%。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)口灌四甲基异硫氰酸罗达明(TRITC)荧光素标记的OmpK-PELA微球后,第1天在其后肠观察到大量红色荧光微球,第3天荧光微球数量明显减少,第7天荧光微球基本消失。免疫组化研究结果表明,口服PELA-OmpK组在斜带石斑鱼后肠组织黏膜层可见较强的棕黄色阳性着色。口服PELA-OmpK组血清抗体效价(峰值210)显著高于口服OmpK蛋白溶液组(峰值24)与对照组(P<0.05),低于注射组(峰值212)(P<0.05);口服PELA-OmpK组的黏液抗体效价显著高于口服OmpK蛋白组(P<0.05)。初次免疫30d后用活菌攻击,口服PELA-OmpK组的相对保护率(62.5%)显著高于口服OmpK蛋白组(12.5%)(P<0.05);低于注射组(87.5%)(P<0.05)。结论为采用可生物降解材料PELA作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的。
- 张小江任燕常藕琴石存斌李宁求吴淑勤
- 关键词：口服疫苗示踪免疫效果
- 紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因克隆及序列分析被引量：5
- 2008年
- 目的克隆紫红笛鲷(Lutianus argentimaculatus)过敏原小清蛋白(parvalbumin)基因。方法采用生物信息学方法对多种鱼的小清蛋白基因进行序列性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过实时(RT)-PCR和3′cDNA末端快速扩增RACE技术克隆紫红笛鲷小清蛋白的全长基因,并进行序列分析。结果获得紫红笛鲷全长608 bp的新基因,开放阅读框为330个碱基,编码109个氨基酸,经分析该蛋白分子量约为11.5kD,等电点为4.35。序列分析结果显示所克隆的基因与其他鱼类过敏原小清蛋白基因有很高的同源性。结论成功克隆出紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因(登录号为:EF591789)。
- 李荔吴曾闵刘志刚
- 关键词：紫红笛鲷过敏源小清蛋白基因克隆
- 带鱼过敏原的分离、鉴定与纯化被引量：5
- 2008年
- 目的分离、鉴定和纯化带鱼特异性过敏原。方法采用Coca′s提取液提取带鱼蛋白;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting分析其中的过敏原;阴离子交换层析对过敏原进行分离纯化。结果带鱼粗浸液蛋白分子量在8～130kDa之间;Western-blotting检测到分子量为12、18、25、27、29、34、38、54和60kDa的过敏原蛋白;通过离子交换层析分离得到较纯的分子量为18、38kDa的过敏原蛋白,且具有免疫活性。结论发现了带鱼中多种过敏原,并对2种过敏原分离纯化,为带鱼过敏的诊断和治疗奠定了理论基础。
- 杨睿吴海强刘志刚
- 关键词：带鱼
- 拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析被引量：5
- 2011年
- 从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉.
- 徐栋梁李洁颖彭永鹤夏立新刘志刚
- 关键词：拟穴青蟹抗菌肽纯化抑菌活性
- 斜带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达被引量：11
- 2011年
- 文章根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物，通过RT—PCR从重要海水经济鱼类斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）肝脏中扩增出1条具有完整开放阅读框的246bpcDNA序列，Blast分析表明该序列是鱼类hepcidin基因家族的一员，被命名为斜带石斑鱼hepcidin样抗菌肽前体，该cDNA所推导的氨基酸序列有如下特点：1）信号肽序列与多数鱼类hepcidin信号肽的同源性在67％～87％之间；2）C端20个氨基酸序列具有绝大多数动物hepcidin成熟肽的共同典型保守序列特征，即在对应位置具有8个Cys；3）序列中不具有已报道的hepcidin前体肽转化酶作用典型基序[RX（K／R）R]；4）与GenBank中已注册的2条斜带石斑鱼hepcidincDNA序列（GU391241和GU391242）所推导的氨基酸序列同源性分别为36％和33％，且NJ进化树显示不与这2条序列聚为一枝，表明该序列是斜带石斑鱼hepcidin基因家族中一种新亚型，其预测成熟肽融合表达载体成功在大肠杆菌（Escherichiacoli）中表达，为后续研究奠定基础。
- 陈大玮邓利刘志刚孟铂渊马一见
- 关键词：斜带石斑鱼抗菌肽HEPCIDIN分子克隆原核融合表达
- 创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析被引量：17
- 2010年
- 创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌,属于弧菌属第5群,主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内[1]。根据寄主范围和生化反应类型的不同,将创伤弧菌分为3个生物型：生物Ⅰ型（产吲哚）[2]、生物Ⅱ型（不产吲哚）[3]以及1999年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物III型。
- 田丁许斌福林能峰龚晖林天龙
- 关键词：创伤弧菌外膜蛋白欧洲鳗鲡免疫刺激复合物免疫保护性
